流式细胞术检测细胞存活率的方法学建立
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
摘
择。方法
要： 的 目
探 讨 流 式 细胞 术 测 定 细 胞 存 活 率 的 可 行 性 及 准 确 性 ， 药 物 筛 选 、 为 细胞 增 殖 测 定 、 物 毒 性检 测 等 提 供 新 的 选 药
使 用 流 式 细 胞 术 ， 胞 浓 度 细
使 用流 式 细 胞 术 、 Ｃ Ｃ Ｋ ８比 色 法 以及 台盼 蓝 染 色排 除 法 测 定 Ｊ ｒ ａ ｕ ｋ ｔ细胞 存 活 率 。结 果
Ｚｈ ｎ ａ ｇ Ｒｅ ｎ ｍｅ ， ｉ ａ ｍｅ Ｚｈ ｎ ｈ ａ ， ｏ ａ ｇ Ｌｉ ｕ ａ ｇＱｉ ｎ ， ｎＲｏ ｇ ｉ Ｌ ｎ ｉ Ｑｉ ， ａ ｇ Ｓ ｕ ｉ Ｚ ｕＱｉｎ ， ａ Ｈ
（ ． ｓ ａｒ ｈ Ｃｅ ｅ Ｃｈ ｎ １ Ｒｅ ｅ ｃ ｎｔｒ， ｅ ｇｄｕ Ｍ ｅ ｃ ｌｅ ｄｉａｌＣｏ ｌ ｇｅ， Ｃｈｅ ｇｄｕ ６ ００ ｎ １ ８３， Ｃｈｉ ａ； ｎ
Ｄｅ ｅ ｏ ｖ ｌ ｐｍｅ ｆ ａ ｓ ａ ｏｒ ｔ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｈｅ ｓ ｒ ｖ ｌ ｒ ｔ ｓ ｏ ｅ ｌ ｙ ｆ ｏ ｃ ｔ ｍ ｅ ｒ ｎｔ ｏ ｎ ａ ｓ ｙ ｆ ｈｅ ｄｅ ｅ ｔｏ ｆ ｔ ｕ ｖｉ ａ ａ ｅ ｆ ｃ ｌｓ ｂ ｌ ｗ ｙ ｏ ｔ ｙ
２ Ｄｅ ａｒｍｅ ｔ ｆ Ｏｎ ｏｏ ｙ， ｅ ｇ ｕＭ ｉｉａ ｙ Ｇｅ ｅａ ｏｐｉ ｌ Ｃｈ ｎ ｄ １ ０ ３， ｉａ ． ｐ ｔ ｎ ｃ ｌｇ Ｃｈ ｎ ｄ ｌｔ ｒ ｎ ｒ ｌＨ ｓ ｔ ， ｅ ｇ ｕ ６ ０ ８ Ｃｈ ｎ ） ｏ ａ Ａｂ ｔａ ｔＯｂｅｔｖ Ｔｏ ｉｖ ｓｉａｅｔ ｅｆａ ｉｉｔ ｎ ｃ ｕ ａ ｙｏ ｌｗ ｙ ｏ ｔｙ Ｆ ｓｒｃ ： ｊｃｉｅ ｎ ｅ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓｂｌ ｙａ ｄａ ｃ ｒ ｃ ｆｆｏ ｃ ｔｍｅｒ （ ＣＭ ）ｆ ｒｔ ｅｄ ｔｃｉｎ ｏ ｈ ｕ ｖｖ １ ａｅ ｇ ｉ ｏ ｈ ｅｅ ｔ ｆｔ ｅｓ ｒ ｉａ ｒ ｔｓ ｏ
速 稳 定 ， 与 活 细胞 数 量 成 正 比 ， 用 于测 定 细 胞 存 活率 。 且 可
关键 词 ： 式 细胞 术 ； 辛 卡 利 特 ； 台盼 蓝 染 色排 除 法 ； 细 胞 流 速 流 Ｄ ： ０ ３ ６ ／． ｓ ． ６ ３ ４ ３ ． ０ １ ． ０ ＯＩ １ ， ９ ９ ｉｉ ｎ １ ７ １ ０ ２ ｎ． ５ ０ ３ ｓ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ： ６ ３４ ３ （ ０ １ １ — ６ ３０ １ ７ — １ ０ ２ １ ） ５１ ６ ２
国际检验 医学杂 志 ２１ 年 ９ 第 ３ 卷 第 １ 期 ０１ 月 ２ ５
Ｉｔ ａ ｄＳｐｅ ｅ ０１Ｖ １ ２Ｎ ．５ ｎ Ｌ ｂＭｅ ，ｅｔｍｂｒ２１ ，ｏ胞 术 检 测 细 胞 存 活 率 的 方 法 学 建 立
刘 阳 ， 赖 翼 李敏 惠 杨 淑 霞 郑 静 阳 泰 李 丽梅 邓 勇 ， ， ， ， ， ， ， 张 强 ， 荣梅 李钱 梅 张 帅 邹 强 李 华 任 ， ， ， ， （． １ 成都 医学院科研 中心 ６ ０ ８ ；． １ ０ ３ ２ 中国人 民解放 军成 都 军 区总 医院肿 瘤科 ， 成都 ６ ０ ８ ） １ ０ ３
ｏ ｅ ｌ ｏ ｐ ｏｖ ｄ ｎｏ ｈｅ ｈｏｃ ｒ ｇ ｓ ｒ ｅ ｃ ｌ ｏｌｆ ｒ ｔｏｎ ａ ｓ ｙ ａ ｕ ｔ ｉｉｙ ａ ｓ ｙ ｆｃ ｌｓ ｔ ｒ ｉ ｅ ａ ｔ ｒｃ ｉｅ ｏｆｄ ｕ ｃ ｅ ｎ， ｅ ｌｐｒ ｉｅ ａ ｉ ｓ ａ ｎｄ ｄｒ ｇ ｏｘ ｃｔ ｓ ａ ．Ｍ ｅ ｈｏ ｓ Ｆｌ ｔ ｄ ｏｗ ｙｔ ｍ ｅ ｒ ＣＣＫ一 ｃ ｏ ｔ ｙ， ８
Ｌｉ ａ ｇ Ｌ ｉＹ ， ｉ ｈ ｉ Ｙ ｎ ｈ ｘｉ ， ｈ ｎ ｎ ， ａ ｇ Ｔａ ， ｍｅ ， ｎ ｏ ｇ ｕ ｇ ｎ ， ａ ｉ Ｌｉ ｎ ｕ ， ａ ｇ Ｓ ｕ ａ Ｚ ｅ ｇ Ｊｉ ｇ ｇ ｎ ｉ Ｌｉ Ｍ Ｌｉ ｉ Ｄｅ ｇ Ｙ ｎ ，
ａ ｄ ｔ ｙ ａ ｌ ｅｓ ａ ｎ ｎ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ ｐ ｒｏ ｍｅ ｏ ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｏ ｈ ｕ ｖ ｖ ｌｒ ｔ ｓ ｏ ｕ ｋ ｔｃ ｌ ． ｓ ｌ Ｔｈ ｏ ｆ ｉｉｎ ｆ ｎ ｒ ｐ ｎ ｂ ｕ ｔ ｉ ｉ ｇ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｗａ ｅ ｆ ｒ ｄ ｆ ｒ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｆｔ ｅ ｓ ｒ ｉａ ａ ｅ ｆＪ ｒ ａ ｅｌ Ｒｅ ｕ ｔ ｏ ｓ ｓ ｅ ｃ ｅ ｆ ｅ ｔｏ ｃ
ｖ ｒａｉｎ ＣＶ）ｏ ａ ｉｔｏ （ ｆＦＣＭ ｓ１ｓ ｈ ｎ ５ ， ｅ ｈ ｅ１ ｏ ｃｎ ｒ ｔ ｎ ｅ ｃ ｅ ／ ｎ ｓ５ 一 １ ，ｗｈ ｎｔ ｅｃｌ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｗａ ｅｓｔａ ｗｈ ｎｔ ｅｃ ｌ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｘ ｅ ｄ１ ｍＬ ａ ｄｗａ ｏ ０ ０ ｅ ｈ ｅｌ ｏ ｃｎ ｒ — ｔ ｎ ｗａ ｅｏ １ ｍＩ Ｔｈ 上ａ ｄ ｓｏ ｅｏ ＣＭ ｒ ． ９ ｎ ． ９ ｅ ｐ ｃｉｅｙ ｔｏ ｅｏ ＣＫ一 ｒ ． ９ ｎ ． １ ｉ ｓｂ ｌｗ ０ ／ ｏ ． ｅ， ｎ ｌｐ ｆＦ ｗｅｅ０ ９ ３５ａ ｄ０ ９ ９ ４ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ，ｈ ｓ ｆＣ ｖ ８ｗｅｅ０ ９ １２ ａ ｄ １ ０１
大于 １ ｍｌ ， 值 小 于 ５ ； 胞 浓 度 小 于 ｉ ｍｌ ， ０ ／ 时 ＣＶ 细 ０ ／ 时 ＣＶ值 为 ５ ～ １ 。使 用 流 式 细 胞 术 ｒ Ｏ 为 ０ ９ ３ ５， 率 为０ ９ ９ ４； ． ９ 斜 ． ９
使 用 Ｃ Ｋ ８比 色 法 ｒ 为 ０ ９ ｌ ２ 斜 率 为 １ ０ １ 使 用 台盼 蓝 染 色排 除 法 为 ０ ９ ９８ 斜 率 为 １ ０ ７ Ｃ ２ ． ９ ， ．１ ； ． ６ ， ． ５ 。结 论 流 式 细胞 术 进 样 流
择。方法
要： 的 目
探 讨 流 式 细胞 术 测 定 细 胞 存 活 率 的 可 行 性 及 准 确 性 ， 药 物 筛 选 、 为 细胞 增 殖 测 定 、 物 毒 性检 测 等 提 供 新 的 选 药
使 用 流 式 细 胞 术 ， 胞 浓 度 细
使 用流 式 细 胞 术 、 Ｃ Ｃ Ｋ ８比 色 法 以及 台盼 蓝 染 色排 除 法 测 定 Ｊ ｒ ａ ｕ ｋ ｔ细胞 存 活 率 。结 果
Ｚｈ ｎ ａ ｇ Ｒｅ ｎ ｍｅ ， ｉ ａ ｍｅ Ｚｈ ｎ ｈ ａ ， ｏ ａ ｇ Ｌｉ ｕ ａ ｇＱｉ ｎ ， ｎＲｏ ｇ ｉ Ｌ ｎ ｉ Ｑｉ ， ａ ｇ Ｓ ｕ ｉ Ｚ ｕＱｉｎ ， ａ Ｈ
（ ． ｓ ａｒ ｈ Ｃｅ ｅ Ｃｈ ｎ １ Ｒｅ ｅ ｃ ｎｔｒ， ｅ ｇｄｕ Ｍ ｅ ｃ ｌｅ ｄｉａｌＣｏ ｌ ｇｅ， Ｃｈｅ ｇｄｕ ６ ００ ｎ １ ８３， Ｃｈｉ ａ； ｎ
Ｄｅ ｅ ｏ ｖ ｌ ｐｍｅ ｆ ａ ｓ ａ ｏｒ ｔ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｈｅ ｓ ｒ ｖ ｌ ｒ ｔ ｓ ｏ ｅ ｌ ｙ ｆ ｏ ｃ ｔ ｍ ｅ ｒ ｎｔ ｏ ｎ ａ ｓ ｙ ｆ ｈｅ ｄｅ ｅ ｔｏ ｆ ｔ ｕ ｖｉ ａ ａ ｅ ｆ ｃ ｌｓ ｂ ｌ ｗ ｙ ｏ ｔ ｙ
２ Ｄｅ ａｒｍｅ ｔ ｆ Ｏｎ ｏｏ ｙ， ｅ ｇ ｕＭ ｉｉａ ｙ Ｇｅ ｅａ ｏｐｉ ｌ Ｃｈ ｎ ｄ １ ０ ３， ｉａ ． ｐ ｔ ｎ ｃ ｌｇ Ｃｈ ｎ ｄ ｌｔ ｒ ｎ ｒ ｌＨ ｓ ｔ ， ｅ ｇ ｕ ６ ０ ８ Ｃｈ ｎ ） ｏ ａ Ａｂ ｔａ ｔＯｂｅｔｖ Ｔｏ ｉｖ ｓｉａｅｔ ｅｆａ ｉｉｔ ｎ ｃ ｕ ａ ｙｏ ｌｗ ｙ ｏ ｔｙ Ｆ ｓｒｃ ： ｊｃｉｅ ｎ ｅ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓｂｌ ｙａ ｄａ ｃ ｒ ｃ ｆｆｏ ｃ ｔｍｅｒ （ ＣＭ ）ｆ ｒｔ ｅｄ ｔｃｉｎ ｏ ｈ ｕ ｖｖ １ ａｅ ｇ ｉ ｏ ｈ ｅｅ ｔ ｆｔ ｅｓ ｒ ｉａ ｒ ｔｓ ｏ
速 稳 定 ， 与 活 细胞 数 量 成 正 比 ， 用 于测 定 细 胞 存 活率 。 且 可
关键 词 ： 式 细胞 术 ； 辛 卡 利 特 ； 台盼 蓝 染 色排 除 法 ； 细 胞 流 速 流 Ｄ ： ０ ３ ６ ／． ｓ ． ６ ３ ４ ３ ． ０ １ ． ０ ＯＩ １ ， ９ ９ ｉｉ ｎ １ ７ １ ０ ２ ｎ． ５ ０ ３ ｓ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ： ６ ３４ ３ （ ０ １ １ — ６ ３０ １ ７ — １ ０ ２ １ ） ５１ ６ ２
国际检验 医学杂 志 ２１ 年 ９ 第 ３ 卷 第 １ 期 ０１ 月 ２ ５
Ｉｔ ａ ｄＳｐｅ ｅ ０１Ｖ １ ２Ｎ ．５ ｎ Ｌ ｂＭｅ ，ｅｔｍｂｒ２１ ，ｏ胞 术 检 测 细 胞 存 活 率 的 方 法 学 建 立
刘 阳 ， 赖 翼 李敏 惠 杨 淑 霞 郑 静 阳 泰 李 丽梅 邓 勇 ， ， ， ， ， ， ， 张 强 ， 荣梅 李钱 梅 张 帅 邹 强 李 华 任 ， ， ， ， （． １ 成都 医学院科研 中心 ６ ０ ８ ；． １ ０ ３ ２ 中国人 民解放 军成 都 军 区总 医院肿 瘤科 ， 成都 ６ ０ ８ ） １ ０ ３
ｏ ｅ ｌ ｏ ｐ ｏｖ ｄ ｎｏ ｈｅ ｈｏｃ ｒ ｇ ｓ ｒ ｅ ｃ ｌ ｏｌｆ ｒ ｔｏｎ ａ ｓ ｙ ａ ｕ ｔ ｉｉｙ ａ ｓ ｙ ｆｃ ｌｓ ｔ ｒ ｉ ｅ ａ ｔ ｒｃ ｉｅ ｏｆｄ ｕ ｃ ｅ ｎ， ｅ ｌｐｒ ｉｅ ａ ｉ ｓ ａ ｎｄ ｄｒ ｇ ｏｘ ｃｔ ｓ ａ ．Ｍ ｅ ｈｏ ｓ Ｆｌ ｔ ｄ ｏｗ ｙｔ ｍ ｅ ｒ ＣＣＫ一 ｃ ｏ ｔ ｙ， ８
Ｌｉ ａ ｇ Ｌ ｉＹ ， ｉ ｈ ｉ Ｙ ｎ ｈ ｘｉ ， ｈ ｎ ｎ ， ａ ｇ Ｔａ ， ｍｅ ， ｎ ｏ ｇ ｕ ｇ ｎ ， ａ ｉ Ｌｉ ｎ ｕ ， ａ ｇ Ｓ ｕ ａ Ｚ ｅ ｇ Ｊｉ ｇ ｇ ｎ ｉ Ｌｉ Ｍ Ｌｉ ｉ Ｄｅ ｇ Ｙ ｎ ，
ａ ｄ ｔ ｙ ａ ｌ ｅｓ ａ ｎ ｎ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ ｐ ｒｏ ｍｅ ｏ ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｏ ｈ ｕ ｖ ｖ ｌｒ ｔ ｓ ｏ ｕ ｋ ｔｃ ｌ ． ｓ ｌ Ｔｈ ｏ ｆ ｉｉｎ ｆ ｎ ｒ ｐ ｎ ｂ ｕ ｔ ｉ ｉ ｇ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｗａ ｅ ｆ ｒ ｄ ｆ ｒ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｆｔ ｅ ｓ ｒ ｉａ ａ ｅ ｆＪ ｒ ａ ｅｌ Ｒｅ ｕ ｔ ｏ ｓ ｓ ｅ ｃ ｅ ｆ ｅ ｔｏ ｃ
ｖ ｒａｉｎ ＣＶ）ｏ ａ ｉｔｏ （ ｆＦＣＭ ｓ１ｓ ｈ ｎ ５ ， ｅ ｈ ｅ１ ｏ ｃｎ ｒ ｔ ｎ ｅ ｃ ｅ ／ ｎ ｓ５ 一 １ ，ｗｈ ｎｔ ｅｃｌ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｗａ ｅｓｔａ ｗｈ ｎｔ ｅｃ ｌ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｘ ｅ ｄ１ ｍＬ ａ ｄｗａ ｏ ０ ０ ｅ ｈ ｅｌ ｏ ｃｎ ｒ — ｔ ｎ ｗａ ｅｏ １ ｍＩ Ｔｈ 上ａ ｄ ｓｏ ｅｏ ＣＭ ｒ ． ９ ｎ ． ９ ｅ ｐ ｃｉｅｙ ｔｏ ｅｏ ＣＫ一 ｒ ． ９ ｎ ． １ ｉ ｓｂ ｌｗ ０ ／ ｏ ． ｅ， ｎ ｌｐ ｆＦ ｗｅｅ０ ９ ３５ａ ｄ０ ９ ９ ４ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ，ｈ ｓ ｆＣ ｖ ８ｗｅｅ０ ９ １２ ａ ｄ １ ０１
大于 １ ｍｌ ， 值 小 于 ５ ； 胞 浓 度 小 于 ｉ ｍｌ ， ０ ／ 时 ＣＶ 细 ０ ／ 时 ＣＶ值 为 ５ ～ １ 。使 用 流 式 细 胞 术 ｒ Ｏ 为 ０ ９ ３ ５， 率 为０ ９ ９ ４； ． ９ 斜 ． ９
使 用 Ｃ Ｋ ８比 色 法 ｒ 为 ０ ９ ｌ ２ 斜 率 为 １ ０ １ 使 用 台盼 蓝 染 色排 除 法 为 ０ ９ ９８ 斜 率 为 １ ０ ７ Ｃ ２ ． ９ ， ．１ ； ． ６ ， ． ５ 。结 论 流 式 细胞 术 进 样 流