分子生物学复习题

1、原核生物基因组与真核生物基因组在结构与组成上的区别。（CH1，28-35）

（1

1.基因组DNA通常为单一闭环双链分子。

2.基因组DNA只有一个复制起点。

3.基因组所含基因数量较多，并且形成操纵子结构。

4.编码序列几乎都是连续的，没有内含子结构，因而转录之后不需要剪接。

5.编码序列约占基因组的50%，比例低于病毒基因组，但高于真核生物基因组。

6.非编码区主要是调控序列。

7.重复基因少，结构基因一般为单拷贝。

8.

（2

1.每一种真核生物都有一定的染色体数目。

2.远大于原核基因组，结构复杂，基因数庞大。

3.真核生物基因转录产物为单顺反子；

4.有大量重复序列，高度重复（106）。

5.真核基因为断裂基因。

6.非编码序列多于编码序列。

7.功能相关基因构成各种基因家族。

8.基因组中含大量转座子、逆转录转座子、逆转录子等可移动序列。

9.真核基因组DNA的末端都有一种称为端粒的特殊结构。

10.真核生物基因组还包括细胞器基因组。

2

（1DNA序列不发生改变的情况下，基因的表达水平与功能发生改变，并

（2

（3

1．DNA甲基化修饰：基因选择性转录表达的调控

2．非编码RNA的调控作用：基因转录后的调控

（4

1．基因选择性转录表达的调控：DNA甲基化、组蛋白共价修饰、染色质重塑、X染色体失活

2.基因转录后的调控：基因组中非编码RNA、微小RNA（miRNA）、反义RNA、内含子、核糖开关等

siRNA与miRNA的异同（CH4，74-75）

miRNA和siRNA都是由dsRNA或RNA前体形成的；

MiRNA和siRNA都是由22个左右的核苷组成；

都是Dicer酶的产物；

二者生成都需要Argonaute(AGO)家族蛋白存在；

都和RISC结合成复合体行使干扰、调节作用，所以其功能界限变得不清晰（如二者在介导沉默机制上有重叠）；

都可在转录后和翻译水平干扰靶基因的翻译；

4CH4，28-33）

核生物的基因多数以操纵子的形式组成基因表达调控的单元。

1.操纵子的负性调节——阻遏调控

（1）当没有乳糖存在时，Lac操纵子处于阻遏状态。阻遏蛋白与O序列结合，阻遏RNA 聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。

（2）当乳糖存在时，Lac操纵子即可被诱导。乳糖→半乳糖（诱导剂）与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离，发生转录。

2.操纵子的正性调节——CAP的激活调控

CAP（也称CRP、CGP)是同二聚体，在其分子内有DNA结合区及cAMP结合位点。

当没有葡萄糖存在时cAMP↑，cAMP与CAP结合，CAP结合在lac启动序列附近的CAP 位点，可刺激RNA聚合酶活性，表达↑。

当有葡萄糖存在时，cAMP↓、cAMP与CAP结合受阻，lac操纵子表达↓。

3. 乳糖操纵子的双重协调调控

lac阻遏蛋白负性调节与CAP正性调节两种机制协调合作。

当lac阻遏蛋白封闭转录时，CAP不能起作用。但当lac阻遏蛋白脱落时，还需CAP 正性调节才能转录。

5、同一生物体不同的组织细胞的基因组成和表达是否相同？为什么？（CH2，45-46+CH4,，4-8）

同一生物体不同的组织细胞的基因组成相同，但表达不完全相同。

与细胞类型无关；基因组是稳定不变的，与发育阶段、生长条件无关。

基因表达就是基因的转录和翻译过程。

某一生理或病理状态下、某一环境条件下，机体细胞所表达基因的种类和表达水平。转录组只反映基因组的一部分；一个基因可以转录得到多种mRNA；基因组在不同条件下有不同的表达模式，转录组是动态的，反映的是正在表达的基因，与细胞类型、发育阶段、生长条件、健康状况等有关。

/调节性表达和协调表达。

是必要的或必不可少的，在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达，这类基因称管家基因。

（如：催化三羧酸循环的酶）

表达和阻遏性表达。（如：胆固醇对HMGCoA还原酶的表达阻遏）

基因表达具有时间、空间和条件特异性。

6Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法。（CH1,67-73）

（1DNA为模板，寡聚核苷酸为引物，在DNA聚合酶的作用下，按碱基互补的原则合成互补DNA单链，在合成过程中链可终止于双脱氧核苷酸处，从而获得不同长度的DNA单链。再经电泳分离、读序而得到待测DNA分子的碱基序列。

（2

模板：单链DNA（待测序的DNA）

酶：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ

引物：5'端标记的寡核苷酸链

底物：dNTP（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）、ddNTP

四组独立的反应体系，每组均含有dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)和ddNTP(一种)

（3

1.获得标记片段组

2.电泳：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

3.显影

4.读序

7、如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌中表达？简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决方法。

1.目的基因的制备（编码动物激素的基因）

先从组织细胞内提取mRNA，然后以与poly（A）尾互补的寡dT为引物，逆转录合成cDNA，再进行克隆。

2.载体的选择和制备

获取大肠杆菌中的质粒，进行酶切使其线形化，以便与目的基因相连接。所用的酶最好与切割目的基因的酶相同。

3.目的DNA与载体体外连接

采用粘性末端连接质粒和目的基因，质粒和插入片段具有相同的粘性末端。

4.将外源DNA导入宿主细胞

采用CaCl2法、电穿孔法、病毒感染法将重组DNA倒入大肠杆菌中。

5.目的基因的筛选和鉴定

首先筛选出转化菌（平板筛选）；然后筛选出带有重组体的克隆（插入灭活法）；最后是对DNA重组体进行鉴定（酶切鉴定）。

6.克隆载体的表达

培养筛选出的大肠杆菌，在一定条件下表达目的蛋白。

1.载体自身环化，造成假阳性克隆——使用碱性磷酸酶处理载体，去除DNA或RNA5’端的磷酸根

2.插入片段可双向插入——使用两种限制性内切酶同时切，且是非同尾酶