芍药甘草汤不同极性部位对痛经模型大鼠MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO、PGE2、PGF2α影响-马跃

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第19卷 第3期 2017 年 3 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 19 No. 3 Mar .，2017
芍药甘草汤不同极性部位对痛经模型大鼠MDA、SOD、
GSH-PX、ROS、NO、PGE 2、PGF 2α影响
马跃1，杨燕云1，张振秋1，杜晓娟1，臧彬如2
（1.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600；2.辽宁中医药大学杏林学院，辽宁 沈阳 110167）
摘 要：
目的：研究芍药甘草汤不同极性部位对原发性痛经模型大鼠丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）、前列腺素E 2（PGE 2）、前列腺素F 2α（PGF 2α）的影响，确定芍药甘草汤最佳极性部位。

方法：大鼠腹腔注射己烯雌酚与缩宫素制备原发性痛经模型，观察并记录空白组、模型组、石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、乙醇部位组、水部位组大鼠扭体次数和子宫重量；酶联免疫吸附法测定血清中MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO 含量；剖取子宫，制备10%匀浆液，测定子宫中PGE 2、PGF 2α含量。

结果：针对大鼠血清中MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO 这5项指标，与模型组比较，除石油醚部位组，各实验组差异均有统计学意义；针对大鼠子宫中PGE 2、PGF 2α这两项指标，与模型组比较，除石油醚部位组，各实验组差异均有统计学意义。

结论：芍药甘草汤通过降低痛经模型大鼠MDA、ROS、PGE 2、PGF 2α含量，提高SOD、GSH-PX、NO 含量，治疗大鼠痛经，确定芍药甘草汤最佳极性部位是乙醇部位。

关键词：芍药甘草汤；极性部位；原发性痛经
中图分类号：R711.51 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 03- 0032- 03
收稿日期：2016-08-10
基金项目：辽宁省科学技术基金项目（2013020176）作者简介：马跃（1991-），女，辽宁沈阳人，硕士研究生，研究方向：中药分析。

通讯作者：张振秋（1964-），男，辽宁本溪人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中药分析。

Effect of Different Polar Fractions of Shaoyao Gancao Decoction about MDA，SOD，GSH-PX，ROS，NO，PGE 2，PGF 2α on a Dysmenorrhea Model Rats MA Yue 1，YANG Yanyun 1，ZHANG Zhenqiu 1，DU Xiaojuan 1，ZANG Binru 2（1.College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China；2.Xinglin College，Liaoning University of
Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110167，Liaoning，China）
Abstract：Objective ：To study the effects of different polar fractions of Shaoyao Gancao Decoction about MDA，SOD，GSH-PX，ROS，NO，PGE 2，PGF 2α on a primary dysmenorrhea model rats and explore the best polar fraction. Methods ：Injected diethylstilbestrol and oxytocin into rats to get the dysmenorrheal model and to study the treatment effects of different polar fractions and model group；All rats were detected serum MDA，SOD，GSH-PX，ROS，NO by ELISA；Obtained the living uterine tissue homogenized into homogenate，which determined the activity of PGE 2，PGF 2α by ELISA. Results ：Compared with the model group，in serum，except the petroleum ether group，the results of other experimental groups were statistically significance；Compared with the model group，in uterine tissue homogenate，except the petroleum ether group，the results of other experimental groups were statistically significance. Conclusion ：Shaoyao Gancao
580-582.
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DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.03.009
19卷辽宁中医药大学学报
芍药甘草汤为常用的经典名方，源于医圣张仲景《伤寒论·辨太阳病脉证并治》，该方药少而力专（由白芍和炙甘草组成），方中药虽两味，但结构严谨，配伍精当，其镇痛作用明显，尤其在治疗妇女痛经方面有突出的疗效[1-2]。

经本课题组前期试验发现，白芍甘草药对对原发性痛经模型大鼠有镇痛作用，可以缓解痛经[3]。

本实验主要以原发性痛经模型大鼠扭体反应次数和子宫指数（即子宫重量）、血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）含量及子宫中前列腺素E2（PGE2）、前列腺素F2α（PGF2α）含量为指标，研究芍药甘草汤不同极性部位对原发性痛经模型大鼠各指标的影响及其作用机制，确定芍药甘草汤最佳极性部位。

1 材料和方法
1.1试验药物
本实验所用的白芍饮片购于安微省亳州市远光中药饮片厂，（炙）甘草饮片购于大连权健中药饮片有限公司，以上两种饮片经过辽宁中医药大学李峰教授鉴定分别为毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根和豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）的干燥根及根茎。

本实验按照1∶1的比例称取白芍、（炙）甘草饮片共400 g，加8倍量水，加热回流提取2次，每次1 h，滤过，合并滤液，浓缩，于70℃干燥至恒重，得芍药甘草汤提取物。

称取100 g，置圆底烧瓶中，依次加石油醚（30~60 ℃）、乙酸乙酯、乙醇、水各1000 mL，加热回流2次，每次1 h，滤过，分别合并续滤液，得石油醚部位、乙酸乙酯部位、乙醇部位、水部位。

1.2动物
雌性未孕SD大鼠，SPF级，体重180~220 g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK （辽）2015-0001。

1.3试剂
己烯雌酚注射剂（广州白云山明兴制药有限公司，130607）；缩宫素注射剂（苏州市苏牧动物药业有限公司，2011100861571）；大鼠MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO、PGE2、PGF2α（ELISA）试剂盒（美国R＆D公司，201511）。

1.4仪器
芬兰雷勃 Labsystems Multiskan MK3 全自动酶标仪；芬兰雷勃 Thermo Labysystems Wellwash 4 MK2洗板机。

1.5方法
将大鼠随机分为6组（空白组、模型组、石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、乙醇部位组、水部位组），除空白对照组外，其余各组大鼠连续腹腔注射己烯雌酚注射液，每日1次，连续10 d，第1天和第10天0.8 mg/只，第2~9天0.4 mg/只。

造模第4天，各实验组灌胃给药（相当于生药8 g/kg），空白组和模型组灌等体积的生理盐水。

最后一次灌胃给药40 min后，除空白组，每只大鼠腹腔注射缩宫素2 U，观察并记录大鼠发生扭体反应的潜伏期和30 min 内大鼠扭体次数，计算子宫收缩抑制率。

腹腔注射缩宫素30 min后，所有大鼠眼球后静脉丛取血2 mL，室温放置40 min，4000 r/min离心10 min，制备血清，ELISA法测MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO 5种指标的含量。

各组大鼠取得血清样品后，断颈处死，剖取子宫，置生理盐水中清洗血液，滤纸吸干水分，称定子宫重量，精密称取子宫组织0.3 g，冰浴下研磨，制成10%子宫匀浆，4000 r/min离心10 min，取上清液，ELISA法测PGE2、PGF2α两种指标的含量。

2 结果
2.1对大鼠扭体反应的抑制作用和子宫重量的影响
大鼠扭体次数分析：除空白组大鼠未出现扭体反应，其余各组均出现不同程度的扭体反应。

与模型组比较，乙酸乙酯部位组、乙醇部位组、水部位组差异均有统计学意义（P<0.01）。

石油醚部位组与模型组比较P>0.05，石油醚部位组没有镇痛作用。

子宫指数（重量）变化情况：模型组与空白组比较，子宫增重现象明显，有显著性差异；石油醚部位组与模型组比较，几乎无差异；其余各实验组与模型组比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。

根据大鼠扭体反应抑制率得止痛效果：乙醇部位组＞水部位组＞乙酸乙酯部位组＞石油醚部位组，结果见表1。

表1 芍药甘草汤不同极性部位对痛经模型
大鼠扭体反应的抑制作用（n=8，x—±s）
组别 剂量（g/kg） 子宫指数（g） 扭体次数 抑制率（%） 空白组 0 0.33±0.02＊＊ 0 100
模型组 0 0.90±0.02 16.2±1.3 0
石油醚部位组 8 0.89±0.03 15.0±1.9 7.4
乙酸乙酯部位组 8 0.74±0.01＊＊ 8.8±0.8＊＊ 45.7
乙醇部位组 8 0.53±0.01＊＊ 3.0±0.7＊＊ 81.5
水部位组 8 0.70±0.21＊＊ 6.0±1.0＊＊ 63.0注：与模型组比较，＊＊P<0.01。

2.2对痛经模型大鼠血清中MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO含量的影响
与空白组比较，模型组大鼠血清中MDA、ROS、NO含量显著性升高，SOD、GSH-PX含量显著性降低，差异均有统计学意义（P<0.01）。

与模型组比较，石油醚部位组各指标P>0.05，差异均无统计学意义；乙酸乙酯部位组NO含量降低（P<0.05），MDA、ROS 含量显著性降低（P<0.01），SOD、GSH-PX含量显著性升高（P<0.01）；乙醇部位组MDA、ROS、NO含量显著性降低（P<0.01），SOD、GSH-PX含量显著性升高（P<0.01）；水部位组MDA、NO含量显著性降低（P<0.01），ROS含量降低（P>0.05），但与模型组
Decoction decrease the content of MDA，ROS，NO，PGE2，PGF2α，increase the content of SOD、GSH-PX on primary dysmenorrhea model rats. Shaoyao Gancao Decoction can treat dysmenorrhea rats，and determine the best polar fraction is the ethanol polar fractions.
Keywords：Shaoyao Gancao Decoction；polar fraction；primary dysmenorrhea
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比较差异不明显，SOD、GSH-PX 含量显著性升高（P <0.01），结果见表2。

综上所述，得镇痛效果：乙醇部位组＞水部位组＞乙酸乙酯部位组＞石油醚部位组。

2.3 对痛经模型大鼠子宫中PGE 2、PGF 2α含量的影响
模型组大鼠子宫中PGE 2含量为（709.04±29.94）ng/L，PGF 2α含量为（363.11±8.74）ng/L。

与空白组比较，PGE 2、PGF 2α含量显著性降低（P <0.01）；石油醚部位组与模型组比较，差异均无统计学意义（P >0.05）；乙酸乙酯部位组与模型组比较，PGE 2、PGF 2α含量显著性降低（P <0.01）；乙醇部位组与模型组比较，PGE 2、PGF 2α含量显著性降低（P <0.01）；水部位组与模型组比较，PGE 2、PGF 2α含量显著性降低（P <0.01），结果见表3。

综上所述，镇痛效果：乙醇部位组＞水部位组＞乙酸乙酯部位组＞石油醚部位组。

表3 芍药甘草汤不同极性部位对痛经模型大鼠子宫中
PGE 2、PGF 2α含量的影响（ng/L，n =8，x —
±s ） 组别 PGE 2 PGF 2α
空白组 308.76±34.56＊＊ 133.78±8.36＊＊ 模型组 709.04±29.94 363.11±8.74石油醚部位组 683.61±27.77 351.45±16.37乙酸乙酯部位组 540.08±13.14＊＊ 319.36±10.11＊＊ 乙醇部位组 405.00±19.62＊＊ 171.50±15.98＊＊ 水部位组 468.31±37.85＊＊ 220.87±17.78＊＊
注：与模型组比较，＊＊P <0.01。

3 讨论
3.1 生化指标的选择
正常情况下，机体内产生的ROS 可被抗氧化防
御系统（如超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧物酶GSH-PX）迅速清除，不会对机体产生损伤。

月经期间，子宫肌层及内膜暂时缺血，形成较多的活性氧（自由基清除剂使氧自由基转化为过氧化氢，
通过GSH-PX 酶的作用还原为水分子）[4]
，当活性氧不能被及时清除时，ROS 就会对肌体产生氧化应激损伤，从而引起细胞膜磷脂过氧化及诱导细胞凋亡等。

MDA 是脂质过氧化的最终产物，其含量变化间接反映ROS 所致的脂质过氧化程度[5-6]。

NO 在细胞凋亡和痛觉调制过程中起重要作用。

在外周，NO 通过NO-CGMP 途径作用于不同的靶细胞，表现为致痛和镇痛双重作用，这种双重作用取决于局部
NO 生成量[7]。

前列腺素类物质（PG）是重要的炎性介导和致痛物[8]。

研究发现，雌激素刺激COX-2使PGE 2、PGF 2α在局部组织中持续存在，导致局部PG 水平增加，引发异位内膜周围炎症反应，导致痛经[9]。

3.2 芍药甘草汤最佳极性部位的确定
模型组大鼠血清及子宫中MDA、SOD、GSH-
PX、ROS、NO、PGE 2、PGF 2α含量分别为（10.47±
0.75）nmol/L，（74.48±4.67）U/mL，（43.02±2.41）pmol/mL，（544.63±19.35）IU/mL，（27.49±2.71）μmol/L，（709.04±29.94）ng/L，（363.11±8.74）ng/L。

石油醚部位组与模型组比较，各指标差异均无统计学意义；乙酸乙酯部位组与模型组比较，NO 含量降低，MDA、ROS、含量显著性降低，SOD、GSH-PX 含量显著性升高；乙醇部位组与模型组比较，MDA、ROS、NO、PGE 2、PGF 2α含量显著性降低，SOD、GSH-PX 含量显著性升高；水部位组与模型组比较，MDA、NO、PGE 2、PGF 2α含量显著性降低，ROS 含量降低，但差异不明显，SOD、GSH-PX 含量显著性升高。

综上所述，芍药甘草汤通过降低MDA、ROS、PGE 2、PGF 2α的含量，升高SOD、GSH-PX、NO 的含量，达到缓解及治疗痛经的效果[10]。

根据血清、子宫中指标的含量、扭体反应抑制率、子宫重量变化情况4种因素，所得结论完全一致。

乙酸乙酯部位组、乙醇部位组、水部位组与模型组比较，各指标差异均有统计学意义，镇痛效果乙醇部位组优于水部位组，优于乙酸乙酯部位组，优于石油醚部位组，优选出乙醇部位组为芍药甘草汤最佳极性部位。

◆
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表2 芍药甘草汤不同极性部位对痛经模型大鼠中MDA、SOD、GSH-PX、ROS、NO 含量的影响（n =8，x —
±s ）
组别
MDA SOD GSH-PX ROS NO （nmol/L） （U/mL） （pmol/mL） （IU/mL） （μmol/L） 空白组 4.34±0.47＊＊ 125.59±7.57＊＊ 72.70±3.44＊＊ 227.42±20.48＊＊ 57.47±3.29＊＊ 模型组 10.47±0.75 74.48±4.67 43.02±2.41 544.63±19.35 27.49±2.71石油醚部位组 9.79±0.52 81.89±5.64 45.62±4.32 554.29±22.43 29.26±2.76乙酸乙酯部位组 9.37±0.52＊＊ 89.60±2.63＊＊ 57.52±2.42＊＊ 492.13±13.31＊＊ 46.02±2.93＊ 乙醇部位组 7.14±0.52＊＊ 107.89±2.33＊＊ 63.20±3.21＊＊ 253.12±23.32＊＊ 56.42±2.52＊＊ 水部位组 8.42±0.49＊＊ 107.57±2.14＊＊ 64.86±3.48＊＊ 528.59±15.87 52.55±2.68＊＊
注：与模型组比较，＊P <0.05，＊＊P <0.01。