中药的指纹图谱研究
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3
基本属性：整体性和模糊性 。即：多个成 分以相对稳定的比例及位置顺序的完整性 特征；在共同特征的基础上个体之间又互 有差异的模糊性特征。
特点：不要求对每个峰进行归属，不要求 知道每个组分的化学结构，也不需要对每 个组分精确定量，但要求图谱具有系统性、 特征性、稳定性。
4
建立指纹图谱的目的和意义
首先考察模式指纹图谱上的各共有峰能否 在样品图谱中找到（必须都能找到，这是 定性），然后再算出各共有峰的相对峰面 积，按以下标准评价：
23
1、中药材
共有峰类别 样品图谱与模式指纹图谱比较 (单峰与总峰面积比) (面积比允许的差值)
≥20% 10%≤A%＜20% ＜10%
≤±20% ≤ ±25% 不作要求(但要标定 其相对保留时间）
14
三、历史沿革与发展趋势
指纹图谱分析是中药鉴别技术的循序发展和延伸。
90年版 《中国药 85年版《中 典》，TLC 国药典》， 增加了对 对照品对照 照药材 20 世纪 70 的TLC 年 代 ， TLC 初 步 尝试
95年版 《中国药 典》后提 出中药指 纹图谱的 概念
15
三、历史沿革与发展趋势
是保证中药和中药制剂内在质量均一性的
重要措施；
是鉴别中药和中药制剂真伪优劣最有说服
力的依据之一；
是中药走向世界的必经之路。
5
指纹图谱分类
中药材(原料药材) 中药原料药(饮片、配方颗粒) 应用对象 中药中间体(生产过程中间产物) 中药制剂
ห้องสมุดไป่ตู้
中药化学指纹图谱 测定方法 中药生物指纹图谱
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1
34
6
7
910 11
21
t / min
各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。 未达基线分离的共有峰，应计算该组峰的总峰面积 作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。 中药材或饮片供试品的图谱与指纹图谱比较，共有 指纹峰以外的，相对保留值不同者，即为非共有峰。
22
样品图谱与模式（标准）指纹图谱比较 的评价标准
18
第三节
分析及评价方法
一、重要参数的建立 二．特征指纹的相似率与差异率 三、指纹图谱的计算机解析
19
一、重要参数的建立
共有指纹峰
n强峰
特征指纹峰
20
1．共有指纹峰
中药指纹图谱中，多个样品所具有的相同相对保留值 的色谱峰，即为共有指纹峰。 根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间， 根据10批次以上供试品的检测结果，标定共有指纹峰。 以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作 为 1，计算各共有指纹峰面积与参照峰面积的比值； 以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中 其中一个峰(要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰) 的峰面积作为 1，计算其它各共有指纹峰面积的比值。
6
图一 荆芥穗顶空气相对照指纹图谱
图二 香薷顶空气相色谱图
图三 荆芥顶空气相对照指纹图谱
图四 紫苏顶空气相色谱图
7
指纹图谱-丹皮
0.40 0.35 0.30
0.25
0.15
0.10
0.05
0.00
-0.05 250.00 300.00 350.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 分钟 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00 70.00
牡丹皮炭品3D扫描图
9
AU
10
不同厂家不同批次清开灵注射液IR指纹图谱比较
厂家A批次1
厂家A批次2
厂家B
11
不同厂家不同批次清开灵注射液二阶IR导数指纹图谱比较12
不同厂家不同批次清开灵注射液二维相关IR指纹图谱比较13
三九万荣
麦克
山西晋新双鹤
宜昌
山西晋新 长海医院制剂室
不同厂家板蓝根剂的近红外指纹图谱
荆芥穗挥发油指纹图谱
1
讲授内容
概述 技术要求和研究程序 分析及评价方法 研究实例
2
第一节
概述
中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采 用一定的分析手段，得到的能够标示该中 药特性的共有峰的图谱。
是一种综合的、可量化的鉴别手段
是一种同时实现对中药材多组分、多指标 分析的中药真实性、稳定性和一致性的质 量控制模式之一。
牡丹皮生品3D扫描图
8
AU
0.20
指纹图谱-丹皮
3.40 3.20 3.00 2.80 2.60 2.40 2.20 2.00 1.80 1.60 1.40 1.20 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 250.00 300.00 350.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 分钟 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00 70.00
谱-效关系 指纹图谱
初步进行了指纹图谱与药 效的相关性研究
国外：FDA、WHO、印度草药典 国内：建立了中药指纹图谱全面研 究的实用技术平台和科学基础
16
第二节
系统性 专属性
研究程序及技术要求
一、技术要求
• 指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部 位所含大部分成分，或指标性成分的全部
• 要能体现该中药的特征 • 多张指纹图谱中的每一张图谱仍有其特征性要求 • 同一样品，同一操作条件下，结果的重现性良好 • 中药的复杂性可在数据处理中用适当方法解决 • 指针对不同用途，选用不同分析方法来达到不同 的要求，如质量控制，选常规方法，配伍理论或 新药开发研究则无原则采用联用技术 • 在规定的方法、条件下的耐用程度，以体现其通 用性和实用性。规范操作，客观评价
17
重现性
可操作性 稳定性
二、研究的主要程序包括
样品的收集 • 大于等于10批，取样不少于3次检验量
• 保证药材、饮片或提取物、半成品与制剂和相关产品指纹 图谱间的相关性可溯源性 供试品溶液的制备 • 使用对照品（参照物），以确定图谱中参照峰的位置和丰度 对照品（参照物）溶 • 通常为供试品中的主要成分，）应说明名称、来源和纯度 液的制备 指纹图谱试验研究 方法学考察 指纹图谱的建立和 辨认 • 条件优化，“量化” • 精密度、重现性、样品稳定性试验，5次以上， RSD≤3％，tR应在平均RtR±1分钟内 • 从色谱峰的整体性出发，10批次以上样品，确定共有指纹峰， “S”标示参比物峰，应记录2小时的色谱图
基本属性：整体性和模糊性 。即：多个成 分以相对稳定的比例及位置顺序的完整性 特征；在共同特征的基础上个体之间又互 有差异的模糊性特征。
特点：不要求对每个峰进行归属，不要求 知道每个组分的化学结构，也不需要对每 个组分精确定量，但要求图谱具有系统性、 特征性、稳定性。
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建立指纹图谱的目的和意义
首先考察模式指纹图谱上的各共有峰能否 在样品图谱中找到（必须都能找到，这是 定性），然后再算出各共有峰的相对峰面 积，按以下标准评价：
23
1、中药材
共有峰类别 样品图谱与模式指纹图谱比较 (单峰与总峰面积比) (面积比允许的差值)
≥20% 10%≤A%＜20% ＜10%
≤±20% ≤ ±25% 不作要求(但要标定 其相对保留时间）
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三、历史沿革与发展趋势
指纹图谱分析是中药鉴别技术的循序发展和延伸。
90年版 《中国药 85年版《中 典》，TLC 国药典》， 增加了对 对照品对照 照药材 20 世纪 70 的TLC 年 代 ， TLC 初 步 尝试
95年版 《中国药 典》后提 出中药指 纹图谱的 概念
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三、历史沿革与发展趋势
是保证中药和中药制剂内在质量均一性的
重要措施；
是鉴别中药和中药制剂真伪优劣最有说服
力的依据之一；
是中药走向世界的必经之路。
5
指纹图谱分类
中药材(原料药材) 中药原料药(饮片、配方颗粒) 应用对象 中药中间体(生产过程中间产物) 中药制剂
ห้องสมุดไป่ตู้
中药化学指纹图谱 测定方法 中药生物指纹图谱
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各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。 未达基线分离的共有峰，应计算该组峰的总峰面积 作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。 中药材或饮片供试品的图谱与指纹图谱比较，共有 指纹峰以外的，相对保留值不同者，即为非共有峰。
22
样品图谱与模式（标准）指纹图谱比较 的评价标准
18
第三节
分析及评价方法
一、重要参数的建立 二．特征指纹的相似率与差异率 三、指纹图谱的计算机解析
19
一、重要参数的建立
共有指纹峰
n强峰
特征指纹峰
20
1．共有指纹峰
中药指纹图谱中，多个样品所具有的相同相对保留值 的色谱峰，即为共有指纹峰。 根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间， 根据10批次以上供试品的检测结果，标定共有指纹峰。 以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作 为 1，计算各共有指纹峰面积与参照峰面积的比值； 以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中 其中一个峰(要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰) 的峰面积作为 1，计算其它各共有指纹峰面积的比值。
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图一 荆芥穗顶空气相对照指纹图谱
图二 香薷顶空气相色谱图
图三 荆芥顶空气相对照指纹图谱
图四 紫苏顶空气相色谱图
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指纹图谱-丹皮
0.40 0.35 0.30
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-0.05 250.00 300.00 350.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 分钟 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00 70.00
牡丹皮炭品3D扫描图
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不同厂家不同批次清开灵注射液IR指纹图谱比较
厂家A批次1
厂家A批次2
厂家B
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不同厂家不同批次清开灵注射液二阶IR导数指纹图谱比较12
不同厂家不同批次清开灵注射液二维相关IR指纹图谱比较13
三九万荣
麦克
山西晋新双鹤
宜昌
山西晋新 长海医院制剂室
不同厂家板蓝根剂的近红外指纹图谱
荆芥穗挥发油指纹图谱
1
讲授内容
概述 技术要求和研究程序 分析及评价方法 研究实例
2
第一节
概述
中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采 用一定的分析手段，得到的能够标示该中 药特性的共有峰的图谱。
是一种综合的、可量化的鉴别手段
是一种同时实现对中药材多组分、多指标 分析的中药真实性、稳定性和一致性的质 量控制模式之一。
牡丹皮生品3D扫描图
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AU
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指纹图谱-丹皮
3.40 3.20 3.00 2.80 2.60 2.40 2.20 2.00 1.80 1.60 1.40 1.20 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 250.00 300.00 350.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 分钟 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00 70.00
谱-效关系 指纹图谱
初步进行了指纹图谱与药 效的相关性研究
国外：FDA、WHO、印度草药典 国内：建立了中药指纹图谱全面研 究的实用技术平台和科学基础
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第二节
系统性 专属性
研究程序及技术要求
一、技术要求
• 指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部 位所含大部分成分，或指标性成分的全部
• 要能体现该中药的特征 • 多张指纹图谱中的每一张图谱仍有其特征性要求 • 同一样品，同一操作条件下，结果的重现性良好 • 中药的复杂性可在数据处理中用适当方法解决 • 指针对不同用途，选用不同分析方法来达到不同 的要求，如质量控制，选常规方法，配伍理论或 新药开发研究则无原则采用联用技术 • 在规定的方法、条件下的耐用程度，以体现其通 用性和实用性。规范操作，客观评价
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重现性
可操作性 稳定性
二、研究的主要程序包括
样品的收集 • 大于等于10批，取样不少于3次检验量
• 保证药材、饮片或提取物、半成品与制剂和相关产品指纹 图谱间的相关性可溯源性 供试品溶液的制备 • 使用对照品（参照物），以确定图谱中参照峰的位置和丰度 对照品（参照物）溶 • 通常为供试品中的主要成分，）应说明名称、来源和纯度 液的制备 指纹图谱试验研究 方法学考察 指纹图谱的建立和 辨认 • 条件优化，“量化” • 精密度、重现性、样品稳定性试验，5次以上， RSD≤3％，tR应在平均RtR±1分钟内 • 从色谱峰的整体性出发，10批次以上样品，确定共有指纹峰， “S”标示参比物峰，应记录2小时的色谱图