(TP+ALB测定)课件

【原理】
白蛋白在pH 4.2的缓冲液中带正电荷，在有非 离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴 甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长 630nm处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正 比例，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得白蛋 白含量。
溴甲酚绿+白蛋白 pH 4.2 蓝绿色复合物（A630nm）
S2
B2
待检血清或血浆 0.01
白蛋白标准液
0.01
纯水
0.01
BCG试剂
2.0
2.0
2.0
混匀，用半自动生化分析仪立即在波长630nm处比色，用蒸馏 水调零，读取校准管和测定管的吸光度值并记录。
【结果计算】
血清或血浆白蛋白（ｇ/L）
测定管吸光度-空白管吸光度
=
×白蛋白标准液浓度
校准管吸光度-空白管吸光度
【临床意义】
1.血清或血浆总蛋白浓度降低
(1)蛋白质合成障碍：主要是肝功疾病。 (2)蛋白质丢失增加：严重烧伤、大出血、肾病综合征。 (3)营养不良或消耗增加：长期食物中蛋白质含量不足或
慢性肠道疾病引起的吸收不良；长期消耗性疾病，严 重结核病、甲亢、恶性肿瘤等。 (4)血浆稀释：各种原因引起的水钠潴留。
●试剂
BCG试剂
pH4.2琥珀酸缓冲液 溴甲酚绿 叠氮钠 Brij-35（聚氧化乙烯月桂醚）
10mmol/L 16umol/L 0.50mmol/L 0.125g/L
【标本】
白蛋白标准液 52.5
g/L
样品号（样品1和样品2）
【操作歩骤】
BCG法测定血清或血浆白蛋白操作歩骤
加入物(ml)
U1-2
【原理】---血清或血浆总蛋白测定
所有蛋白质都含有肽键（-CO-NH-)。在碱性溶 液中，肽键与铜离子结合，生成稳定的紫红色络合 物。根据紫红色络合物在540nm的吸光度在一定范 围内与蛋白质的含量呈正比关系，经与同样处理的 蛋白标准液比较，即可以求得蛋白质含量。
碱性
肽键+Cu2+
紫红色络合物（A540nm）
实验二
双缩脲法测定血清或血浆总蛋白（TP） 溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白（ALB）
临床生化教研室 刘素兰 雷燕
（一）双缩脲法测定血清或血浆总蛋白
【目的】
掌握：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的基本原理 及操作 熟悉：血清或血浆总蛋白测定的临床意义 了解：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的特点及注 意事项
【操作歩骤】
双缩脲法测定血清或血浆总蛋白操作歩骤
加入物(ml)
U1-2
S1
B1
待检血清或血浆 0.025 总蛋白标准液 纯水 双缩脲试剂 1.5
0.025 1.5
0.025 1.5
混匀，置25℃30分钟或37℃10分钟，用半自动生化分析 仪在波长540nm处比色，用蒸馏水调零，读取校准管和 测定管的吸光度值并记录。
2.血清或血浆总蛋白浓度增高 (1)蛋白合成增加 ：如多发性骨髓瘤。 (2)血浆浓缩：凡体内水分的排出大于水分的摄入
时，均可引起血浆浓缩。
（二）溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白
【目的】
掌握：溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白的原理及 操作 熟悉：血清或血浆白蛋白测定的临床意义 了解：溴甲酚绿法测定清白蛋白的特点及注意事项
3.A／G比值：某些病人可同时出现白蛋白减 少和球蛋白升高的现象，严重者A／G比值 <1.0，这种情况称为A／G比值倒置。
【临床意义】
1.血清或血浆白蛋白浓度增高 常见于严重脱水所致的血浆浓缩。
2.白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原因
大致相同。急性降低主要见于大出血和严重烧伤；慢性 降低见于肾病蛋白尿、肝功能受损、肠道肿瘤及结核病 伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤等。血清或血浆白蛋 白低于20g／L，临床上出现水肿。
【材料】
● 器材
半自动生化分析仪、水浴箱、 试管架、洗耳球、 5ml刻度吸管、15*100mm试管、微量加样器
●试剂
双缩脲试剂 硫酸铜 酒石酸钾钠 碘化钾 氢氧化钠
12.0 mmol/L 64.0 mmol/L 6.0 mmol/L 200 mmol/L
【标本】
总蛋白标准液 56.5
g/L
混合血清或血浆样本（样品1和样品2）
双缩脲法
优点： ① 操作简便、快速 、试剂单一、显色稳定。 ② 不同的蛋白质产生颜色的深浅相近。 ③ 干扰物质少。 ④ 特异性、准确性较好、精密度好(RCV为4％ CCV3.9 ％)。
缺点：
灵敏度较低(检出限为0.2～1.7g/L)。 灵敏度虽不高，但已能满足临床生化检验 的需要，是临床测定血清或血浆总蛋白的 首选常规方法
【结果计算】
血ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ或血浆总蛋白（ｇ/L）
测定管吸光度-空白管吸光度
=
×总蛋白标准液浓度
校准管吸光度-空白管吸光度
【报告方式】
血清或血浆(浆)总蛋白： △ △. △ g/L
【注意事项】
1.黄疸血清或血浆、严重脂血、溶血；葡萄糖、酚酞及溴 磺酞钠对本法有明显干扰。 2.蛋白质的浓度单位用“g/L”。 3.吸光度的大小与试剂的组分、pH、反应温度有关。 4.双缩脲试剂中各成分的作用： 碱性酒石酸钾钠：与铜离 子(Cu2+) 形成络合物并维持铜离子在碱性溶液中的 稳定 性 ；碘化钾：抗氧化剂（KI--防止碱性酒石酸铜自动还原 并防止Cu20的沉淀)。
BCG法
优点：
① 操作简便、快速、试剂单一。 ② 白蛋白具有与阴离子染料BCG（或BCP）结合而球蛋 白基本不结合的特性。 ③ 干扰物质少(溶血、胆红素、中度脂血无干扰)。 ④ 特异性、准确性较好、精密度好（RCV＜4％） 是目前临床测定血清或血浆白蛋白最用的常规方法。
【材料】
器材 半自动生化分析仪、水浴箱、 试管架、洗耳球、 5ml刻度吸管、15*100mm试管、微量加样器
【报告方式】
血清或血浆(浆) 白蛋白： △ △. △ g/L
【注意事项】
1.控制反应液的pH是本法测定的关键。试剂混浊，pH范围超 过4.1-4.3，试剂不能用。
2.BCG与白蛋白的反应强度和环境温度有关。 3.由于在30s内呈色对白蛋白特异（快反应），BCG与血清或
血浆混合后，在30s读取吸光度，可明显减少非特异性呈色 反应。 4.叠氮钠有防腐的作用；聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35） 可提高蛋白质与染料的结合力及溶解度，提高呈色的稳定 性，也可用其他表面活性剂，灵敏度和线性范围不变。