薄层色谱法介绍与其应用
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薄层色谱法介绍和其应用
薄层固定相
传统薄层板与高效薄层板的比较
平均粒度（μm） 颗粒分布（μm） 点样量（μl） 展距（cm） 分离时间（min） 检出限：可见光（ng）
荧光（ng）
TLC 10-15
宽 大 10-15 30-200 100-1000 1-100
薄层色谱法介绍和其应用
HPTLC 3-7 窄 小 5-8 3-20
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法介绍和其应用
目录
• 第一章 概 述 • 第二章 薄层色谱法的分类和原理 • 第三章 薄层色谱法实验方法及应用 • 第四章 薄层色谱法在中草药方面的
应用
薄层色谱法介绍和其应用
第一章 概 述
薄层色谱法 指以适宜的固定相涂布于玻璃板、 铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供 试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适 宜的溶剂置展开容器中展开，使供试品中所含 的相应成分分离，采用适合的显色剂或显色方 法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较， 或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查， 或含量测定的方法。
薄层色谱法介绍和其应用
离子交换色谱: • 离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换
树脂上交换能力的不同使Biblioteka Baidu分分离。常用的有 离子交换纤维制成的薄层板，用于分离某些亲 水性强、能成离子态的物质。
薄层色谱法介绍和其应用
凝胶色谱：
• 葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝 胶粒子，在其交联的骨架中有许多一定大小的网眼。网 眼大，大分子物质能进入网眼内；网眼小，只有小分子 物质才能进入网眼；而超过一定限度的大分子物质，就 被排阻在凝胶粒子的外部而不能进入网眼。如同按照分 子大小过筛一样，所以称为分子筛。用于高分子的非离 子化合物的分离，如蛋白质及核酸等。
薄层色谱法介绍和其应用
分配色谱:
• 分配色谱是利用被分离物质在两相中分配系数的不 同使组分分离。常以硅胶、硅藻土、纤维素等作载 体，它们吸附一定量的水分或其它溶剂 (如: 缓冲液、 酸液、甲酰胺、丙二醇等)作固定相，再用与固定相不 相混溶的展开剂展开, 被分离物质在两相之间不断地 进行分配, 从而达到分离。
薄层色谱法介绍和其应用
其他薄层色谱
• 络合薄层色谱法 AgNO3 • 微乳薄层色谱法 以微乳液为流动相 • 胶束薄层色谱法 应用一定浓度的表面活性剂溶液
所形成的胶束溶液作为流动相 • 反相薄层色谱法 利用化学键合反应，将烃基硅烷键
合到硅胶表面，制成非极性固定 相，用极性较大的液体作流动相 • 手性固定相法 光学活性的天然高分子－纤维素， 纤维素衍生物等
• 薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离速 度快等优点，从而发展很快，并在中草药的定 性定量分析中得到了广泛应用。
• 80年代以来，高效薄层板的出现以及薄层自动 化仪器的使用，极大地提高了薄层分析结果的 重现性和准确度。有的学者称之为现代薄层色 谱技术（Modern TLC)或仪器化薄层色谱技术 （Instrumental planar chromatography)。
薄层色谱法介绍和其应用
第三章 薄层色谱法实验方法及应用
特点：1、分离能力强，斑点集中； 2、灵敏度高； 3、展开时间短； 4、试样预处理简单； 5、上样量大； 6、仪器简单操作方便
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法
• 薄层色谱法
–薄层固定相 、薄层点样、薄层 展 开、显色、记录
薄层色谱法介绍和其应用
硅胶预制薄层板 （DC- Fertigplatten SIL G-25 MN ）
菊苣薄层鉴别图谱 薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法介绍和其应用
第二章 薄层色谱法的分类和原理
• 根据原理分类：
薄层色谱法
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 其他薄层色谱
薄层色谱法介绍和其应用
吸附色谱：
• 吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸 附的能力不同，当用展开剂展开时，不同的物 质因吸附和解吸附能力的不同而造成的迁移不 同，从而达到分离的目的，是薄层色谱上最常 用的方法。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、硅 藻土等。
薄层固定相
• 按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如 硅胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如C18 键合相薄层板）等。
• 硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，有硅胶G板、 硅胶GF254板、硅胶H板和硅胶HF254板等规格。
• 高效薄层板（HPTLC，High Performance TLC）所使 用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范 围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的 分离效果。
灯（366nm）
样品：1. 华重楼； 2. 华重楼；3.重楼皂苷I； 4. 重楼对照药材；5. 滇 重楼；6. 滇重楼；7. 滇 重楼
薄层色谱法介绍和其应用
薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别
高效硅胶预制薄层板 （ HPTLC-Fertigplatten Nano-DURASIL-20 MN ）
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱技术产生和发展可分为以下3个阶段： • 起步阶段 • 推广普及阶段 • 发展提高阶段
薄层色谱法介绍和其应用
• 1938年 N. A. Izmailor和 M. S. Schraiber首次在 显微镜载玻片上涂布的氧化铝薄层分离了多种 植物酊剂中的成分，标志着薄层色谱法的诞生。
10-100 0.1-10
薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别
A: HPTLC Silica gel 60
（Merck）
A
B:硅胶G预制板(青岛海
洋化工厂)
展开剂: 氯仿-甲醇-水
（15：5：1），10℃以
下放置后的下层溶液
显色: 10%硫酸：乙醇，
105℃加热约5分钟
检视: 可见光和紫外光
B
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法
薄层色谱法介绍和其应用
• 薄层色谱法（Thin Layer chromatography， TLC）是 20 世纪 50 年代发展起来的一种平面 色谱技术；至20 世纪 60 年代后，对薄层色谱 法在使用器材的规格、操作方法及术语使用的 标准化等方面进行了大量的工作，使该方法日 趋成熟和完善。迄今几十年来， TLC已在医药、 滥用毒品检测、农药、食品、化工、环保等多 方面有了广泛的应用。
薄层固定相
传统薄层板与高效薄层板的比较
平均粒度（μm） 颗粒分布（μm） 点样量（μl） 展距（cm） 分离时间（min） 检出限：可见光（ng）
荧光（ng）
TLC 10-15
宽 大 10-15 30-200 100-1000 1-100
薄层色谱法介绍和其应用
HPTLC 3-7 窄 小 5-8 3-20
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法介绍和其应用
目录
• 第一章 概 述 • 第二章 薄层色谱法的分类和原理 • 第三章 薄层色谱法实验方法及应用 • 第四章 薄层色谱法在中草药方面的
应用
薄层色谱法介绍和其应用
第一章 概 述
薄层色谱法 指以适宜的固定相涂布于玻璃板、 铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供 试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适 宜的溶剂置展开容器中展开，使供试品中所含 的相应成分分离，采用适合的显色剂或显色方 法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较， 或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查， 或含量测定的方法。
薄层色谱法介绍和其应用
离子交换色谱: • 离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换
树脂上交换能力的不同使Biblioteka Baidu分分离。常用的有 离子交换纤维制成的薄层板，用于分离某些亲 水性强、能成离子态的物质。
薄层色谱法介绍和其应用
凝胶色谱：
• 葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝 胶粒子，在其交联的骨架中有许多一定大小的网眼。网 眼大，大分子物质能进入网眼内；网眼小，只有小分子 物质才能进入网眼；而超过一定限度的大分子物质，就 被排阻在凝胶粒子的外部而不能进入网眼。如同按照分 子大小过筛一样，所以称为分子筛。用于高分子的非离 子化合物的分离，如蛋白质及核酸等。
薄层色谱法介绍和其应用
分配色谱:
• 分配色谱是利用被分离物质在两相中分配系数的不 同使组分分离。常以硅胶、硅藻土、纤维素等作载 体，它们吸附一定量的水分或其它溶剂 (如: 缓冲液、 酸液、甲酰胺、丙二醇等)作固定相，再用与固定相不 相混溶的展开剂展开, 被分离物质在两相之间不断地 进行分配, 从而达到分离。
薄层色谱法介绍和其应用
其他薄层色谱
• 络合薄层色谱法 AgNO3 • 微乳薄层色谱法 以微乳液为流动相 • 胶束薄层色谱法 应用一定浓度的表面活性剂溶液
所形成的胶束溶液作为流动相 • 反相薄层色谱法 利用化学键合反应，将烃基硅烷键
合到硅胶表面，制成非极性固定 相，用极性较大的液体作流动相 • 手性固定相法 光学活性的天然高分子－纤维素， 纤维素衍生物等
• 薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离速 度快等优点，从而发展很快，并在中草药的定 性定量分析中得到了广泛应用。
• 80年代以来，高效薄层板的出现以及薄层自动 化仪器的使用，极大地提高了薄层分析结果的 重现性和准确度。有的学者称之为现代薄层色 谱技术（Modern TLC)或仪器化薄层色谱技术 （Instrumental planar chromatography)。
薄层色谱法介绍和其应用
第三章 薄层色谱法实验方法及应用
特点：1、分离能力强，斑点集中； 2、灵敏度高； 3、展开时间短； 4、试样预处理简单； 5、上样量大； 6、仪器简单操作方便
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法
• 薄层色谱法
–薄层固定相 、薄层点样、薄层 展 开、显色、记录
薄层色谱法介绍和其应用
硅胶预制薄层板 （DC- Fertigplatten SIL G-25 MN ）
菊苣薄层鉴别图谱 薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法介绍和其应用
第二章 薄层色谱法的分类和原理
• 根据原理分类：
薄层色谱法
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 其他薄层色谱
薄层色谱法介绍和其应用
吸附色谱：
• 吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸 附的能力不同，当用展开剂展开时，不同的物 质因吸附和解吸附能力的不同而造成的迁移不 同，从而达到分离的目的，是薄层色谱上最常 用的方法。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、硅 藻土等。
薄层固定相
• 按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如 硅胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如C18 键合相薄层板）等。
• 硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，有硅胶G板、 硅胶GF254板、硅胶H板和硅胶HF254板等规格。
• 高效薄层板（HPTLC，High Performance TLC）所使 用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范 围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的 分离效果。
灯（366nm）
样品：1. 华重楼； 2. 华重楼；3.重楼皂苷I； 4. 重楼对照药材；5. 滇 重楼；6. 滇重楼；7. 滇 重楼
薄层色谱法介绍和其应用
薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别
高效硅胶预制薄层板 （ HPTLC-Fertigplatten Nano-DURASIL-20 MN ）
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱技术产生和发展可分为以下3个阶段： • 起步阶段 • 推广普及阶段 • 发展提高阶段
薄层色谱法介绍和其应用
• 1938年 N. A. Izmailor和 M. S. Schraiber首次在 显微镜载玻片上涂布的氧化铝薄层分离了多种 植物酊剂中的成分，标志着薄层色谱法的诞生。
10-100 0.1-10
薄层固定相 HPTLC与普通TLC的差别
A: HPTLC Silica gel 60
（Merck）
A
B:硅胶G预制板(青岛海
洋化工厂)
展开剂: 氯仿-甲醇-水
（15：5：1），10℃以
下放置后的下层溶液
显色: 10%硫酸：乙醇，
105℃加热约5分钟
检视: 可见光和紫外光
B
薄层色谱法介绍和其应用
薄层色谱法
薄层色谱法介绍和其应用
• 薄层色谱法（Thin Layer chromatography， TLC）是 20 世纪 50 年代发展起来的一种平面 色谱技术；至20 世纪 60 年代后，对薄层色谱 法在使用器材的规格、操作方法及术语使用的 标准化等方面进行了大量的工作，使该方法日 趋成熟和完善。迄今几十年来， TLC已在医药、 滥用毒品检测、农药、食品、化工、环保等多 方面有了广泛的应用。