肝素钠生产工艺综述

一、肝素分类
肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，它与蛋白质结合在一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显效药物。

(1) 普通(标准)肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子量为15000，相当稳定。

(2) 通常把分子量小于6000的称为低分子肝素。

低分子肝素与普通肝素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代普通肝素的趋势。

近年临床常用的有：达肝素钠(法安明)、依诺肝素钠(克赛)、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙)。

(3) 目前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素、改构型肝素、类肝素等, 这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用时间长和出血作用少的优点，很有开发前途。

二、肝素钠简介
拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium
本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物质，通过激活抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)而发挥抗凝作用。

它对凝血过程的三个阶段均有影响，在体内外均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。

口服不吸收，皮下、肌肉或静脉给药均吸收良好。

三、肝素钠检测（药典版）
拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium
本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，具有延长血凝时间的作用。

按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于150 单位。

【性状】本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。

本品在水中易溶。

【比旋度】取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含40mg 的溶液，依法测定（附录Ⅵ E），比旋度应不小于＋35°。

【鉴别】 (1) 取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照电泳法（附录Ⅴ F第三法）试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。

(2) 本品的水溶液显钠盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。

【检查】酸碱度取本品0.10g ，加水10ml溶解后，依法测定（附录Ⅵ H），pH 值应为5.0 ～7.5 。

溶液的澄清度与颜色取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，照分光光度法（附录Ⅳ A），在640nm 的波长处测定，吸收度不得大于 0.018；如显色，与黄色1 号标准比色液（附录Ⅸ A 第一法）比较，不得更深。

吸收度取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A）测定，在260nm 的波长处，其吸收度不得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸收度不得大于0.15。

黏度精密称取本品（按实际测得的单位计算相当于40万单位），加水
适量研细，移入干燥并称定重量的10ml量瓶中，研钵用水冲洗并移入量瓶中，将量瓶置25℃水浴内，俟温度平衡后，加25℃水至刻度，摇匀，称定重量，计算供试品溶液的密度。

取溶液，必要时用0.45μm 的滤膜过滤，照黏度测定法（附录Ⅵ G第一法），用内径约为 1 mm的毛细管，在25℃±0.1 ℃测定其动力黏度，不得大于0.030Pa.s 。

总氮量取本品，照氮测定法（附录Ⅶ D第二法）测定，按干燥品计算，含总氮量应为1.3％～2.5 ％。

硫取本品约25mg，精密称定，照氧瓶燃烧法（附录Ⅶ C）进行有机破坏，选用 1000ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液0.1ml 与水10ml为吸收液，俟生成的烟雾完全吸收后，置冰浴中15分钟后，加热缓缓煮沸2 分钟，冷却，加乙醇－醋酸铵缓冲液 (pH3.7)50 ml，乙醇30ml，0.1 ％茜素红溶液0.3ml 为指示液，用高氯酸钡滴定液(0.05mol/L) 滴定至淡橙红色。

每1ml高氯酸钡滴定液(0.05mol/L) 相当于1.603mg 的S，按干燥品计算，含硫量不得少于10.0％。

干燥失重取本品，置五氧化二磷干燥器内，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过 5.0%（附录Ⅷ L）。

炽灼残渣取本品0.50g ，依法检查（附录Ⅷ N），遗留残渣应为28.0％～41.0％。

钾盐取本品0.10g ，置100ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（B）；另量取标准氯化钾溶液（精密称取在150℃干燥1 小时的分析纯氯化钾 191mg ，置1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀） 5.0ml，置50ml量瓶中，加（B）溶液稀释至刻度，摇匀，
作为对照溶液（A）。

照原子吸收分光光度法（附录Ⅳ D杂质检查法）在766.5nm 的波长处分别测定，应符合规定。

重金属取本品0.50g ，依法检查（附录Ⅷ H第二法），含重金属不得过百万分之三十。

热原取本品，加氯化钠注射液制成每1ml 中含1000单位的溶液，依法检查（附录Ⅺ D），剂量按家兔体重每1kg 注射2ml ，应符合规定。

【效价测定】照肝素生物检定法（附录Ⅻ D）测定，应符合规定；测得的结果应
为标示量的91％～110 ％。

【类别】抗凝血药。

【贮藏】密封，在凉暗处保存。

【制剂】肝素钠注射液
四、肝素钠生产工艺流程
1、盐解：将刮好的新鲜肠粘膜，每100斤肠粘膜加入清水100斤，按肠粘膜和水的总重量，加入4%的工业盐，搅拌均匀，再加烧碱液调PH 值为8--9，缓慢升温50--55度，加温时每10--20分钟加水搅拌一次，恒温2小时，注意要间隔搅拌。

恒温结束后，要快速升温到96--98度，恒温10分钟，趁热捞出上层的渣子。

用100目尼龙布过滤。

注意：
加盐过多会使下一步交换吸附含量超过规定，加盐过少，肝素和蛋白质分离不完全，碱性过强，会使肝素降解破坏，收率下降。

同时还能使一
些蛋白质溶解度增大，造成过滤困难。

碱性不足造成提取液偏酸，则在高温的情况下，肝素迅速破坏，升温过急会使蛋白质早凝固，影响肝素的分解和溶出。

2、吸附：待提取液温度冷至50--55度，应检测盐浓度为3。

5--5%时，即可加入5%已处理号的树脂。

如树脂上含有盐水，需用清水将树脂洗净控干，方可使用。

搅拌吸附6--8小时，转速60--80转/分钟为宜，搅拌须使树脂上下翻动，否则吸附效果差，收率低。

吸附完毕，弃去上层吸附液，然后用100目的尼龙布过滤出树脂。

加入提取液的树脂量：新树脂可按提取液的5--6%加入，旧树脂可按提取液的8--10％。

3、洗涤：过滤后的树脂用40度左右的温水，漂洗干净。

再放入与树脂重量相等的盐溶液中(盐溶液的浓度为5%左右)洗涤10--20分钟，除去低分子肝素和一些蛋白质，然后将树脂过滤。

4、洗脱：第一次洗脱将过滤号的树脂放入浓度为20--22%的盐溶液中搅拌洗脱5--6小时，树脂和盐水的比例为1：0。

7。

过滤后将树脂控干进行第二次洗脱，调盐溶液浓度为16--18%，搅拌3小时以上，树脂和盐水的比例与第一次相同，过滤后的水即是药液。

5、除杂：将稀碱水加入洗脱后的药液里，要快搅慢加，调PH值为10--12搅拌2分钟，静止沉淀20小时后，抽出上层药液，下沉的是杂质，且渣子放另外桶内过滤。

过滤后的药液和下次药液除杂时合并待用。

6、沉淀：将抽出除杂后的药液加入盐酸调PH值为7--7。

5，即可加入酒精进行沉淀。

向药液里加入酒精要快搅慢加。

(由于酒精的浓度不同，因此沉淀肝素的酒精用量不等)用酒精计测量酒精度为30--35%，加盖密封，沉淀20小时。

弃去废酒精收集糊状肝素。

注意在抽出废酒精时，不可抽动沉淀的肝素。

将多次生产的肝素钠浆收集在一起，以备集中脱水干燥。

7、脱水：将生产的肝素钠浆，用双层的确良布过滤后放入95%的酒精内浸泡20小时，加盖密封。

过滤后按上述方法重复一次，使其充分的将肝素上的水分交换下来。

8、干燥：待肝素钠浆沥干后，放在不锈钢盘中烘干，用铲子来回的翻动，温度保持在50--55度，注意温度低于要求是不易烘干的，温度高于60度时会使肝素钠的生物活性下降。

干燥后的肝素很易吸潮，应及时用双层塑料袋密封包装，于通风干燥处存放。

五、肝素钠精制新工艺
本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素，在该过程中采用低温离心技术,解决在除酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。

在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程,从而提高精品肝素钠的效价和效价回收率。

1、工艺流程
2、溶解
称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI溶液进行溶解。

50℃水浴加热，用NaOH溶液调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。

3、酶解法除蛋白
肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白质成分，游离肝素。

但在实际生产过程中，复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的，粗品中总存在数量不等的蛋白质。

粗品肝素钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释放而获得较高活性。

为此，利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调酸除蛋白和氧化除蛋白方法,采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质时较少影响肝素总效价。

在肝素钠溶液中加入少量的胰蛋白酶，使残留在肝素中的少量蛋白质降解成小分子肽,从肝素-蛋白质复合物中解离出来，再结合调酸碱和氧化法除蛋白,制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高。

酶解反应条件：蛋白酶加入量0.05%， pH 7~9，温度40℃，反应时间5h。

4、调酸除蛋白
在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活,加入亚硫酸氢钠作保护剂。

在低温下离心脱除蛋白。

5、氧化条件
H2O2用量2/% pH8.5，温度25~27℃，时间15h。

6、沉淀
将氧化液调pH6.5，加人等量的95%乙醇沉淀。

抽出上清液得沉淀物，将沉淀物慢慢加无水酒精或丙酮中脱水。

7、干燥
55℃，真空干燥3小时以上即得精品。

采用酶解结合过氧化氢一次氧化的肝素钠精制工艺，产品较白，且效价和效价回收率均高于二次氧化方法，效价达150U/mg以上，效价回收率达95 %以上。