DNA多态性分型技术
法医学中的DNA检验技术研究
法医学中的DNA检验技术研究基于与基因有关的分子技术，DNA检验技术是目前法医学领域中的最重要的检验手段之一。
DNA检验技术以其高度精准的检验结果和可靠性，在犯罪侦破、协助司法证据等方面具有重要的实际应用意义。
本文将从DNA检验技术的原理、应用，以及存在的问题等方面进行论述和分析。
一、DNA检验技术的原理DNA是指人体细胞核内储存遗传信息的核酸分子，是构成人体基因的重要组成部分。
人类DNA的序列在不同的个体之间存在差异，这种差异主要表现为个体之间不同的基因型。
DNA检验技术是以人类DNA序列间的差异为依据，通过不同的方法进行分析，以鉴定参与特定事件的个体身份及相关信息。
DNA检验技术的主要方法包括多态性DNA分型技术（PCR-DNA、STR-DNA）和基因芯片技术。
前者是一种基于DNA序列内的多态性位点的检验技术，后者则利用基因芯片实现DNA检验。
多态性DNA分型技术是目前常用的DNA检验技术之一，主要应用于犯罪侦查、司法鉴定和亲缘关系鉴定等方面。
二、DNA检验技术的应用1. 犯罪侦查DNA检验技术在刑事侦查中发挥着重要的作用，尤其在涉及重要案件和恶性犯罪的查处、破案中更是不可或缺。
通过对犯罪现场、物证等各个方面的DNA信息进行提取、检测，可以从DNA舞蹈轨迹、血迹、唾液、精液、毛发、指甲、纸巾等物证中提取出犯罪嫌疑人的DNA信息，为后续侦查工作提供重要的参考。
DNA检验技术的应用一方面有利于缩小犯罪嫌疑人的范围，缩短破案时间，另一方面有利于加强对犯罪嫌疑人的证据把握和司法公正。
2. 亲缘关系鉴定DNA检验技术在亲缘关系鉴定中也有广泛的应用，主要应用于父母子女、兄弟姐妹、祖孙、堂兄妹等亲亲属鉴定。
通过对参与鉴定人的DNA序列进行比对，能够判断亲缘关系的存在或者缺失，为后续血缘关系确认和家庭纠纷调解提供依据。
同时，DNA检验技术也可用于鉴定无血缘关系的领养子女或被收养人之间的亲缘关系，避免因亲子关系不确定而产生的法律纠纷和争议。
aflp原理
aflp原理AFLP原理AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism，扩增片段长度多态性）是一种基因分型技术，广泛应用于分子生物学和遗传学研究中。
它是通过扩增特定DNA片段并测定其长度差异，从而揭示基因组中的多态性。
AFLP技术的原理非常简单。
首先，将目标DNA进行限制性内切酶切割，生成许多DNA片段。
然后，通过引物引导的PCR反应，选择性地扩增特定的DNA片段。
最后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物，根据其长度差异进行分型分析。
在AFLP技术中，首先需要选择适当的限制性内切酶对DNA进行切割。
这些内切酶通常是4-8个核苷酸的识别序列，通过切割DNA 的特定位点产生DNA片段。
选择不同的内切酶对DNA进行切割，可以获得不同的DNA片段，从而增加了分析基因组多态性的灵活性。
切割后的DNA片段会在两端添加适配器序列，这些适配器序列包含引物结合位点。
引物是具有特定序列的短DNA片段，用于引导PCR扩增特定的DNA片段。
在PCR反应中，引物会与适配器序列结合，并在DNA模板上进行扩增。
通过引物的选择，可以扩增出特定长度的DNA片段，以便进行后续的分析。
扩增产物的分析通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
在电泳过程中，DNA片段会根据其长度在凝胶中迁移，形成一系列带状图案。
这些带状图案可以通过染色或放射自显影等方法进行可视化。
通过比较不同样品的带状图案，可以得出它们之间的遗传距离和相似性。
AFLP技术具有许多优点，使其成为遗传学研究中常用的分型方法。
首先，AFLP技术可以同时分析数百个位点，具有高通量的特点。
其次，AFLP技术不需要预先了解目标基因的序列信息，适用于无序基因组的分析。
此外，AFLP技术还具有高度重复性和稳定性，能够产生可重复的结果。
在实际应用中，AFLP技术被广泛用于遗传多样性分析、亲缘关系研究、遗传图谱构建等方面。
例如，在植物遗传多样性研究中，AFLP 技术可以用于分析不同品种间的遗传差异，评估种质资源的多样性。
法医DNA分型
2个个体的混合样本
基因座下面出现等位基因的数目为5，6
3个个体的混合样本
基因座下面出现等位基因的数目大于6 3个及3个以上个体的混合样本
Gene mapper ID
Gene mapper ID 它拥有Gene Scan 与Genetyper分析数据 的能 力。
GeneScan 软件根据内标分析计算DNA片段的大 小（碱基值），
“Stutter”峰:仔细观察STR电泳图谱，通常会发现一些 比每个等位基金峰少几个碱基的小峰，这些Stutter产物是 在用DNA聚合酶对STR基因座进行PCR扩增的过程中产生 的。Stutter产物又被称作影子带，或者DNA聚合酶滑脱 产物。
混合样本的判别：
基因座下面出现等位基因的数目为3，4
重复DNA:中等长度的核心重复单位，有时称为小卫星或可变数目的 串联重复（VNTR）.
STR:长度范围大约在10-100各碱基；包括 2-6个碱基重复单位的DNA 区域称为微卫星、简单序列重复（SSR）或者（STR）.
可分为两类： VNTR分型、STR分型
RFLP:用限制性内切酶切割VNTR附近的DNA片段,称为限制性片段长 度多态性技术。
度的一个标准
数据处理参数分为：原始数据处理（Raw Data Analysis）、Size Call、Allele Call三部分
原始数据处理： （1）确定分析范围；Auto-Range （2）使峰形图更加的光滑smooth （3)起点统一到原点Baseline substraction （4）pull-up Correction 将连带的峰删除
聚合酶链式反应处理微量和低量法医样本的能力强于RFLP技术 法医DNA分型使用的是STR分型
STR分型的优势：可实现自动化并使用灵敏的荧光检测技 术 ，法庭科学家可快速地从这些遗传标记中收集到的数 据。同过对多个染色体上的基因座进行分析，STR在无关
人类基因组多态性的分析方法及在遗传疾病中的应用
人类基因组多态性的分析方法及在遗传疾病中的应用人类基因组多态性是指人类多个个体之间存在着基因序列的差异性。
这些差异性可能会导致个体之间在表型上的差异或疾病易感性的不同。
因此，研究人类基因组多态性对于深入了解人类遗传学和疾病遗传学非常重要。
下面将介绍几种对于人类基因组多态性的分析方法，并讨论其在遗传疾病中的应用。
一、基因分型技术基因分型是指在多个个体之间比较某个或某些基因的差异，并将其分类为不同的等位基因。
这种方法能够很好地揭示一个或多个基因的多态性，帮助研究人员识别和验证基因与疾病之间的关联关系。
其中比较常用的基因分型技术包括：1.聚合酶链式反应（PCR）-限制性片段长度多态性（RFLP）方法。
通过PCR扩增DNA片段，然后在扩增产物中利用限制性内切酶切割特定位点，从而获得不同长度的DNA片段，进而区分不同等位基因。
2.序列特异性引物扩增（STP）方法。
利用引物扩增目标序列，然后检测PCR产物之间的序列区别，从而分离出不同等位基因。
这些技术已经被广泛用于各种遗传疾病的研究中，如糖尿病、乳腺癌、阿尔茨海默氏症等。
通过基因分型技术，可以对与某种疾病相关的基因进行分析和筛选，从而发现基因变异与该疾病的相关性。
此外，基因分型技术也可以用于临床遗传诊断，帮助医生判定某些遗传病患者的疾病类型。
二、基因芯片技术基因芯片是一种高通量技术，能够同时检测上千种基因的表达水平或基因型等信息。
该技术能够大大减少对生物样本的需求量和操作次数，加快数据处理速度，被认为是遗传学研究中一种非常有前景的技术。
基因芯片技术可以分为两种：基于外显子的芯片和基于基因组的芯片。
1.基于外显子的芯片。
外显子是真核基因组中含有编码蛋白质的区域，占总基因组大小的不到2%。
基于外显子的芯片可以同时检测大量外显子区域的SNP（单核苷酸多态性），这些SNP通常被认为是与遗传疾病密切相关的。
2.基于基因组的芯片。
基于基因组的芯片可以根据参考序列比对检测DNA片段的变异情况，既可以检测SNP，也可以检测CNV（基因组拷贝数变异）。
DNA多态性及其分析
DNA多态性及其分析DNA多态性是指DNA序列在人群或物种中存在的差异。
这些差异可以以单个核苷酸的替代（单核苷酸多态性，SNP）、插入（插入/缺失多态性，INDEL）或重复序列（重复序列多态性）等形式存在。
这些多态性可以对个体之间的遗传差异进行研究，并被广泛用于种系关系、疾病易感性、药物反应等方面的研究。
DNA多态性的分析是指通过不同的实验方法来研究DNA中的差异。
常用的分析方法包括PCR（聚合酶链式反应）、测序、引物扩增长度多态性（PCR-RFLP）、串联重复序列（STR）等。
下面将详细介绍各种分析方法及其应用。
PCR是一种广泛应用的DNA分析方法，通过特定的引物扩增特定DNA序列，从而实现对该序列的研究。
PCR通常通过选择性引物来扩增目标序列，然后通过电泳或测序等方法来检测PCR产物。
PCR在研究DNA多态性中被广泛应用，例如通过扩增SNP位点来研究个体的遗传差异。
测序是一种可以直接读取DNA序列的方法，可以精确地测定DNA中的碱基序列。
测序方法包括Sanger测序、NGS（Next-Generation Sequencing）等。
测序方法可以用于鉴定SNP、INDEL等多态性，并且可以在同一次实验中检测多个位点。
PCR-RFLP（引物扩增长度多态性）是一种通过PCR扩增特定DNA序列后再通过限制性酶切来检测DNA多态性的方法。
不同的基因型会产生不同的酶切片段，从而可以通过电泳等方法来检测不同的基因型。
PCR-RFLP方法简单、便宜，并且适用于大规模筛查。
STR（串联重复序列）是指在DNA中串联重复的小片段DNA序列，STR位点的多态性通常由重复单元的数目和结构差异所决定。
STR是DNA指纹分析的主要依据，可以在法医鉴定、亲子鉴定等方面发挥重要作用。
DNA多态性的分析在生物学、医学等领域有广泛的应用。
例如，在种系关系研究中，通过分析DNA多态性可以揭示不同群体或物种之间的遗传关系。
在疾病研究中，通过对DNA多态性的研究可以发现与疾病相关的位点，从而对疾病的易感性进行分析。
DNA多态性及其分析
一．基因多态性
基因的多态性
遗传表型的多态性
在生物群体中，对于某一基因座位来说，属于
这一位点的等位基因越多，这一座位的基因多 态性就越复杂 。
HLA 白细胞抗原系统：仅HLA-DR抗原的编码
位点就有HLA-DRA，-DRB1，B2，B3，B4， B5等10个座位，超过200个等位基因 。
一．RFLP分析技术
（一）基本原理
限制性酶切片段长度多态性技术，简称 RFLP技术（restriction fragment length
polymorphism，RFLP）
1. 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease） 能够识别DNA双链上特异 的碱基序列并能将之切断。不同的限制性 内切酶有各自特异的识别序列，一般为4~8 个碱基对 。
DNA多态性及其分析技术
免疫与分子生物学技术研究室 董燕
广州中医药大学 临床药理研究所
第一节 多态性概述
一．定义
自然界的生物有千百万种，每一种生物的个体之间存在着许多的 差异。一种生物群体内，某一性状方面也存在着不同的个体变异。
不同种的生物以及同一种生物的不同个 体之间都存在着许多差异，称为生物的 多态现象，即生物的多态性。 （polymorphism）
采用合适的限制性内切酶 切出一系列长度的DNA片段 根据片段是否长度一致来推测其DNA序列是否
相同 用标记好的相应的DNA探针与这些片段进行杂
交 图谱反映出基因组DNA碱基序列组成是否存在
差异。
RFLP——通过核酸的限制性酶切片段长度多态 性来揭示DNA碱基序列组成的不同，因而称为
是影响RFLP图谱的一个重要因素。已分离500种 ， 常见的100多种
第四章分DNA长度多态性2
电泳
电泳是指溶液中的样品（ 电泳是指溶液中的样品（DNA混合物 是指溶液中的样品 混合物 产物） 在电场影响下可对多个 或PCR产物）,在电场影响下 产物 在电场影响下 DNA片段进行分离的过程。 的过程。 的过程
不同琼脂糖凝胶浓度与分离DNA大小范围的关系 大小范围的关系 不同琼脂糖凝胶浓度与分离
DNA复制原理 复制原理
DNA 分子的热变性原理： 分子的热变性原理：
变性（ 变性（加热95℃ ） ℃ DNA双链 双链 单链 复性（缓慢冷却55 ℃ ） 复性（缓慢冷却 变性的目的： 变性的目的： 复性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单 链的结合
PCR产物 PCR产物 的聚丙烯酰胺凝胶电泳
PCR技术的特点 PCR技术的特点 1 灵敏度高 是用于微量检材 2 特异性高 3 适用于降解检材 种属特异性好， 4 种属特异性好，根据人类的基因座设计的 引物。 引物。 易于操作， 5 易于操作，实现自动化
由于单个STR提供的信息有限，难以满足 法医学鉴定之要求，所以多个STR联合应用， 这样可以提高个体识别率，降低偶合概率。随 着技术改进和成熟，复合扩增技术应运而生。 采用复合扩增结合银染法和复合扩增结合自动 化荧光检测技术，提高了准确率，降低了工作 强度。但由于荧光复合扩增技术一次检测可达 到个人同一认定、亲权鉴定，避免因电泳过程 中带的漂移及检测过程中胶的改变而造成的片 段对比困难和错误，现在成为主要的检测方法，
＋ Mg 2＋
优化浓度 10 ～15mmol/L 200umol/L 0.1 ～2umol/L 0.1～10ng人类基因组 ～ 人类基因组 0.5 ～2U 1.5～2mmol/L ～ 50mmol/L
线粒体DNA多态性
mtDNA分析技术
mtDNA分析技术
基本技术：DNA测序
第一代荧光自动测序技术：HVR I 和 HVR II全控 制区（control region, CR） 第二代测序技术：全线粒体基因组
mtDNA分析技术
mtDNA分析适用检材
缺少毛根，毛球或附着组织的毛发，断裂的毛干 适用提取DNA方法：碱裂解法
瓶颈效应和复 制分离
下一代平均异 质性水平相差 较大
瓶颈效应指卵细胞 中的mtDNA拷贝， 只有数个能进入下 一代。
线粒体遗传疾 病的家族间临 床变异性
第 二
mtDNA多态性 节
mtDNA多态性
线粒体DNA分区
控制区（非编码区，D环）：16024~576
绝大部分mtDNA多态性都集中在此区 高变区（high variabe regions, HVR）I和 II16024~16365，73~340 编码区
线粒体DNA多态性
贵州医科大学法医学院 任峥
主要内容内容
掌握
线粒体DNA的特点
线粒体DNA单倍型类群的概念和 意义
线粒体DNA分型的结果解释
主要内容
线粒体DNA与 线粒体DNA的 线粒体DNA分 核DNA的区别 多态性类型 型的命名
线粒体DNA的 线粒体DNA的
结构
分析技术
第
概述
一 节
mtDNA结构与功能
• mtDNA异质性
两种不同的mtDNA序列存在于同一个细胞， 组织或个体时称之为异质性（heteroplasmy）
表现：2个峰成分，次要峰占主峰40%以上， 可重复
• mtDNA异质性
出现几率：2%~8%（一代测序）
1~2个碱基：考虑异质性 两样本来自同一母系
DNA多态性及其分析技术
• 三.性染色体多态性
• X染色体的重复序列多态性 • Y染色体的特异性片段多态性。
• 四.线粒体的DNA多态性
• 人线粒体DNA的D环 • 两个无关个体间，完全相同的可能性只有 0.27%。
第三节 DNA多态性分析技术
• 一.RFLP分析技术
• 基本原理
• 限制性酶切片段长度多态性技术（restriction
fragment length polymorphism，RFLP）：用某种特 定的限制性内切酶消化不同的DNA片段，由于DNA的碱 基组成不同，就会产生不同长度的酶切片段。这样采 用合适的限制性内切酶消化待分析的DNA片段，就能根 据切出来的片段是否长度一致来推测其DNA序列是否相 同，然后用标记好的相应的DNA探针与这些片段进行杂 交，显出的图谱就可以反映出基因组DNA碱基序列组成 是否存在差异。这一技术的基础是通过核酸的限制性 酶切片段长度多态性来揭示DNA碱基序列组成的不同。
• 三.分类
• 遗传多态性主要可分为遗传表型的多态性和 DNA的多态性两大类。
• 由遗传控制表现出来的性状就是遗传表型。 • 检测遗传表型多态性有其局限性： • ①遗传表型的多态性只反映出编码基因的部分 变异。后者只占人基因组总DNA的10%（＜10%）。基
因及基因相关序列占总DNA的25%。 • ② DNA序列中的同义突变不会引起表型的改变。 这时检测表型就不能发现编码基因中存在的变异。 • ③基因的表达会有变异，基因型完全相同的生物体 在不同的生长条件下可能有不同的表型，靠检测表型 多态性来推断基因有时会出现错误结论。
• 二.标准
• 发生遗传分离的基因座位（locus）具有两个 以上等位基因时，其最常见的等位基因的频率 不超过0.95或0.99时，这个基因座位就被认为 具有多态性。在某些时候，一个基因位点上只 由一个基因占据，但有时这个位置上缺乏这一 基因，这时就会出现“有”和“无”两种情况， 被称为二态性（dimorphism）。
DNA多态性分析基础详解
DNA多态性分析基础详解DNA多态性分析（Polymorphism Analysis of DNA）是一种用以研究个体之间基因组差异的分析方法。
DNA多态性是指DNA序列的差异，这些差异可能会导致个体之间的遗传差异。
DNA多态性可以作为人类遗传学、分子进化学和医学研究的重要工具之一DNA多态性分析可以通过不同的方法进行。
其中常用的方法包括限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）、单点突变（Single Nucleotide Polymorphism，SNP) 分析、序列分析和扩增子长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）等。
RFLP是一种具有高度位点特异性的分析技术。
这种方法是基于限制酶特异性切割DNA，然后通过电泳将产生的DNA片段分离，并通过染色剂将其可视化。
RFLP可以用于检测DNA序列的特定变异位点，从而确定个体之间的差异。
SNP分析是目前最常用的DNA多态性分析方法之一、这种方法利用PCR扩增待检测的DNA片段，然后使用特异性引物结合DNA序列进行扩增。
产生的扩增产物将通过电泳分离，并通过测序或其它方法来检测SNP位点的具体变异。
序列分析是一种直接检测DNA序列的方法。
它利用测序技术来确定个体之间的差异，通常应用于长序列的DNA分析。
序列分析可以提供更精确的结果，但是相对较为耗时和费用较高。
AFLP则是一种无需基因序列信息即可研究DNA多态性的方法。
这种方法将限制酶切割DNA，然后使用引物对产生的DNA片段进行扩增。
产生的扩增产物经过电泳分离并可视化，从而了解个体之间的差异。
DNA多态性分析在人类遗传学研究中具有广泛的应用。
它可以用于亲子鉴定、个人特征分析、基因功能研究以及疾病易感性筛查等领域。
在医学研究中，DNA多态性分析可以用于确定特定基因变异与特定疾病之间的关系，从而为疾病的早期诊断和个体化治疗提供依据。
基因分型的方法及其原理
基因分型的方法及其原理基因分型是一种对个体的遗传信息进行分析和描述的方法，它能够帮助科学家们了解不同基因型在表现型上的差异，为研究遗传疾病、种群遗传学以及个体化医学等领域提供重要依据。
本文将详细介绍基因分型的方法及其原理，让读者更深入地理解这一重要的遗传学技术。
1. 基因分型的方法：基因分型的方法有多种，其中包括基于PCR的多态性分析、序列特异性引物扩增（PCR-SSP）、序列标记的分析（SNP）、等位基因特异性PCR扩增等。
下面将分别介绍几种主要的方法。
（1）PCR多态性分析这是一种利用多态性位点进行基因分型的方法，通过PCR扩增特定的DNA片段，然后利用聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳等技术来分析不同个体的基因型差异。
这种方法主要适用于一些基因座具有多态性的情况，例如人类HLA系统、STR（Simple Tandem Repeat）位点等。
（2）SNP分型SNP（Single Nucleotide Polymorphism）是指在基因组中的单核苷酸位点上存在着两个或两个以上的等位基因，由于其高度稳定和广泛分布，成为了基因分型的重要标记。
SNP分型采用基因芯片或测序技术来检测不同个体在SNP位点上的等位基因，从而进行基因型分析。
（3）等位基因特异性PCR扩增这是一种利用等位基因的特异性差异进行基因分型的方法，通过设计特异性引物来扩增含有特定等位基因的DNA片段，然后利用电泳等技术进行分型分析。
这种方法常用于检测特定基因的等位基因，如血型基因、遗传病基因等。
2. 基因分型的原理：基因分型的原理主要基于基因座上的多态性差异或等位基因的特异性差异进行分析。
不同方法的原理略有不同，但都围绕着检测和分析不同个体在特定基因座上的遗传差异展开。
（1） PCR多态性分析PCR多态性分析的原理是利用引物特异性扩增不同等位基因的DNA片段，然后通过电泳等技术进行分型分析。
多态性位点会在电泳图上呈现不同的片段模式，从而实现对不同基因型的鉴定。
SNP分型技术简介
SNP分型技术简介
PCR- RFLP
由于碱基的变异可能导致酶切点的消失或新的切点出现，从 而引起不同个体在用同一限制酶切时，DNA片段长度出现差 异，这种因内切酶切点变化所导致的DNA片段长度的差异， 称限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymporphism, RFLP）。
SNP分型技术简介
等位基因特异 PCR ( AS-PCR)
SNP分型技术简介
TaqMan 技术
原理：
TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，报告基团在探针的 5’末端，淬灭基团在3’末端。 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探 针。PCR扩增时，探针酶切降解，报告基团和淬灭基团分离， 发出荧光信号。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成， 实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 如果探针与目标序列中存在错配碱基，就会影响其释放荧光 的强度，可以通过检测反应液中的荧光强度确定基因型
SNP分型技术简介
包括单个碱基的转换、 颠换、插入和缺失等 转换：同型碱基之间 A-G 腺嘌呤-鸟嘌呤 T-C 胸腺嘧啶-胞嘧啶 颠换：嘌呤与嘧啶之间 A-T、A-C、C-G、G-T
插入的图片
SNP分型技术简介
人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可 能与SNP有关。 心脏病、癌症、糖尿病、精神病等复杂性疾病是遗传 和环境综合作用的结果。目前，发现这些多基因疾病 微效基因最有力的方法是对病例组和对照组等位基因 频率进行统计学比较，SNP是这种分析很好的一种标 记。
SNP分型技术简介
SNP分型技术简介
SNP分型技术简介
SNP分型技术简介
SNP分型技术简介
DNA多态性及其分析
特点：G＋C含量高
插入或缺失此类序列的事件发生频繁 ，有时还会 发生跳跃复制的现象。 1985年，Jeffreys等 首先用人肌红蛋白基因内含子中一段高度重复的 小卫星DNA为探针，获得了具有个体特异性的 DNA指纹图谱。
中度重复的散在重复序列 ：
BamHI 识别序列：
5’-GGATCC-3’ 3’-CCTAGG-5’
2．核酸探针
由于人基因组DNA链很长，用某一限制性内切酶消化 后，酶解出来的各种不同长度的片段往往数量巨大， 电泳后几乎是连续排列的，无法进行分析比较。 选取某种特定的DNA片段作为探针，标上一定的标记 物（如同位素、生物素等），利用碱基互补的两条 DNA单链能结合（杂交）的原理，就可以在连续排列 的一系列DNA片段中显示出与探针有同源序列的某些 DNA片段。 不同的DNA探针会显示出不同类型的 RFLP 图谱。
（3）重复序列探针 如α小卫星DNA，其重复单位群集在 基因组的某一特定区域。 重复序列探针能检测出基因组中多 处具有此类重复序列的DNA片段。
特点：能一次性检测出多个位点的 DNA片段多态性
Jeffreys等从第22号染色体上肌红蛋白基因的内 含子中分离出来的高度可变的“小卫星DNA” 探针。 并证明两个无关个体之间，这类多态性相同的 机会极微（只有3×10－11），因而他称这种 RFLP图谱为DNA“指纹”。
四．线粒体的DNA多态性
线粒体 DNA 属于核外基因，表现为非孟德尔规 律遗传。 人mtDNA D环一端347bp的序列分析资料证明， 两个无关个体间，这一段 mtDNA 序列完全相同 的可能性只有0.27%（即1/370）。
dna鉴定方法
dna鉴定方法DNA鉴定（DNA Identification）是一种比对技术，用于将两份或两份以上的DNA样本进行特定分子位点（Marker）的比对，以确认其是否来自同一个人，或者从同一个祖先血统。
目前DNA鉴定方法主要有多态性位点分型方法（Polymorphic Marker）、核苷酸序列分析方法（Nucleotide Sequencing）、基因组测序（Genome Sequencing）和周期温和随机引物扩增方法（PGR-PCR）等。
①多态性位点分型方法：多态性位点分型方法是一种利用DNA变异性手段在实验中进行比对的方法，主要通过在DNA序列上的泛稀疏多态性，将适当的位点作为鉴定依据，从而实现独特的基因型识别，将两个或更多个DNA样本进行比对，以鉴定出它们之间的相似性或不同性。
其中，最常用的技术有STR技术（short tandem repeat）、VNTR技术（variable number of tandem repeat）和AFLP技术（amplified fragments length polymorphism）。
②核苷酸序列分析方法：核苷酸序列分析方法是采用生物信息学手段，对DNA片段的核苷酸序列进行比对和分析，从而鉴定出相似或不同之处，判断两组样本是否具有相同的祖先血统，从而进行身份鉴定。
该方法可以在较短时间、较少费用内得到准确的结果，是一种高效可靠的身份鉴定技术方法，主要技术有基因测序（Gene Sequencing）、单碱基多态性分析（Single Nucleotide Polymorphism Analysis）和全基因组测序（Whole Genome Sequencing）。
③基因组测序：基因组测序也称作全基因组测序，是指对物种的整个基因组进行双向测序，以确定基因组序列及其组成结构的技术。
它是基于大规模的DNA测序，可以比较鉴定出样本间的基因序列差异，从而回答遗传学与种群学研究问题。
利用分子标记鉴定植物种属和DNA分型技术的应用
利用分子标记鉴定植物种属和DNA分型技术的应用植物是人类赖以生存的物种之一，而植物种属的鉴定则是植物科学研究中的重要环节。
为了更好地了解植物种属的基因信息，科学家们把目光投向了分子遗传学领域，并通过分子标记鉴定和DNA分型技术等手段，成功解决了许多植物种属的分类问题。
一、分子标记鉴定植物种属分子标记是指通过分子生物学技术鉴定分子相似性的一种方法。
在植物种属的鉴定中，分子标记被广泛用于DNA序列的测定和基因的克隆，进而确定植物之间的遗传关系。
1. DNA片段长度多态性分析DNA片段长度多态性分析（AFLP）被广泛应用于植物种属的鉴定。
这种分子标记技术是通过缩合酶反应将基因组DNA片段扩增，并将其进行电泳分离，然后在凝胶上观察不同长度的片段，从而鉴定植物种属。
2. 序列关联分析序列关联分析（SSR）也是一种常用的分子标记鉴定植物种属的技术。
SSR技术主要是通过PCR反应扩增核苷酸序列，并在凝胶上观察序列间的不同长度，从而实现鉴定不同的植物种属。
二、DNA分型技术在植物种属鉴定中的应用DNA分型技术是基于分子遗传学原理，通过PCR反应分析特定DNA区域的多态性，以此来确定不同植物种属的遗传关系。
在植物种属鉴定中，DNA分型技术可采取PCR-RFLP、SSCP、SNP和STR等多种技术手段。
1. PCR-RFLP技术PCR-RFLP（聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性）技术是将PCR扩增出的特定DNA序列加入酶切物并酶解，进而将其分离并观察。
PCR-RFLP技术能够明确不同植物种属的遗传差异，进而进行鉴定。
2. SSCP技术SSCP（单链构象多态性）技术是通过PCR扩增DNA片段，并将其进行单链分离，再通过凝胶电泳进行分析。
该技术能够比较直观地分析出不同植物种属之间的差异，进而鉴定植物种属。
3. SNP技术SNP（单核苷酸多态性）技术主要是通过PCR扩增目标DNA片段，然后进行DNA测序以观察SNP变异。
DNA多态性分析基础详解
DNA多态性分析基础详解DNA多态性是指细胞或个体间在DNA序列上的差异。
这种差异可以是单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism, SNP）、插入缺失多态性（Insertion/Deletion Polymorphism, Indel）、重复序列多态性（Tandem Repeat Polymorphism, TRP）等，是生物学中一个重要的遗传变异现象。
对DNA多态性的分析可以帮助我们了解基因间的差异、对个体间遗传关系的研究、对疾病易感性的预测等，因此在医学、生物学、法医学等领域有着重要的应用价值。
在进行DNA多态性分析时，首先需要从个体样本中提取DNA，并经过一系列的处理步骤进行扩增和测序，最终得到目标DNA序列。
接下来我们将详细介绍DNA多态性分析的基本原理及常用的技术方法。
1.DNA多态性的基本原理DNA多态性是由基因上的变异所致。
人类有大约3亿个碱基对，而这些基因组都是类似的。
然而，在这些基因组中却存在一些微小的差异，也就是DNA多态性。
这种多态性可以是单个碱基对的差异，也可以是较大的插入/删除（Indel）或者重复序列的差异。
其中最常见的是单核苷酸多态性（SNP），即在基因组中一些位置上的碱基对发生了变异。
例如，在一些位置上，有的个体的DNA序列是"A"，而另外一些个体的DNA序列却是"G"，这种变异就构成了一个SNP。
SNP是最基础也是最常见的DNA多态性，因此在大部分DNA多态性分析中都会对SNP进行检测。
2.DNA多态性分析的技术方法（1）PCR-SSPPCR-SSP（Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primers）是一种常用的DNA多态性分析方法。
它通过使用特异性引物扩增出目标DNA片段，然后进行电泳检测，根据不同的片段长度判断样本中的多态性。
PCR-SSP方法简单高效，广泛应用于HLA基因型分析、疾病易感性研究等领域。
终点荧光法等位基因分型
终点荧光法等位基因分型
终点荧光法是一种用于等位基因分型的技术，它通常用于分析DNA中的单核苷酸多态性（SNP）。
在终点荧光法中，DNA样本首先经过PCR扩增，然后使用特定的荧光探针进行检测。
这些荧光探针与待检测的等位基因序列特异性结合，形成荧光信号。
通过检测荧光信号的强度和颜色，可以确定样本中的等位基因类型。
终点荧光法的优点之一是其高度特异性和灵敏度，能够准确地区分不同的等位基因。
此外，该技术具有高通量性和自动化程度高的特点，适用于大规模样本的快速分型。
在进行终点荧光法等位基因分型时，需要考虑以下几个方面：
1. 实验设计，包括PCR引物的设计、荧光探针的选择等。
2. 样本处理，DNA提取和纯化是确保实验成功的关键步骤。
3. 数据分析，对荧光信号的解读和等位基因类型的确定需要进行严格的数据分析和比对。
终点荧光法等位基因分型在遗传学研究、疾病诊断和药物反应等领域具有广泛的应用。
通过对个体的等位基因类型进行分型，可以帮助科研人员和临床医生更好地理解遗传变异与个体特征之间的关系，为个性化医疗提供重要依据。
同时，终点荧光法等位基因分型也为基因组学研究提供了高效、可靠的技术手段。
实验中dna鉴定方法有哪些方法有哪些方法
实验中dna鉴定方法有哪些方法有哪些方法DNA鉴定是一种通过比较个体的DNA序列来确定个体身份的方法。
DNA鉴定在法医学、科学研究、家谱追踪以及确定两个个体的亲子关系等领域具有广泛的应用。
下面是一些常用的DNA鉴定方法：1. STR分型法：短串联重复序列（short tandem repeat, STR）是指长度为2-6bp 的DNA序列在某一特定区域内重复出现。
STR位点的多样性较高，分布于全基因组，易于分型。
STR分型法通过PCR扩增目标STR位点，然后通过凝胶电泳分析PCR产物的长度差异来确定个体的DNA序列。
2. SNP分型法：单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）是指基因组中单个核苷酸发生变异的位置。
SNP分型法通过对目标SNP位点进行PCR扩增或混合PCR扩增，然后利用PCR产物中的SNP信息来分析个体的DNA序列。
3. DNA测序法：DNA测序法通过对个体的DNA序列进行测序，来确定个体的唯一DNA序列。
目前常用的DNA测序方法包括Sanger测序、Illumina测序、Ion Torrent测序等。
DNA测序法可以用于确定个体的基因组序列，从而实现更详细的DNA鉴定。
4. RFLP分型法：限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）是指DNA序列在限制性内切酶酶切下产生的限制性片段的长度差异。
RFLP分型法通过将DNA样本与限制性内切酶酶切，并通过凝胶电泳来分析DNA片段的长度差异，从而确定个体的DNA序列。
5. Y染色体分型法：Y染色体分型法主要应用于确定亲子关系中的父子关系。
由于只有男性携带Y染色体，因此父子之间的Y染色体序列会有很高的一致性。
Y 染色体分型法通过PCR扩增Y染色体特异性位点，并通过凝胶电泳分析PCR产物的长度差异来确定父子间的亲子关系。
6. 遗传标记分析法：遗传标记分析法包括微卫星标记、SNP标记等。
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以 PCR 技术为背景，以人工合 成的碱基顺序随机排列的寡核苷 酸单链为引物，对所研究的基因 组 DNA 进行 PCR 扩增，经电泳 分离后产生DNA指纹图谱。
基本原理
模板 DNA 经 92 ～ 94℃变性解链后，在较低温度 下退火，此时，有许多位点能与随机合成的短 引物互补而形成双链结构。如果某两位点间在
多态性（ polymorphism ）是指在一个生物 群体中，同时和经常存在两种或多种不连续 的变异型或基因型或等位基因，亦称遗传多 态性（genetic polymorphism）或基因多态 性。
从本质上来讲，多态性的产生在于基因水平 上的变异，一般发生在基因序列中不编码蛋 白的区域和没有重要调节功能的区域。
切酶作用下，产生相当多的大小不等片段，这些
片段经电泳以后几乎是连续排列的，如用放射性
同位素标记的 DNA 作探针，将与被标记的 DNA
相关的片段检测出来，即可构建出多态性图谱。
基本原理
因此，RFLP即是基于限制性核酸内切酶 酶切消化核酸及标记的 DNA 探针能与任 何序列相似的片段杂交，通过片段长度 变异性来检测生物体多态性。
提取基方法
琼脂糖凝胶电泳
DNA变性、转膜、固定
核酸杂交
显影、显色、分析
限制性内切酶
(restriction endonuclease ， RE）
一类能识别环状或线性双链 DNA特定
核苷酸序列的DNA水解酶，在合适反应条
件下，使每条链的一个磷酸二酯键断开，
产生多种可测量的寡核苷酸片段的酶。
一、限制性片段长度多态性分析
restriction fragment length polymorphism， RFLP
—— 以 DNA-DNA 杂交为基础的第一代遗传 标记，是限制性内切酶、核酸电泳、印迹技 术、探针-杂交技术的综合应用
基本原理
每种生物基因型具有其独特的特征，及独特的限
制酶识别序列分布，其基因组 DNA 在限制性内
DNA多态性对微生物有哪些实际意义？ 将导致
——不同的细菌亚型
——耐药菌株出现
——毒力变异株出现
——抗原漂移与抗原变异
。。。。。。
在疾病预防控制中的应用
同源性追踪 细菌分型 传染控制
DNA多态性分析常用的方法
限制性片段长度多态性分析
随机扩增多态性DNA分析技术 细菌基因组重复序列PCR技术 扩增片段长度多态性分析技术（自学要考） 脉冲场凝胶电泳 。。。。。。
核酸分子杂交技术原理
核酸经加热变性后，在低于变性温度 20℃~ 30℃时，反应系统中加入的核酸探针 与待测核酸样品中具有互补序列的单链 DNA
或 RNA 形成双链结构，通过检测标记信号即
可检测特定的核苷酸片段。
根据探针上的标记，可用放射自显影 或加入酶底物显色的方式观察结果。
优缺点
优点
1．可靠性较高 2．来源于自然变异 3．标记覆盖面广
可扩增范围之内，且分别位于互补的两条单链
上 ， 并 且 与 引 物 的 3’ 端 相 对 应 ， 就 可 以 通 过 PCR得到一个扩增产物。
基本原理
RAPD所用的一系列DNA引物序列各不相同，但 对于任意特定引物，它同基因组 DNA 序列有其 特定结合位点，如果基因组在这些区域发生片段
插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合
②不能完全区分基因非常相似，甚至只有一 个核苷酸差异的生物类型。
RFLP与PCR-RFLP的应用
1.结 核 分 枝 杆 菌 IS6110-RFLP 分 析
2.厌 氧 菌 16SrRNA 基 因 PCRRFLP分析 3.其他
二、随机扩增多态性DNA 分析技术
random Amplified Polymorphism DNA， RAPD
缺点：
①检测步骤多，周期长；
②对DNA需求量大，一般需要5~l0μg， 纯度要求较高； ③技术复杂，操作繁琐，工作量大； ④具有放射性的危害；
⑤检测成本高。
讨论： RFLP与脉冲场凝胶电泳都是根据 基因组上的限制性内切酶位点的 多态性来对生物进行基因分型的， 那么它们两者的异同点有哪些呢？
基于上述RFLP的缺点，一种更好的 分析技术 —— 聚合酶链反应 - 限制性 片段长度多态性分析技术 （ PCRRFLP ）应运而生。
基本程序
根据基本原理思考基本程序？ 1. 提取DNA 2. 设计特异引物进行目的基因PCR反应
3. 将DNA扩增产物选用合适限制性内切酶酶 切
4. 将酶切出来的具各种长度的DNA片段在琼 脂糖凝胶上电泳分离 5. 对显示出来的带谱进行分析。
优缺点
优点： ①敏感性高。
②操作简便省时。
缺点：
①影响因素较多。
位点分布发生相应变化，而使 PCR 产物增加、 减少或发生分子量改变，产生多态性图谱。
总DNA提取 随机引物合成 PCR扩增 随机引物筛选 电泳检测
图谱分析
优
点
①采用随机引物，无需预先知道被研究生物 基因组核苷酸序列；
②引物短，在整个基因组内的结合位点多， 2种甚至多种引物可混用； ③成本较低；
基本原理
根据名称： PCR-RFLP猜想本方法的原理？ 结合PCR技术与 RFLP技术的优点，其基本原 理是对目的基因片段 PCR 扩增后，利用多种
限制性内切酶，对扩增产物进行酶切，不同基
因序列，不同限制性内切酶酶切扩增产物，在 电泳后可产生不同电泳图谱，通过对电泳图谱 的分析，得出基因多态性结果。 思考：需要和探针做核酸杂交吗？为什么？
内切酶的命名规则
前三个字母代表其来源的细菌种名，用
斜体字母，第四个字母代表菌株名称，
如果同一株菌有不同限制性内切酶系统，
则不同的内切酶系用罗马数字区分。
例： EcoRI 代表该酶来源于 E. coli
的R菌株。
琼脂糖凝胶电泳槽和电泳仪
转移电泳槽
核酸分子杂交的概念及原理
核酸杂交: 两个不同来源的、含有互补核苷酸顺序 的单股核酸分子，通过碱基配对形成一 个新的、稳定的双股分子的过程。
④操作简便，快速；
⑤DNA分析效率较高；
⑥所需DNA样品少。
缺
点
①重复性不高（最大缺点）；
②只能区分不同大小的片段，而不能区分有 不同碱基序列但大小相同片段；
③需对引物进行筛选，难以进行标准化。
三、细菌基因组重复 序列PCR技术 （repetitive-element PCR, rep-PCR）