AYL-S7-302 李斯特菌属和丹毒丝菌属鉴定3.0

李斯特菌属和丹毒丝菌属鉴定
1．概述
1.1李斯特菌
无芽胞，不分枝、不规则、短小（0.4~0.5μm×0.5~2μm）、革兰染色阳性杆菌。

单个或短链状排列，陈旧培养物或粗糙形菌落呈现6~20μm长纤丝状，周身鞭毛，稀少、仅1~5根，在28℃运动，37℃时运动较少见。

培养1~2天，菌落1~2mm大小，光滑，蓝灰色。

最适生长温度30~37℃，4℃时需要几天才能生长，兼性厌氧，除少数菌株外，触酶阳性，氧化酶阴性，发酵D-葡萄糖和其他碳水化合物产酸。

V-P和M-R 阳性。

快速水解七叶苷。

不水解尿素和明胶。

H2S和靛基质皆阴性。

1.2猪红斑丹毒丝菌
嗜常温，兼性厌氧，无芽胞，无抗酸性，革兰染色阳性，短小杆菌、菌体末端圆形、
单独、短链或不分枝长细丝状（60μm以上）。

无动力，需在较复杂的培养基上生长，最适温度30~37℃，Ph7.2~7.4，耐8.5%NaCl，触酶、氧化酶阴性，不水解七叶苷，发酵葡萄糖能力弱，不产气，M-R和V-P 阴性；靛基质，脲酶阴性，在三糖铁琼脂产生H2S。

2．鉴别与鉴定
2.1李斯特菌属菌株鉴定特点：革兰染色阳性杆菌，细菌在湿片中呈翻筋斗运动，触酶阳性，七叶苷阳性，加上发酵葡萄糖产酸，M-R和V-P试验阳性证实。

2.2与其他菌属的鉴别该菌容易与革兰阳性细菌如链球菌的鉴别是革兰染色形态、动力触酶试验。

与丹毒丝菌属、乳杆菌属菌种的鉴别：动力、触酶、4℃生长。

2.3属内种间的鉴别产单核李斯特菌的溶血环狭窄，没有延伸超过菌落的边缘，而伊氏李斯特菌有明显超过菌落边缘的宽大溶血环。

虽然斯氏李斯特菌亦有狭窄溶血环，但根据表１所示生化反应可以区别。

CAMP 试验：用金黄色葡萄球菌和马红球菌检测单核李斯特菌协同溶血反应，需谨慎解释与马红球菌之间协同反应，用葡萄球菌的β-溶血素纸片法可以加强协同溶血反应，利于结果观察。

伊氏李斯特菌伊氏亚种和伦敦亚种之间的鉴别：核糖试验，前者阳性，后者阴性；N-乙酰-β-D甘露糖胺试验，前者不定，而后者阳性。

2.4血清学分型：根据李斯特菌种的菌体抗原、鞭毛抗原，将菌株分13个血清型。

命名：1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a,
3b ,3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e, 7; 人类疾病相关临床分离菌血清型为：1/2a, 1/2b, 4b。

最近介绍有商业血清试剂盒供试验。

2.5丹毒丝菌属菌种的鉴定：猪红斑丹毒丝菌生长在血琼脂平板孵育24h的菌落，革兰染色阳性，但易脱色呈阴性，阳性菌体呈颗粒结节状，串珠样。

光滑型菌落菌细胞杆形或球杆状，有时短链状，粗糙菌落的菌体长细纤丝形，超过60μm。

触酶阴性，乳糖、H2S阳性。

与扁桃体丹毒丝菌的区别是后者发酵蔗糖。

猪红斑丹毒丝菌最显著特点是三糖铁培养基上产H2S，临床上分离的革兰阳性菌，除了需氧芽胞菌属某些菌种外，极少在三糖铁上产H2S，同芽胞菌种的鉴别是菌体形态、芽胞形成和触酶试验。

另外猪丹毒丝菌进行明胶穿刺培养，孵育22℃，出现“试管刷”状生长。

丹毒丝菌在形态学、生理学与李斯特菌相似。

3．抗菌药物敏感试验和抗菌药物敏感性
CLSI推荐李斯特菌抗菌药物敏感试验：肉汤稀释法：用含阳离子M-H培养基，加2%~3%溶解马血；孵育温度35℃；16~20h观察结果；产单核李斯特菌不是真正的苛氧菌，试验用M-H肉汤不补充血液，也能获得满意结果。

青霉素MIC敏感断点≤2μg/ml，氨苄西林MIC敏感断点≤2μg/ml。

体外敏感试验或动物试验模型研究表明，一种氨基糖苷类抗菌药物能够增强青霉素对产单核李斯特菌抗菌活性。

耐药质粒介导的对氯霉素、大环内酯、四环素耐药。

有关资料强调，虽然头孢菌素在体外可能出现敏感，但体内无疗效，决不用头孢菌素治疗李斯特菌感染。

实验室无论任何时候，从直接涂片、培养物中，发现疑似产单核李斯特菌信息，应该快速传递给临床。

丹毒丝菌至今尚无标准化方法做抗菌素敏感试验。

跟据报告该菌对青霉素、头孢菌素、克林霉素、亚胺培南、四环素、氯霉素、红霉素、氟奎诺酮类敏感；氨基糖苷类、磺胺和万古霉素耐药。

青霉素是首选治疗猪丹毒丝菌引发局部、全身性感染。

４．结果报告和解释
李斯特菌属菌种广泛分布在环境，曾从土壤、腐烂蔬菜、饲料、污水、新鲜或冷冻家禽、肉类、生乳、乳酪、屠宰场肥料以及无症状人群、动物带菌者检出，也从多种哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳虫和昆虫中分离到。

该菌适应4℃生长，故有许多机会进入食品生产或加工过程，人类摄取已被李斯特菌污染食品，引起感染。

该属唯有产单核李斯特菌，有较高致病性。

在成人可引起原发性脑膜炎、脑炎、败血症。

猪红斑丹毒丝菌广泛分布于自然界，适宜于低温、碱性条件和有机物寄生生存，但常见与猪相关动物疾病。

人类的感染是皮肤擦伤、咬伤、创伤多见于双手、双臂，大多数发生在兽医、屠宰工人、水产饲养者，疾病局限于蜂窝织炎，或者损害局部变硬无痛感、水肿和发炎，边缘清楚但不化脓。

预后一般较差。

扁桃体丹毒丝菌从未在人类标本中获得。

表１李斯特菌属各菌种的鉴别特性
特性格氏李
斯特菌无害李
斯特菌
伊氏李
斯特菌
产单核李
斯特菌
斯氏李
斯特菌
威氏李
斯特菌
β-溶血- - ++ + + -
CAMP试验（金黄色葡萄球菌）- - - + + -
CAMP试验（马红球菌）- - + v - -
产酸：
甘露醇+ - - - - -
α-甲基甘露糖苷+ + - + - +
L-鼠李糖v v - + - v 可溶性淀粉+ - - - ND ND
D-木糖- - + - + + 水解马尿酸盐- + + + ND ND 硝酸盐还原v - - - ND ND 小白鼠致病性- - + + - -
注：+，阳性，≥90%以上菌株阳性；-，阴性，≥90%以上菌株阴性；ND，没资料；v，不定
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