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临床微生物学检验(sop)

确保高压效果的可靠性。

【适用范围】

蒸气式高压锅。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【操作方法】

1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。

2．打开排气阀。

3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。

4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。

5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。

6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在

0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分

钟，否则营养物质破坏。

7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。

8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。

操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科

日期 06年06月06日

确保培养箱温度恒定。

【适用范围】

各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【操作方法】

1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。

2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。

3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。

4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。

5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。

6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。

7．培养箱内外应保持清洁。

操作人员部门主管质量负责人

姓名唐玉贞检验科检验科

日期 06年06月06日

保证培养基的质量。

【适用范围】

使用成品培养基干粉制备各种分离培养基。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【步骤】

1.在玻璃容器中加入所需蒸馏水的二分之一量，然后放入一定量培养基干粉，补足水量，轻轻搅拌以促进溶解。

2.校正pH：高压灭菌前可用pH计或精密pH试纸校正培养基的pH。

3.分装：液体培养基一般在灭菌前分装，分装时应注意每管的分装量不应高于试管的2/3。琼脂平板是在培养基高压灭菌后冷至50-600C时再倾注平板。

4.质量检查

[1] 无菌试验：将制好的培养基在350C孵育过夜，判定是否灭菌合格。

[2] 效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。

5.保存：液体培养基及琼脂平板须在40C保存，一般不超过7天，如用塑料袋密封至多保存2周。

操作人员部门主管质量负责人

姓名唐玉贞检验科检验科

日期 06年06月06日

确保染色结果清晰可靠。

【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【试剂】

1.结晶紫溶液

A液：结晶紫 2g

95%乙醇 20ml

Β液：草酸铵 0.8g

蒸馏水 80ml

使用前24小时将A液Β液混合后，过虑后装入试剂瓶内备用。

2.碘液

碘 1g

碘化钾 2g

蒸馏水 300ml

3.脱色液：95%乙醇

4.复染液

储存液：沙黄 2.5g

95%乙醇 100ml

应用液：储存液 10ml

蒸馏水 90ml

【方法】

1.待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥或火焰固定。

2.加结晶紫液染1分钟，清水冲去染液。

3.加碘液染1分钟，清水冲去染液。

4.加95%乙醇脱色液，不时摇动约10-30分钟，至紫色已脱落为至，水冲洗。

5.加复染液（伊红），染30分钟，水冲洗。

6.待涂片自然干燥后，油镜镜检。

操作人员部门主管质量负责人

姓名唐玉贞检验科检验科

日期 06年06月06日

确保染色结果清晰可靠。

【方法】

（一）碱性复红染色法

【试剂】

1、萋纳石炭酸复红溶液

碱性复红乙醇饱和溶液 10ml

5%石炭酸溶液 90ml

2、脱色剂

浓盐酸 3ml

95%乙醇 97ml

3、复染液（吕弗勒美蓝液）

美蓝乙醇饱和溶液 30ml

10%氢氧化钾 0.1ml

蒸馏水 100ml

【染色步骤】

1、涂片经自然干燥或火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5分钟（若染色奴卡菌需要加长时间），水洗。

2、加脱色剂，不时摇动坡片至无红色脱落为至，水洗。

3、加复染液，染0.5-1分钟。

4、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。

注：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2%硫酸水溶液。

（二）金胺O-罗丹明Β染色法

【染剂】

1、罗丹明Β液：罗丹明Β 0.1g加蒸馏水100ml；

2、0.1%金胺O液：金胺O 0.1g加蒸馏水95ml，再加入纯石炭酸5ml，混匀。

3、3%盐酸酒精。

4、稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液10ml，加蒸馏水90ml，混匀。

【方法】

1、涂片固定后加第1液30-90分钟。

2、弃去第1液后加第2液染15分钟。

3、用第3液脱色1-2分钟，水洗。

4、滴加第4液染30分钟，水洗，待干，荧光镜检。

【结果】

抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。

操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科

日期 06年06月06日