生物标志物实验ppt-PowerPointPresen
合集下载
肿瘤分子生物标志物ppt课件
6
二、甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)
正常成人血清中含量为5.8μg/L以下，男 性略高于女性。AFP由卵黄囊及胚胎肝脏 产生，在妊娠5个月时达高峰，出生时下 降。胎儿出生后1年，血清AFP应降至正 常成人水平。AFP是原发性肝癌的最灵敏、 最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大 于500μg/L以上，或含量有不断增高者， 更应高度警惕。
10
临床意义：
(1) 卵巢癌患者血清中CA125水平明显升高。手 术和化疗后期水平很快下降。当复发时，在临 床确诊前几个月便可呈现CA125增高，尤其卵 巢癌转移患者的血清CA125更明显高于正常参 考值。 (2) 其它非卵巢恶性肿瘤也有一定阳性率，如 乳腺癌40%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌 41.4%，结肠癌34.2%，其它妇科肿瘤43%。 (4) 在许多良性和恶性胸腹水中发现有CA125升 高，羊水中也能检出较高浓度的CA125。 (5) 早期妊娠的头3个月内，也有CA125升高的 可能。
用以判断预后； 半衰期短，可反映肿瘤的动态变化，监测治疗
11
（二）、 癌抗原153(Cancer antigen 153,CA153)
由分泌性上皮细胞（如乳腺、肺、胃肠 道、子宫的）分泌，正常人排泄物中也 可检出。此抗原虽然没有器官和肿瘤特 异性，在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵 巢癌和胃肠道癌中指标均有升高（大于 30U/ml），可作为监测乳腺癌患者术后 复发的最佳指标。在其它乳腺疾病和部 分孕妇（约8%）中CA153也有升高。
3
肿瘤分子标记物可分为：
1、肿瘤组织产生：胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；
激素(HCG) ；组织特异性抗原(PSA)；粘蛋白、糖蛋白、 糖脂(CA125) 、癌基因及其产物；多胺类 等 ； 2、肿瘤与宿主相互作用后产生： 血清铁蛋白；免疫复 合物；急性时相蛋白；同工酶；白细胞介素受体；肿瘤 坏死因子 等 ； 3、某些与肿瘤发生密切相关的物质：SNP、miRNA等
二、甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)
正常成人血清中含量为5.8μg/L以下，男 性略高于女性。AFP由卵黄囊及胚胎肝脏 产生，在妊娠5个月时达高峰，出生时下 降。胎儿出生后1年，血清AFP应降至正 常成人水平。AFP是原发性肝癌的最灵敏、 最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大 于500μg/L以上，或含量有不断增高者， 更应高度警惕。
10
临床意义：
(1) 卵巢癌患者血清中CA125水平明显升高。手 术和化疗后期水平很快下降。当复发时，在临 床确诊前几个月便可呈现CA125增高，尤其卵 巢癌转移患者的血清CA125更明显高于正常参 考值。 (2) 其它非卵巢恶性肿瘤也有一定阳性率，如 乳腺癌40%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌 41.4%，结肠癌34.2%，其它妇科肿瘤43%。 (4) 在许多良性和恶性胸腹水中发现有CA125升 高，羊水中也能检出较高浓度的CA125。 (5) 早期妊娠的头3个月内，也有CA125升高的 可能。
用以判断预后； 半衰期短，可反映肿瘤的动态变化，监测治疗
11
（二）、 癌抗原153(Cancer antigen 153,CA153)
由分泌性上皮细胞（如乳腺、肺、胃肠 道、子宫的）分泌，正常人排泄物中也 可检出。此抗原虽然没有器官和肿瘤特 异性，在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵 巢癌和胃肠道癌中指标均有升高（大于 30U/ml），可作为监测乳腺癌患者术后 复发的最佳指标。在其它乳腺疾病和部 分孕妇（约8%）中CA153也有升高。
3
肿瘤分子标记物可分为：
1、肿瘤组织产生：胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；
激素(HCG) ；组织特异性抗原(PSA)；粘蛋白、糖蛋白、 糖脂(CA125) 、癌基因及其产物；多胺类 等 ； 2、肿瘤与宿主相互作用后产生： 血清铁蛋白；免疫复 合物；急性时相蛋白；同工酶；白细胞介素受体；肿瘤 坏死因子 等 ； 3、某些与肿瘤发生密切相关的物质：SNP、miRNA等
bIOMARKERS生物标志物-PPT精选文档
• Materials:
• 24 pint mason jars with lids
• composed of silica sand, kaolin
clay, peat moss, CaCO3, water • Litmus paper
• Pesticide - 0.88%
• Control series (3 jars)
• 6 series run with fungicide (3 jars/series)
• first fungicide series 4 ml fungicide
:128 ml
of water
• diluted 5 times for each successive 5 series
is not supported
• pH of each soil was taken after soil was mixed and again after the fungicide was added
• Initial pH of the soils were about 6.0 6.5
• pH after addition of fungicide ranged from 4.5 (in the more highlyconcentrated soils) to 5.5 (in the less highly-concentrated soils)
• 4th dilution: 1/16 the concentration of series 1
• 5th dilution: 1/32 the concentration of series 1
• Samples of lindsey and jason’s soil • 1. sample from the copper pipe area • 2. sample from site 1 • 3. sample from around suspicious oil
(推荐)《生物指示物》PPT课件
背景介绍
1
背景介绍
生物易被环境中过量的污染物或自然物质影响， 这些影响可能表现在如下几个方面：
1）生物群落中种群结构或者优势种群的改变； 2）群落中种群多样化的改变； 3）生物群体中死亡率增加，特别是早期发育的
敏感期如卵和幼虫阶段； 4）个体生理和行为的改变； 5）个体形态学和组织学出现问题； 6）个体的组织中积累污染物或者代谢物。
间接ELISA操作步骤及原理
固相 酶标底物 （二抗）
抗原
包被抗原 洗涤
加被检标本
一抗
加入酶结合物
洗涤
加显色剂和终止剂
28
PCR技术
PCR技术即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction），是在体外合成特异性DNA片段的 方法，可以快速扩增目的基因DNA或RNA片段， 是对基因克隆，分子杂交和序列分析等分子生 物学方法的丰富和发展。
26
生物标志物的一些测定方法
• 免疫学方法 酶免疫监测（enzyme immunoassay, EIA）是 根据抗原抗体反应具有高度的特异性，以 酶作为标记物，与已知抗体结合，但不影 响其免疫学特性，然后将酶标记物的抗体 作为标准试剂来鉴定未知的抗原。
酶联免疫吸附测试（enzyme linked immunosorbent assay, ELIAS）是目前最常 用的监测方法。它是根据EIA的原理而发展 的一种固相免疫技术，其试剂盒基于竞争 27
14
幼虫变态实验
近年来对于以海洋无脊椎动物的胚胎和幼虫期 毒性实验研究较为广泛，有关研究表明，浮游 幼虫变态比现有生物个体水平的毒性实验指标 更为敏感。
海洋底栖无脊椎动物幼虫的变态期是生活史的 关键阶段，变态期幼体对污染物的敏感性要高 于其他阶段，胚胎发生和幼虫发育不受影响的 污染物浓度会阻碍其变态。
1
背景介绍
生物易被环境中过量的污染物或自然物质影响， 这些影响可能表现在如下几个方面：
1）生物群落中种群结构或者优势种群的改变； 2）群落中种群多样化的改变； 3）生物群体中死亡率增加，特别是早期发育的
敏感期如卵和幼虫阶段； 4）个体生理和行为的改变； 5）个体形态学和组织学出现问题； 6）个体的组织中积累污染物或者代谢物。
间接ELISA操作步骤及原理
固相 酶标底物 （二抗）
抗原
包被抗原 洗涤
加被检标本
一抗
加入酶结合物
洗涤
加显色剂和终止剂
28
PCR技术
PCR技术即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction），是在体外合成特异性DNA片段的 方法，可以快速扩增目的基因DNA或RNA片段， 是对基因克隆，分子杂交和序列分析等分子生 物学方法的丰富和发展。
26
生物标志物的一些测定方法
• 免疫学方法 酶免疫监测（enzyme immunoassay, EIA）是 根据抗原抗体反应具有高度的特异性，以 酶作为标记物，与已知抗体结合，但不影 响其免疫学特性，然后将酶标记物的抗体 作为标准试剂来鉴定未知的抗原。
酶联免疫吸附测试（enzyme linked immunosorbent assay, ELIAS）是目前最常 用的监测方法。它是根据EIA的原理而发展 的一种固相免疫技术，其试剂盒基于竞争 27
14
幼虫变态实验
近年来对于以海洋无脊椎动物的胚胎和幼虫期 毒性实验研究较为广泛，有关研究表明，浮游 幼虫变态比现有生物个体水平的毒性实验指标 更为敏感。
海洋底栖无脊椎动物幼虫的变态期是生活史的 关键阶段，变态期幼体对污染物的敏感性要高 于其他阶段，胚胎发生和幼虫发育不受影响的 污染物浓度会阻碍其变态。
生物课本实验大全PPT课件
第12页/共49页
实验步骤：理解整体，把握重点
1、两次加蒸馏水。（提取） 第一次，利用红细胞渗透吸水破裂，释放DNA； 第二次， 稀释NaCl溶液浓度至0.14mol/L，降低DNA溶解度，
沉淀DNA。
2、两次DNA沉淀。都是由于溶解度降低所致，第一次，由NaCl溶液浓度改变 （ 2mol/L－0.14mol/L）（提取）
中（4分） ③用移液管分别将等量的上述5种IBA溶液加入1~5号试
管，6号试管加入等量的清水（4分） ④将浸泡后的种子放入对应编号的垫有湿润滤纸的培养
皿中，置于适宜的条件下培养（4分）
第28页/共49页
调查人群中的遗传病
1、在人群中随机抽样调查计算发病率； 2、在患者家系中调查研究遗传方式； 3、最好选取群体中发病率较高的单基因遗传 病。
斐林试剂与双缩脲试剂比较
1、试剂浓度不同： 斐林试剂：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液 配制而成。 双缩脲试剂：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/ml的CuSO4溶 液组成。 2、使用顺序不同： 斐林试剂：两种溶液是现配现用。 双缩脲试剂：是先加入2mlNaOH溶液后滴加CuSO4溶液3－4滴。 3、反应温度不同： 斐林试剂：反应温度为100℃沸水浴。 双缩脲试剂：反应温度为室温。
第6页/共49页
实验步骤
研磨成分 绿色叶片 丙酮（或酒精） 二氧化硅 碳酸钙
用量 5g 5ml 少许 少许
作用 提供色素 溶解色素 为了研磨充分 中和有机酸，防止色素受到破坏
第7页/共49页
实验结果
色素在滤纸条上的顺序，从上到下依 次为： 胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b 橙黄色、 黄色、 蓝绿色、 黄绿色
重症常用生物标记物ppt课件
0.1-0.25ng/mL
>0.25-0.5ng/mL
>0.5ng/mL
强烈建议不用抗生素
建议不使用抗生素
建议可以使用抗生素
强烈建议使用抗生素
在6-24小时后追踪PCT 可以在下述情况下首次使用抗生素：
呼吸道或血液动力学的不稳定 威胁生命的合并症 需要入住ICU PCT<0.1ng/mL:
CAP且PSI为V或CURB-65>3， COPD 且GOLD为IV PCT<0.25ng/mL: CAP且PSI为V或CURB-65>2， COPD 且GOLD≥III 局部感染（脓肿、积脓症） 宿主抵抗力减弱 （例如：免疫抑制而非皮质甾类） 并发感染需要使用抗生素
重症常用生物标记物
郴州市第一人民医院重症医学科 王盛标
2019
-
1
生物标记物简介
➢ 生物标志物是一种能将其分为小分子生物标志物、大分子生物标志 物、复合生物标志物和生物种群标志物。
➢ 生物标志物可用于疾病的诊断和分类，监测疾病的发展和 严重程度，检验临床治疗效果，预测个体发病的风险，并 可用于高危人群筛查
2019
-
4
降钙素原 PCT产生
➢ 通过病原微生物分泌的毒素（细菌内毒素）直接诱导细胞 内信号传导产生
➢ 间接通过促炎因子（白介素1、6、8及肿瘤坏死因子）诱 导产生
➢ 介导宿主细胞进行免疫应答产生
2019
-
5
PCT的值与感染程度关系
201新 长9期生血儿液出透生析后2患d者内血PC浆TP生C理T值性可增达高1，.5最ng高/m达l 21ng-/ml
在急性相 6～12 h 浓度增高
24～48 h 后达高峰
生物指示物课件ppt
土壤污染监测
生物指示物可以监测土壤中的有害物质，如重金属、有机污染物 等，有助于评估土壤质量和采取修复措施。
药物研发与生产
药物筛选
生物指示物可以用于药物 筛选过程中，帮助筛选出 具有潜在疗效的药物候选 物。
药物代谢研究
生物指示物可以用于研究 药物的代谢过程和机制， 有助于药物设计和优化。
药物生产质量控制
加强国际合作与交流
加强国际间的合作与交流，共同制定生物指示物的国际标准，推动 标准化和规范化进程。
提高生物指示物的灵敏度和特异性
01
优化生物指示物设计
通过改进生物指示物的设计和制备方法，提高其灵敏度和特异性。
02
采用多指标检测
采用多个生物指示物联合检测的方法，可以更准确地反映目标物的存在
和浓度。
03
生物指示物课件
目 录
• 生物指示物概述 • 常见生物指示物介绍 • 生物指示物的检测方法 • 生物指示物的应用案例 • 生物指示物的未来发展
01
生物指示物概述
定义与分类
定义
生物指示物是指那些能够指示环境变化或污染状况的生物种 类或种群，它们对环境中的物理、化学或生物因子变化敏感 ，可以作为环境监测和评估的指标。
分类
根据其指示的性质，生物指示物可以分为两类，即直接指示 物和间接指示物。直接指示物是指那些直接暴露于污染物或 环境变化中的生物，而间接指示物则是通过其生理、行为或 繁殖等反应来指示环境变化的生物。
生物指示物的应用领域
生态风险评估
生态恢复
生物指示物可用于评估污染物对生态 系统的影响和风险，通过监测生物种 群的变化，可以了解污染物的生态毒 性。
免疫荧光技术
利用荧光标记的抗体与微生物的特异性结合，通过荧光信号的强度和分布来判断微生物的数量和种类 。
生物指示物可以监测土壤中的有害物质，如重金属、有机污染物 等，有助于评估土壤质量和采取修复措施。
药物研发与生产
药物筛选
生物指示物可以用于药物 筛选过程中，帮助筛选出 具有潜在疗效的药物候选 物。
药物代谢研究
生物指示物可以用于研究 药物的代谢过程和机制， 有助于药物设计和优化。
药物生产质量控制
加强国际合作与交流
加强国际间的合作与交流，共同制定生物指示物的国际标准，推动 标准化和规范化进程。
提高生物指示物的灵敏度和特异性
01
优化生物指示物设计
通过改进生物指示物的设计和制备方法，提高其灵敏度和特异性。
02
采用多指标检测
采用多个生物指示物联合检测的方法，可以更准确地反映目标物的存在
和浓度。
03
生物指示物课件
目 录
• 生物指示物概述 • 常见生物指示物介绍 • 生物指示物的检测方法 • 生物指示物的应用案例 • 生物指示物的未来发展
01
生物指示物概述
定义与分类
定义
生物指示物是指那些能够指示环境变化或污染状况的生物种 类或种群，它们对环境中的物理、化学或生物因子变化敏感 ，可以作为环境监测和评估的指标。
分类
根据其指示的性质，生物指示物可以分为两类，即直接指示 物和间接指示物。直接指示物是指那些直接暴露于污染物或 环境变化中的生物，而间接指示物则是通过其生理、行为或 繁殖等反应来指示环境变化的生物。
生物指示物的应用领域
生态风险评估
生态恢复
生物指示物可用于评估污染物对生态 系统的影响和风险，通过监测生物种 群的变化，可以了解污染物的生态毒 性。
免疫荧光技术
利用荧光标记的抗体与微生物的特异性结合，通过荧光信号的强度和分布来判断微生物的数量和种类 。
生物实验ppt课件
细胞培养的步骤
细胞培养的过程包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存等步骤。这些步骤 都需要严格的无菌操作，以保证细胞的存活和实验结果的可靠性。
03
细胞培养的应用
细胞培养技术在生物医学研究中具有广泛的应用，如药物筛选、毒理学
研究、基因治疗等。通过细胞培养技术，可以深入了解细胞的生理和病
理过程，为疾病诊断和治疗提供有力支持。
生物信息学的价值
生物信息学技术在生命科学领域中具 有广泛的应用价值。例如，在医学领 域中，生物信息学技术可用于疾病预 测、个性化治疗和药物研发等方面； 在农业领域中，生物信息学技术可用 于作物抗逆性分析和新品种选育等。 同时，生物信息学技术的发展也促进 了跨学科的合作与交流，推动了生命 科学研究的进步和发展。
生物实验的类型与分类
类型
根据实验目的和手段的不同，生物实 验可以分为观察性实验、验证性实验 、探究性实验和模拟实验等。
分类
按照研究领域和对象的不同，生物实 验可以分为动物学实验、植物学实验 、微生物学实验、遗传学实验等。
生物实验的基本原则与注意事项
基本原则
科学性原则、对照性原则、随机性原则、可重复性原则等。
准备细胞和培养瓶
确保细胞处于适宜的生长状态，准备 好清洁、消毒的培养瓶。
消化细胞
加入胰蛋白酶等消化酶，使细胞从瓶 壁上分离下来。
分散细胞
轻轻吹打、搅拌使细胞充分分散。
接种细胞
将分散的细胞接种到新的培养瓶中。
培养细胞
将培养瓶放入恒温培养箱中，保持适 宜的温度和湿度，进行细胞培养。
THANKS
感谢观看
生物信息学技术
生物信息学技术
生物信息学技术是以计算机科学和统 计学为基础，通过对生物数据进行分 析和挖掘，揭示生命现象内在规律的 科学方法。常见的生物信息学技术包 括基因组学、转录组学和蛋白质组学 等。
细胞培养的过程包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存等步骤。这些步骤 都需要严格的无菌操作，以保证细胞的存活和实验结果的可靠性。
03
细胞培养的应用
细胞培养技术在生物医学研究中具有广泛的应用，如药物筛选、毒理学
研究、基因治疗等。通过细胞培养技术，可以深入了解细胞的生理和病
理过程，为疾病诊断和治疗提供有力支持。
生物信息学的价值
生物信息学技术在生命科学领域中具 有广泛的应用价值。例如，在医学领 域中，生物信息学技术可用于疾病预 测、个性化治疗和药物研发等方面； 在农业领域中，生物信息学技术可用 于作物抗逆性分析和新品种选育等。 同时，生物信息学技术的发展也促进 了跨学科的合作与交流，推动了生命 科学研究的进步和发展。
生物实验的类型与分类
类型
根据实验目的和手段的不同，生物实 验可以分为观察性实验、验证性实验 、探究性实验和模拟实验等。
分类
按照研究领域和对象的不同，生物实 验可以分为动物学实验、植物学实验 、微生物学实验、遗传学实验等。
生物实验的基本原则与注意事项
基本原则
科学性原则、对照性原则、随机性原则、可重复性原则等。
准备细胞和培养瓶
确保细胞处于适宜的生长状态，准备 好清洁、消毒的培养瓶。
消化细胞
加入胰蛋白酶等消化酶，使细胞从瓶 壁上分离下来。
分散细胞
轻轻吹打、搅拌使细胞充分分散。
接种细胞
将分散的细胞接种到新的培养瓶中。
培养细胞
将培养瓶放入恒温培养箱中，保持适 宜的温度和湿度，进行细胞培养。
THANKS
感谢观看
生物信息学技术
生物信息学技术
生物信息学技术是以计算机科学和统 计学为基础，通过对生物数据进行分 析和挖掘，揭示生命现象内在规律的 科学方法。常见的生物信息学技术包 括基因组学、转录组学和蛋白质组学 等。
生物实验专题ppt-生物实验专题文档
样”
离与复原
部分性探究 参与“干什么”和“发现 叶绿体中色素的提
什么”探究过程
取和分离
全程性探究 “怎样”检验自己对“有什 探究温度对酶活性
么”和“为什么”
的影响
模拟性实验 在人为条件下模拟研究对 DNA复制的模拟实
象动态变化
验
研究性实验题目的一般解题思路
• 分析信息、类化课题、确定目标；
把握关键、规范格式、推敲思考
书写实验设计方案通常包括
• 1. 实验题目：实验研究的课题名称 • 包括：研究对象、研究其现象、作用于对
象的因素。
• 如：生长素对玉米幼苗生长的影响
.实验目的
• 实验的最终目的、明确探究什么问题，
探索哪些生物学规律
实验原理
• 即实验依据，实验依据的科学原理是
什么？涉及到生物学及相关学科中的 哪些原理？如：渗透作用、扩散作用 等。
• 观察原理:活细胞中的细胞质处于不断流动
的状态，可用叶绿体的运动作为标志。
• 观察步骤 :制作临时装片（培养黑藻—
—制作装片）——用显微镜观察（低倍镜 下观察——高倍镜下观察）
观察植物细胞的有丝分裂
• ①原理: 具有分生能力的植物细胞进行有丝
分裂，根据染色体的变化，可辨认间期、 前期、中期、后期、末期。
和Fe3催化过氧化氢分解成水和氧，可以比较 两者的催化效率
比较酶的专一性和温度对酶活性的 影响
• ①原理: 淀粉遇碘后，形成蓝色的复合物。
淀粉酶可以使淀粉逐步水解为麦芽糖和葡 萄糖，遇碘不变蓝。麦芽糖和葡萄糖能够 与斐林试剂反应生成砖红色的氧化亚铜沉 淀。
• ②怎样研究: 温度对酶活性的影响；pH 值
题
• 制定实验方案时要遵循单因子变量原则——变量
生物指示物PPT
• DNA-加合物测定:免疫法、荧光法、32P-后标记法
• 蛋白加合物:血红蛋白（Hb）-加合物（色谱-质谱法、免疫法）
• 生物群落监测法
• 付生植物群落监测法:地衣生长绘图法 • 微生物监测法:大气污染微生物监测法、水污染的细菌学监测、
微型生物群落监测法（如PFU法） • 底栖大型无脊椎动物监测法 • 微宇宙法:标准化水生微宇宙（SAM）、土壤核心微宇宙（SCM）
• 监测指标的选择应遵循的原则
根据监测目的 根据污染物的性质和毒理作用机制 根据生物的特性
10
1 生物监测
• 生物监测的方法
生态学方法生理学方法 毒理学和遗传毒理学方法 生物化学成分分析方法
11
1 生物监测
• 生物预警和监测环境变化的机理
• 人为胁迫下生物系统会对受损环境发生一些在自然条件下 没有或罕见的生物反应，这种反应可以发生在生物系统的 基因、细胞、组织、器官、个体、种群、群落及生态系统 的各个层次。反应强度与环境受损程度存在着相关性，是 利用生物对环境变化进行监测、预警的基础。
7
1 生物监测
• 生物监测：利用生物分子、细胞、组织、 器官、个体、种群和群落以及生态系统等 层次上的变化对人为胁迫的生物学响应反 应来阐明环境状况。即用生物作指标对环 境质量变化进行指示，从生物学的角度对 环境质量变化进行监测，为环境质量评价 提供依据。
8
1 生物监测
·利用生物对环境进行监测和预警历史悠久
上述效应的研究促使生物调查/监视（Biological Surveillance） 方法用于替代（或至少是补充）化学分析方法监测环境质量。在一段 时间内同一环境中生物调查包括一系列相似的调查内容，因此是动态 的。若生物调查具有特殊目的，如按规范规定的污染物，则称为生物 监测（Biological monitoring/ Biomonitoring）。
• 蛋白加合物:血红蛋白（Hb）-加合物（色谱-质谱法、免疫法）
• 生物群落监测法
• 付生植物群落监测法:地衣生长绘图法 • 微生物监测法:大气污染微生物监测法、水污染的细菌学监测、
微型生物群落监测法（如PFU法） • 底栖大型无脊椎动物监测法 • 微宇宙法:标准化水生微宇宙（SAM）、土壤核心微宇宙（SCM）
• 监测指标的选择应遵循的原则
根据监测目的 根据污染物的性质和毒理作用机制 根据生物的特性
10
1 生物监测
• 生物监测的方法
生态学方法生理学方法 毒理学和遗传毒理学方法 生物化学成分分析方法
11
1 生物监测
• 生物预警和监测环境变化的机理
• 人为胁迫下生物系统会对受损环境发生一些在自然条件下 没有或罕见的生物反应，这种反应可以发生在生物系统的 基因、细胞、组织、器官、个体、种群、群落及生态系统 的各个层次。反应强度与环境受损程度存在着相关性，是 利用生物对环境变化进行监测、预警的基础。
7
1 生物监测
• 生物监测：利用生物分子、细胞、组织、 器官、个体、种群和群落以及生态系统等 层次上的变化对人为胁迫的生物学响应反 应来阐明环境状况。即用生物作指标对环 境质量变化进行指示，从生物学的角度对 环境质量变化进行监测，为环境质量评价 提供依据。
8
1 生物监测
·利用生物对环境进行监测和预警历史悠久
上述效应的研究促使生物调查/监视（Biological Surveillance） 方法用于替代（或至少是补充）化学分析方法监测环境质量。在一段 时间内同一环境中生物调查包括一系列相似的调查内容，因此是动态 的。若生物调查具有特殊目的，如按规范规定的污染物，则称为生物 监测（Biological monitoring/ Biomonitoring）。
细胞生物学实验课件pptPowerPointPres(1)
二、实验原理
n 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
三、实验用品
1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经 脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。
再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前 缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片 端展开成线状。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
两玻片的角度以30~45°为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。
30~45°
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
实验作业
将观察到的现象列入下表，对实验结 果进行比较和分析。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
实验作业
试管编号
1.10ml氯化钠+1ml稀释羊血 2.10ml氯化铵+1ml稀释羊血 3.10ml醋酸铵+1ml稀释羊血
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
实验三 细胞膜的渗透性
一、实验目的：
了解细胞膜的渗透性及各类物质进 入细胞的速度。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
二、 实验原理
细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
采血
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验四 生物标志物实验
——水生动物谷胱甘肽转移酶活性测定
指导老师：刘汝涛
山东大学环境科学与工程学院
1
目的与要求
2
实验原理
3
设备与材料
4
步骤与方法
5
结果与报告
Company Logo
1
（1）了解有机污染物对代谢关键酶谷胱甘肽转移酶活 性影响。
（2）掌握谷胱甘肽转移酶酶活性的体外测定方法。
Company Logo
Company Logo
4
从上述的反应体系中取出200uL和Bio-Rad反应过 的蛋白液（钩虾组织破碎液上清，牛血清蛋白），每组 设三个平行，加入96孔板内。25℃下，摇动96孔板20s 后，用酶标仪测定620nm下的吸光度。根据牛血清蛋白 标准液的读数汇出标准曲线，计算出曲线的斜率K。
蛋白浓度 OD620 K
在一个干净的1.5mL的离心管内加入500uL酶活为 1.4单位/mL的谷胱甘肽转移酶标准样品，加入500uL的 冷的空白缓冲液BB（pH=6.5）后充分混匀。
Company Logo
4
在96孔板中加入50uL的GST标准样品，钩虾组织液上清
或者空白缓冲液（BB），每组设四个平行。然后加入150uL
Company Logo
4
2．酶活力的测定 将1.5 mL离心管从超低温冰箱中取出，加入100uL
的冷的组织破碎缓冲液（pH=6.5）。捣碎研磨管内的钩 虾20～30min，加入9uL冷的冲洗缓冲液DB（pH=6.5）。 4℃下14000g离心3min，取100uL的上清。将此上清移 另一置于生物冰袋上的离心管中。往新的离心管内加入 900uL空白缓冲液BB（pH=6.5）后充分混匀，待用。
磷酸缓冲液； （iii）空白缓冲液（BB）：含有0.1％Triton X-100
（v/v）和1.0％PMSF（v/v）的磷酸缓冲液。 ②100mmol/L PMSF溶液 用95％乙醇溶解适量的
PMSF，于阴暗处保存，-20℃可保存一个月，-4℃可保存 5d。
Company Logo
3
③40mmol/L CDNB溶液 用95％乙醇溶解适量的 CDNB，保存方法与PMSF相同。
2
谷胱甘肽转移酶（GSTs；也叫谷胱甘肽转硫酶）是细 胞质内催化相Ⅱ反应起解毒作用的重要酶，具有许多同工 酶。污染物进入体内经过相Ⅰ反应后，在谷胱甘肽转移酶 的催化下，细胞内还原性谷胱甘肽能结合相Ⅰ反应产生的 亲电性中间体，从而生成亲水性的化合物。细胞膜上有多 种的跨膜运输机制（如通过ATP推动GS-X泵）能使这类 亲水性的化合物排出细胞，使之进入血液循环并最终以尿 液等形式排出体外，从而起到解毒作用。在很多物种中， 谷胱甘肽结合作用是相Ⅱ反应的主要形式。
❖
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。2020年10月19日 星期一9时47分 13秒M onday, October 19, 2020
❖
相信相信得力量。20.10.192020年10月 19日星 期一9时47分13秒20.10.19
谢谢大家！
式中：OD620为待测样品620nm下的吸光度；K为 牛血清蛋白标准样曲线的斜率。
Company Logo
5
1.急性毒性试验结果记录
曝气水 溶剂组 林丹 林丹 林丹 林丹 林丹 空白 对照 1ug/L 3ug/L 6ug/L 12ug/L 24ug/L
溶解氧 （mg/L） 各实验 组参数 pH
电导率 （ms）
钩虾死 亡个体 数(只)
0（h） 24（h） 48（h）
Company Logo
5
2．酶活力与蛋白活力的测定试验结果记录
曝气水 空白
酶活测定OD340(min) 蛋白测定OD620
酶活(mol·L·g-1·min-1)
溶剂组 对照
林丹 1 ug/L
林丹 3 ug/L
林丹 6 ug/L
林丹 12ug/L
Company Logo
3
（2）酶和缓冲液 ①配置pH=6.5，0.02M磷酸缓冲液（PB） 利用此磷
酸缓冲液配制下面三种实验缓冲液： （i）组织破碎缓冲液（HB）：含有1.0％Triton X-
100（v/v）和1.0％PMSF（v/v）的磷酸缓冲液； （ii）冲洗缓冲液（DB）：含有1.0％PMSF（v/v）的
基于上述原因，用GSTs作为生物标志物来指示特定 的污染暴露，近年来在生态毒理学的研究中获得了广泛 的运用。在本实验中，将采用体内实验的方法，测定水 生动物暴露于有机氯农药林丹（Lindane）之后，其体 内GSTs酶活性的变化。
Company Logo
3
1．器材 冷冻离心机（Beckman Coulter 22R centrifuge），
④20mmol/L GSH标准液的配制 配制100mmol/L EDTA母液，用0.1mol/L KH2PO4稀释母液至EDTA的浓 度为1mmol/L。在1mmol/L的EDTA溶液中加人适量GSH 使其终浓度为20mmol/L。用1mol/L HCl或1mol/L KOH 校正pH。于阴暗处保存，-20℃可保存一个月，-4℃可保 存5d。
Company Logo
4
3．总蛋白的测定 以牛血清蛋白为校正标准，用Bio-Rad公司的试剂盒
检测定钩虾组织破碎液中的蛋白质浓度。将牛血清蛋白溶 于磷酸缓冲液（pH=6.5）中，配制成200mg/L的蛋白标准 液。取 0mL、0.25mL、0.75mL、1.00mL和1.35mL该蛋 白标准液，先加入8mL磷酸缓冲液（pH=6.5），再加入空 白缓冲液BB（pH=6.5），配制成浓度依次为0mL、 5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL和25.0mL的蛋白标 准液系列。从每个浓度的蛋白标准液中取出800uL至干净 的EP管中，加入200uL Bio-Rad产品。稀释缓冲液取 80uL的虾组织液上清至一个干净的EP管中，加入80uL的 0.1％的Triton X-100，用640uL磷酸缓冲液（pH=6.5）稀 释混合液至800uL，加人200uL Bio-Rad产品。
Company Logo
3
3．试剂 1-氯-2，4-二硝基苯（CDNP），还原性谷胱甘肽
（F），Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）， EDTA。 4．溶液的配制 （1）林丹储存液
取50mg林丹固体颗粒，溶于500mL的丙酮中配制成 100mg/L的林丹储存液，于4℃下阴暗处密封保存备用。
林丹 24 ug/L
Company Logo
Company Logo
❖
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20.10.1920.10.19Monday, October 19, 2020
❖
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。21:47:1321:47: 1321:4710/19/2020 9:47:13 PM
⑤酶活测定液 实验之前配制，将CDNB和GSH溶液 从冰箱中取出，置于室温。取5份的20mmol/L GSH标准 液、9份的磷酸缓冲液（pH=6.5，0.02mol/L）和1份的40 mmol/L CDNB溶液，充分混合，配制成酶活测定液。
Company Logo
4
1．暴露试验 按照急性毒性试验方法，将雄性的成年钩虾分别暴
酶活测定液，使每个孔内含有200uL的反应液。将96孔板放入
酶表仪30℃轻微震荡反应30min，然后充分震荡96孔板以混合
各反应液。340nm下每隔1min记录一个吸光值，计算吸光值
随时间的变化的斜率。
GST酶活
OD R 1000
RWP
式中：OD为吸光值随时间变化的斜率（OD340/min）； ε为摩尔吸光系数（9600mol-1cm-1）；R为反应系统体积 （uL）；S为样品上清的体积（uL）；W为样品蛋白浓度 （g/L）； P为样品厚度（0.6cm）。
露于梯度林丹浓度中。暴露温度设定在15℃±1℃，光暗 比为12h︰12h。实验开始时测定各浓度梯度林丹曝气 水的溶解氧，pH和电导率。
暴露48h后，将存活的个体从容器中打捞出来，先 用吸水纸将表面的水分吸干之后，然后放入1.5mL的聚 乙烯离心管中（每管一只）。将这些离心管的放入液氮 罐20s以猝死钩虾。取出的离心管在-70℃保存。
❖
作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2020年10月19日星期 一9时47分13秒 21:47: 1319 October 2020
❖
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。下 午9时47分13秒 下午9时47分21:47:1320.10.19
❖
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.10.1920.10.1921: 4721:47:1321: 47:13Oct-20
酶标仪（Bio-Tek Instruments，INC）pH计，溶解氧测 定仪，电导率测定仪，96孔板，1.5mL离心管，水浴锅， 生物冰袋，移液枪（20uL、100uL、1000uL）及对应枪 头。 2．受试生物
成年雄性的钩虾（Gammarus pulex）。从野外采 集投放在 10L的有机玻璃缸中，人工曝气，在 15℃ （±1℃），12h光照的条件下至少驯养一周，才能进行 染毒暴露。驯养期间，用接种了真菌（Cladospurium sp.）发酵1周的桤木叶（Alnus glutinosa L.）喂食。
❖
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20.10.1921:47:1321:47Oct-2019-Oct-20
❖
加强交通建设管理，确保工程建设质 量。21: 47:1321:47:1321:47Monday, October 19, 2020
❖
安全在于心细，事故出在麻痹。20.10.1920.10.1921: 47:1321:47:13Octob er 19, 2020
——水生动物谷胱甘肽转移酶活性测定
指导老师：刘汝涛
山东大学环境科学与工程学院
1
目的与要求
2
实验原理
3
设备与材料
4
步骤与方法
5
结果与报告
Company Logo
1
（1）了解有机污染物对代谢关键酶谷胱甘肽转移酶活 性影响。
（2）掌握谷胱甘肽转移酶酶活性的体外测定方法。
Company Logo
Company Logo
4
从上述的反应体系中取出200uL和Bio-Rad反应过 的蛋白液（钩虾组织破碎液上清，牛血清蛋白），每组 设三个平行，加入96孔板内。25℃下，摇动96孔板20s 后，用酶标仪测定620nm下的吸光度。根据牛血清蛋白 标准液的读数汇出标准曲线，计算出曲线的斜率K。
蛋白浓度 OD620 K
在一个干净的1.5mL的离心管内加入500uL酶活为 1.4单位/mL的谷胱甘肽转移酶标准样品，加入500uL的 冷的空白缓冲液BB（pH=6.5）后充分混匀。
Company Logo
4
在96孔板中加入50uL的GST标准样品，钩虾组织液上清
或者空白缓冲液（BB），每组设四个平行。然后加入150uL
Company Logo
4
2．酶活力的测定 将1.5 mL离心管从超低温冰箱中取出，加入100uL
的冷的组织破碎缓冲液（pH=6.5）。捣碎研磨管内的钩 虾20～30min，加入9uL冷的冲洗缓冲液DB（pH=6.5）。 4℃下14000g离心3min，取100uL的上清。将此上清移 另一置于生物冰袋上的离心管中。往新的离心管内加入 900uL空白缓冲液BB（pH=6.5）后充分混匀，待用。
磷酸缓冲液； （iii）空白缓冲液（BB）：含有0.1％Triton X-100
（v/v）和1.0％PMSF（v/v）的磷酸缓冲液。 ②100mmol/L PMSF溶液 用95％乙醇溶解适量的
PMSF，于阴暗处保存，-20℃可保存一个月，-4℃可保存 5d。
Company Logo
3
③40mmol/L CDNB溶液 用95％乙醇溶解适量的 CDNB，保存方法与PMSF相同。
2
谷胱甘肽转移酶（GSTs；也叫谷胱甘肽转硫酶）是细 胞质内催化相Ⅱ反应起解毒作用的重要酶，具有许多同工 酶。污染物进入体内经过相Ⅰ反应后，在谷胱甘肽转移酶 的催化下，细胞内还原性谷胱甘肽能结合相Ⅰ反应产生的 亲电性中间体，从而生成亲水性的化合物。细胞膜上有多 种的跨膜运输机制（如通过ATP推动GS-X泵）能使这类 亲水性的化合物排出细胞，使之进入血液循环并最终以尿 液等形式排出体外，从而起到解毒作用。在很多物种中， 谷胱甘肽结合作用是相Ⅱ反应的主要形式。
❖
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。2020年10月19日 星期一9时47分 13秒M onday, October 19, 2020
❖
相信相信得力量。20.10.192020年10月 19日星 期一9时47分13秒20.10.19
谢谢大家！
式中：OD620为待测样品620nm下的吸光度；K为 牛血清蛋白标准样曲线的斜率。
Company Logo
5
1.急性毒性试验结果记录
曝气水 溶剂组 林丹 林丹 林丹 林丹 林丹 空白 对照 1ug/L 3ug/L 6ug/L 12ug/L 24ug/L
溶解氧 （mg/L） 各实验 组参数 pH
电导率 （ms）
钩虾死 亡个体 数(只)
0（h） 24（h） 48（h）
Company Logo
5
2．酶活力与蛋白活力的测定试验结果记录
曝气水 空白
酶活测定OD340(min) 蛋白测定OD620
酶活(mol·L·g-1·min-1)
溶剂组 对照
林丹 1 ug/L
林丹 3 ug/L
林丹 6 ug/L
林丹 12ug/L
Company Logo
3
（2）酶和缓冲液 ①配置pH=6.5，0.02M磷酸缓冲液（PB） 利用此磷
酸缓冲液配制下面三种实验缓冲液： （i）组织破碎缓冲液（HB）：含有1.0％Triton X-
100（v/v）和1.0％PMSF（v/v）的磷酸缓冲液； （ii）冲洗缓冲液（DB）：含有1.0％PMSF（v/v）的
基于上述原因，用GSTs作为生物标志物来指示特定 的污染暴露，近年来在生态毒理学的研究中获得了广泛 的运用。在本实验中，将采用体内实验的方法，测定水 生动物暴露于有机氯农药林丹（Lindane）之后，其体 内GSTs酶活性的变化。
Company Logo
3
1．器材 冷冻离心机（Beckman Coulter 22R centrifuge），
④20mmol/L GSH标准液的配制 配制100mmol/L EDTA母液，用0.1mol/L KH2PO4稀释母液至EDTA的浓 度为1mmol/L。在1mmol/L的EDTA溶液中加人适量GSH 使其终浓度为20mmol/L。用1mol/L HCl或1mol/L KOH 校正pH。于阴暗处保存，-20℃可保存一个月，-4℃可保 存5d。
Company Logo
4
3．总蛋白的测定 以牛血清蛋白为校正标准，用Bio-Rad公司的试剂盒
检测定钩虾组织破碎液中的蛋白质浓度。将牛血清蛋白溶 于磷酸缓冲液（pH=6.5）中，配制成200mg/L的蛋白标准 液。取 0mL、0.25mL、0.75mL、1.00mL和1.35mL该蛋 白标准液，先加入8mL磷酸缓冲液（pH=6.5），再加入空 白缓冲液BB（pH=6.5），配制成浓度依次为0mL、 5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL和25.0mL的蛋白标 准液系列。从每个浓度的蛋白标准液中取出800uL至干净 的EP管中，加入200uL Bio-Rad产品。稀释缓冲液取 80uL的虾组织液上清至一个干净的EP管中，加入80uL的 0.1％的Triton X-100，用640uL磷酸缓冲液（pH=6.5）稀 释混合液至800uL，加人200uL Bio-Rad产品。
Company Logo
3
3．试剂 1-氯-2，4-二硝基苯（CDNP），还原性谷胱甘肽
（F），Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）， EDTA。 4．溶液的配制 （1）林丹储存液
取50mg林丹固体颗粒，溶于500mL的丙酮中配制成 100mg/L的林丹储存液，于4℃下阴暗处密封保存备用。
林丹 24 ug/L
Company Logo
Company Logo
❖
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20.10.1920.10.19Monday, October 19, 2020
❖
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。21:47:1321:47: 1321:4710/19/2020 9:47:13 PM
⑤酶活测定液 实验之前配制，将CDNB和GSH溶液 从冰箱中取出，置于室温。取5份的20mmol/L GSH标准 液、9份的磷酸缓冲液（pH=6.5，0.02mol/L）和1份的40 mmol/L CDNB溶液，充分混合，配制成酶活测定液。
Company Logo
4
1．暴露试验 按照急性毒性试验方法，将雄性的成年钩虾分别暴
酶活测定液，使每个孔内含有200uL的反应液。将96孔板放入
酶表仪30℃轻微震荡反应30min，然后充分震荡96孔板以混合
各反应液。340nm下每隔1min记录一个吸光值，计算吸光值
随时间的变化的斜率。
GST酶活
OD R 1000
RWP
式中：OD为吸光值随时间变化的斜率（OD340/min）； ε为摩尔吸光系数（9600mol-1cm-1）；R为反应系统体积 （uL）；S为样品上清的体积（uL）；W为样品蛋白浓度 （g/L）； P为样品厚度（0.6cm）。
露于梯度林丹浓度中。暴露温度设定在15℃±1℃，光暗 比为12h︰12h。实验开始时测定各浓度梯度林丹曝气 水的溶解氧，pH和电导率。
暴露48h后，将存活的个体从容器中打捞出来，先 用吸水纸将表面的水分吸干之后，然后放入1.5mL的聚 乙烯离心管中（每管一只）。将这些离心管的放入液氮 罐20s以猝死钩虾。取出的离心管在-70℃保存。
❖
作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2020年10月19日星期 一9时47分13秒 21:47: 1319 October 2020
❖
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。下 午9时47分13秒 下午9时47分21:47:1320.10.19
❖
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.10.1920.10.1921: 4721:47:1321: 47:13Oct-20
酶标仪（Bio-Tek Instruments，INC）pH计，溶解氧测 定仪，电导率测定仪，96孔板，1.5mL离心管，水浴锅， 生物冰袋，移液枪（20uL、100uL、1000uL）及对应枪 头。 2．受试生物
成年雄性的钩虾（Gammarus pulex）。从野外采 集投放在 10L的有机玻璃缸中，人工曝气，在 15℃ （±1℃），12h光照的条件下至少驯养一周，才能进行 染毒暴露。驯养期间，用接种了真菌（Cladospurium sp.）发酵1周的桤木叶（Alnus glutinosa L.）喂食。
❖
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20.10.1921:47:1321:47Oct-2019-Oct-20
❖
加强交通建设管理，确保工程建设质 量。21: 47:1321:47:1321:47Monday, October 19, 2020
❖
安全在于心细，事故出在麻痹。20.10.1920.10.1921: 47:1321:47:13Octob er 19, 2020