生防菌剂研究进展
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BCJB01和BMJBN02分别为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）和巨大芽孢杆 菌（Bacillus megaterium）。
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对葡萄霜霉病的室内防效实验
供试菌剂：BCJB01和BMJBN02 LB液体发酵稀释10倍液 葡萄品种：泽山1号
叶盘法检测菌株BMJBN02和BCJB01室内试验结果
木霉发酵工艺及制剂的研究
木霉菌液体发酵产厚垣孢子发酵工艺：
1、碳、氮源及无机盐的确定
木霉发酵工艺及制剂的研究
2、培养基质量分数正交实验
木霉发酵工艺及制剂的研究
最优组合：可溶性淀粉质量分数2%、豆粕质量分数5%、FeSO4 ·5H2O 0.02%， 诱导剂量1‰，诱导剂加入时间24小时，pH6.0。厚垣孢子总数为1.5×108cfu/ml。
霜霉病
BCJB01和BMJBN02悬浮剂对葡萄霜霉病的田间实验 试验按农业部药检所田间试验准则设计。实验统计结果见下表
BCJB01和BMJBN02悬浮剂田间防效
霜霉病
葡萄溃疡病
葡萄品种：毛葡萄
葡萄品种：红地球 试验数据由中国农业大学张立群教授提供
处理1 BAB-1 稀释60倍；处理2 W10稀释5倍；处理3 11K1 稀释5倍；CK 水 处理4 BMJBN02稀释50倍；处理5 BCJB01 稀释50倍；处理6 30%嘧菌酯稀释1500倍
de
DE
de
DE
def
DE
def
EF
Hale Waihona Puke defEF--
防效 % 56.7 58.6 63.8 67.4 69.2
生防木霉菌LTR-2的遗传改良
利用ATMT方法构建了绿色木霉LTR-2的突变体库 筛选方法：突变体对番茄灰霉菌的重寄生能力进行筛选 结果：T2-60 、T2-58
A
B
显微镜下观察突变子对灰霉病菌丝的结合位点和接触缠绕情况
灰霉病
防治灰霉病的木霉资源筛选已获得木霉菌株500余株。 发现4株木霉菌对番茄灰霉病有良好的防治效果
26省 1203个样品
灰霉病
LTR-2
WS1-10
GD1-3
灰霉病
拮抗木霉防治黄瓜灰霉病的室内试验结果
拮抗霉
T91-2 T6-3 T9-4 T10-1 T8-2 T11
病情 指数 48.13 45.26 43.55 36.78 36.11
A 缠绕程度强
B 缠绕程度弱
生防木霉菌LTR-2的遗传改良
将几丁质酶基因chi42和葡聚糖酶基因glu14串联在同一个表达载体上， 并利用ATMT手段将双价抗病基因导入绿色木霉LTR-2基因组DNA上， 获得具有双价抗病基因的重组菌株L-15。
遗传改良木霉防治番茄灰霉病的室内试验结果
木霉发酵工艺及制剂的研究
近两年研究成果
近年来，在霜霉病、灰霉病、根结线虫的生物防治工作中，又有 新的收获。
新筛选到的芽孢杆菌BCJB01和BMJBN02对葡萄霜霉病的防效分 别为84.05%和73.30%，且菌株已被开发成悬浮剂和粉剂两种剂型，活 菌数量分别为30×108和100×108CFU；新筛选的木霉WS1-10、GD1-3、 TW20256和TW20111对灰霉病的抑制率为75%；新筛选的木霉T11-W 对根结线虫卵的寄生率为73.46%，新筛选的芽孢杆菌BCJB01对根结 线虫的防效为76.64%。
木霉悬浮种衣剂助剂的筛选
通过尝试法对8种润湿分散剂、3种成膜剂进行了筛选，结果如下：
观测结果表明，对照CK 严重絮凝，而十二烷基苯 磺酸钠悬浮率可达92.5%， 此外木霉LTR-2在2%十二 烷基苯磺酸钠浓度下活性 基本没有影响，同时价格 便宜，因此，选择作为种 衣剂的润湿剂。
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察
霜霉病
显微观察结果： 在相同的处理条件下，水对照中孢子囊萌发明显； 波尔多液处理孢子囊均变形，导致孢子囊不能正常萌发； 生防细菌BMJBN02可使孢子囊变形，但对已萌发出来的游动
生防菌剂研究进展
前期研究成果
山东省科学院生物研究所应用微生物研究室，依托山东省 应用微生物重点实验室和生物制造技术研发平台，长期从事生 防菌剂的研究开发工作，先后研制了木霉菌母药、木霉菌制剂5 个（登记证号PD20096832、LS20061652、PD20096833、 PD20101573、PD20131786、），芽胞杆菌生物杀菌剂1个（登记 证号为PD20094534），微生物肥料6个，取得了较好的经济、社 会和环境效益;获得省级以上奖励10余项，其中省部级一等奖3项。
32.55
p=0.05 p=0.01
a
A
a
A
ab
AB
bc
BC
bc
BC
cd
CD
防效 % 20.3 25.0 27.9 39.1 40.2
46.1
拮抗菌
T16-2 gD3 gD1-3 LTR-2 WS1-10 CK
病情 指数 26.11 24.97 21.87 19.67 18.62
60.37
p=0.05 p=0.01
木霉菌LTR-2的液-固发酵新工艺: 液体发酵(种子)：1%葡萄糖，4%玉米粉，2%豆饼粉，0.05%硫
酸镁，0.1%磷酸二氢钾，0.02%消泡剂，pH6.0，培养条件： 30℃，转速150r/min，通气量1：0.5～1； 固体发酵：麦粒或玉米粒，添加10%稻壳，接种量3%；发酵培 养条件：水分控制在55%±5%，培养条件：温度控制在26℃35℃，料厚5-10CM，湿度45%-55%，培养时间48-72h； 产量：50×108cfu/克固料
孢子无作用； 而BCJB01并不抑制孢子囊的萌发， 菌体围绕在孢子囊周围，
在萌发口处等待游动孢子，待游动孢子游出后将其分解。
霜霉病
生防细菌胞壁降解酶活性测定
几丁质酶活性测定
霜霉病
纤维素酶活性测定
霜霉病
β-1,3-葡聚糖酶活性测定
霜霉病
BCJB01和BMJBN02的鉴定 BCJB01和BMJBN02的形态特征及生理生化测定标准参照沈萍等和东秀珠 等的方法进行；以菌株BCJB01和BMJBN02基因组DNA为模板，提取方法 参照蒋萍，用细菌通用引物扩增16S rDNA 序列，并将PCR 反应产物送山 东农科院测序中心测序。将测得的序列在NCBI中进行Blast比对，发现
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对葡萄霜霉病的室内防效实验
供试菌剂：BCJB01和BMJBN02 LB液体发酵稀释10倍液 葡萄品种：泽山1号
叶盘法检测菌株BMJBN02和BCJB01室内试验结果
木霉发酵工艺及制剂的研究
木霉菌液体发酵产厚垣孢子发酵工艺：
1、碳、氮源及无机盐的确定
木霉发酵工艺及制剂的研究
2、培养基质量分数正交实验
木霉发酵工艺及制剂的研究
最优组合：可溶性淀粉质量分数2%、豆粕质量分数5%、FeSO4 ·5H2O 0.02%， 诱导剂量1‰，诱导剂加入时间24小时，pH6.0。厚垣孢子总数为1.5×108cfu/ml。
霜霉病
BCJB01和BMJBN02悬浮剂对葡萄霜霉病的田间实验 试验按农业部药检所田间试验准则设计。实验统计结果见下表
BCJB01和BMJBN02悬浮剂田间防效
霜霉病
葡萄溃疡病
葡萄品种：毛葡萄
葡萄品种：红地球 试验数据由中国农业大学张立群教授提供
处理1 BAB-1 稀释60倍；处理2 W10稀释5倍；处理3 11K1 稀释5倍；CK 水 处理4 BMJBN02稀释50倍；处理5 BCJB01 稀释50倍；处理6 30%嘧菌酯稀释1500倍
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Hale Waihona Puke defEF--
防效 % 56.7 58.6 63.8 67.4 69.2
生防木霉菌LTR-2的遗传改良
利用ATMT方法构建了绿色木霉LTR-2的突变体库 筛选方法：突变体对番茄灰霉菌的重寄生能力进行筛选 结果：T2-60 、T2-58
A
B
显微镜下观察突变子对灰霉病菌丝的结合位点和接触缠绕情况
灰霉病
防治灰霉病的木霉资源筛选已获得木霉菌株500余株。 发现4株木霉菌对番茄灰霉病有良好的防治效果
26省 1203个样品
灰霉病
LTR-2
WS1-10
GD1-3
灰霉病
拮抗木霉防治黄瓜灰霉病的室内试验结果
拮抗霉
T91-2 T6-3 T9-4 T10-1 T8-2 T11
病情 指数 48.13 45.26 43.55 36.78 36.11
A 缠绕程度强
B 缠绕程度弱
生防木霉菌LTR-2的遗传改良
将几丁质酶基因chi42和葡聚糖酶基因glu14串联在同一个表达载体上， 并利用ATMT手段将双价抗病基因导入绿色木霉LTR-2基因组DNA上， 获得具有双价抗病基因的重组菌株L-15。
遗传改良木霉防治番茄灰霉病的室内试验结果
木霉发酵工艺及制剂的研究
近两年研究成果
近年来，在霜霉病、灰霉病、根结线虫的生物防治工作中，又有 新的收获。
新筛选到的芽孢杆菌BCJB01和BMJBN02对葡萄霜霉病的防效分 别为84.05%和73.30%，且菌株已被开发成悬浮剂和粉剂两种剂型，活 菌数量分别为30×108和100×108CFU；新筛选的木霉WS1-10、GD1-3、 TW20256和TW20111对灰霉病的抑制率为75%；新筛选的木霉T11-W 对根结线虫卵的寄生率为73.46%，新筛选的芽孢杆菌BCJB01对根结 线虫的防效为76.64%。
木霉悬浮种衣剂助剂的筛选
通过尝试法对8种润湿分散剂、3种成膜剂进行了筛选，结果如下：
观测结果表明，对照CK 严重絮凝，而十二烷基苯 磺酸钠悬浮率可达92.5%， 此外木霉LTR-2在2%十二 烷基苯磺酸钠浓度下活性 基本没有影响，同时价格 便宜，因此，选择作为种 衣剂的润湿剂。
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察
霜霉病
BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察
霜霉病
显微观察结果： 在相同的处理条件下，水对照中孢子囊萌发明显； 波尔多液处理孢子囊均变形，导致孢子囊不能正常萌发； 生防细菌BMJBN02可使孢子囊变形，但对已萌发出来的游动
生防菌剂研究进展
前期研究成果
山东省科学院生物研究所应用微生物研究室，依托山东省 应用微生物重点实验室和生物制造技术研发平台，长期从事生 防菌剂的研究开发工作，先后研制了木霉菌母药、木霉菌制剂5 个（登记证号PD20096832、LS20061652、PD20096833、 PD20101573、PD20131786、），芽胞杆菌生物杀菌剂1个（登记 证号为PD20094534），微生物肥料6个，取得了较好的经济、社 会和环境效益;获得省级以上奖励10余项，其中省部级一等奖3项。
32.55
p=0.05 p=0.01
a
A
a
A
ab
AB
bc
BC
bc
BC
cd
CD
防效 % 20.3 25.0 27.9 39.1 40.2
46.1
拮抗菌
T16-2 gD3 gD1-3 LTR-2 WS1-10 CK
病情 指数 26.11 24.97 21.87 19.67 18.62
60.37
p=0.05 p=0.01
木霉菌LTR-2的液-固发酵新工艺: 液体发酵(种子)：1%葡萄糖，4%玉米粉，2%豆饼粉，0.05%硫
酸镁，0.1%磷酸二氢钾，0.02%消泡剂，pH6.0，培养条件： 30℃，转速150r/min，通气量1：0.5～1； 固体发酵：麦粒或玉米粒，添加10%稻壳，接种量3%；发酵培 养条件：水分控制在55%±5%，培养条件：温度控制在26℃35℃，料厚5-10CM，湿度45%-55%，培养时间48-72h； 产量：50×108cfu/克固料
孢子无作用； 而BCJB01并不抑制孢子囊的萌发， 菌体围绕在孢子囊周围，
在萌发口处等待游动孢子，待游动孢子游出后将其分解。
霜霉病
生防细菌胞壁降解酶活性测定
几丁质酶活性测定
霜霉病
纤维素酶活性测定
霜霉病
β-1,3-葡聚糖酶活性测定
霜霉病
BCJB01和BMJBN02的鉴定 BCJB01和BMJBN02的形态特征及生理生化测定标准参照沈萍等和东秀珠 等的方法进行；以菌株BCJB01和BMJBN02基因组DNA为模板，提取方法 参照蒋萍，用细菌通用引物扩增16S rDNA 序列，并将PCR 反应产物送山 东农科院测序中心测序。将测得的序列在NCBI中进行Blast比对，发现