马来酰亚胺类新型抗菌剂的制备及对离体菜叶的抑菌效果

马铃 薯培 养基 （ＰＤＡ）：马铃薯 ２００．０ ｇ，葡 萄 糖 ２０．０ ｇ，琼 脂条 １８．０ ｇ，加 自来 水 １ ０００ ｍＬ， 自 然 ｐＨ 值 ，１２１ ｃｃ灭菌 ２０ ｍｉｎ。 １．２ 供 试 菌株
菌核 病 菌 （Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ） 是 由浙 江 省 农业科 学 院提供 。该菌 核病 菌分 离于 感染菌 核病 的 油 菜 。 １．３ 二 甲基 马来 酰亚胺 类化合 物 的制备
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刘 树 生 ，张友 军 ．烟 粉 虱 ． 重 要 农 林 外 来 入 侵 物 种 的 生 物 学 与 控 制 ［Ｍ］．北 京 ：科 学 出 版 社 ，２００５：６９—１２８． 林 克 剑 ，吴孔 明 ，张 永 军 ，等 ．温度 和 湿 度 对 Ｂ 型 烟 粉 虱 发 育 、存 活 和 生殖 的 影 响 ：Ｊ］．植 物 保 护 学 报 ，２００４，３１ （２）：１６６ —１７２．
超过 １ Ｉｎ。本研 究结 果表 明 ，烟 粉虱 从番 薯 传 至番 茄 地 以及 在 番茄地 内 的扩 散都 需要 较长 的时 间 ，因 此 可 以确 定在 秋冬 栽培 的番 茄 中 ，烟粉 虱从 番薯地 转 播到 番茄地 是缓 慢 的 ，在 番茄地 内的扩散 也是缓 慢 的 ，且从 长 时 间看 ，烟 粉 虱 达相 对 稳 定 分 布后 ， 各 垄 间的扩 散将会 减弱 。
本实 验 以变构 霉素 的活性 核 心结 构 马来酸 酐 为 底 物 ，参 照 Ｍａｒｃｕｓ等 。。 合成 方法制 备得 到 ２，３一二 甲基马来 酸 酐 。然 后 以 ２，３一二 甲基 顺 丁烯 二 酸 酐 和 各有机 胺 为底物 ，在 现有 报道 的马来 酰亚胺 类化 合 物合 成方 法 的基 础上 进行 改进 ，采用 两 步 法 制 备 ３，４一二 甲基 马来 酰 亚胺 衍 生 物 ，这 里 的 两 步 合 成 法 主 要 是 指 乙 酸 酐 法 （Ｐａｔｈ Ａ） 和 共 沸 法 （Ｐａｔｈ Ｂ） （图 １），并 通 过 Ｈ ＮＭＲ、 ＥＩ·ＭＳ、ＩＲ 对 所 制备 的马来酰 亚胺类 化合 物进行 结 构表征 。
澎江右Ｊ－： 中学 ２０１２年第８期
田
文 献著 录 格式 ：沈 振 忠 ，陈 小 龙 ，范 永 仙 ，等 ．马来 酰 亚胺 类 新 型 抗 菌 剂 的 制 备 及 对离 体 菜 叶 的抑 菌 效 果 ［：．］． 浙 江 农 业 科 学 ，２０１２ （８）
ｌ１５５ — １１５８．
．
马 来 酰 亚胺 类 新 型抗 菌 剂 的制 备 及 对 离 体 菜 叶 的抑 菌效 果
２ 结 果 与 分 析
２．１ 二 甲基 马 来 酰 亚 胺 类 化 合 物 的 制 备
沈振忠，等：马来酰亚胺类新型抗菌剂的制备及对离体菜叶的抑菌效果
田国
目前 已报道 的关于 马来 酰亚胺类化合 物 的合 成 ， 其 马来酰亚胺 的 ３，４号位 上大都 没有取 代基 ，而 且 主要集 中于欧 美 和 日本 等 国家 ，在 国 内研 究 较 少 ， 尤 其是用作 Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ等植物 致病真 菌 的杀菌 剂 研 究还未见报道 。因此制备这些新 型 ３，４一二 甲基 马 来 酰亚胺类化 合物 是研 究其 抗 菌活 性前 提 条件 ，选 择 合理 的合成 方法 对 开发 马来 酰亚胺 类 新型 抗菌 剂 具 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ重要 的科 学 与理 论意 义 。通 过改 进 的两 步合 成 法 合成 了 １７个 ３，４一二 甲基 马来 酰亚胺衍 生物 。
沈振 忠 ，陈小龙 ，范永仙 ，李福 革
（浙江工业大学 生物 与环境工程学院发酵工程研究所 ，浙江 杭州 ３１００１４）
摘 要 ：为 解 决 菌 核 病 菌 抗 药 性 难 题 ，筛 选 出 高 效 、低 毒 的 、 防 治 菌 核 病 的 马 来 酰 亚 胺 类 新 型 抗 菌 剂 ，本 实 验采 用 改 进 后 的两 步合 成 法 制 备 了 １７种 马 来 酰 亚 胺 类 化 合 物 ；此 外 ，还 利 用 离 体 叶 片 法 检 测 了 １７个 马 来 酰 亚胺 衍 生物 对 菌 核病 菌 的抑 制 效 果 。结 果 表 明 ，Ⅳ．（３，５－二 氯 苯 基 ） －３，４－二 甲基 马 来 酰 亚 胺 和 Ⅳ一（３，４，５一 三 氟 苯 基 ） 一３，４－二 甲基 马 来 酰 亚 胺 对 离 体 菜 叶 的 完 全 防 效 浓 度 分 别 为 ２００和 ５００ ｇ·ｍＬ。。，其 防 效 均 比对 照 药 剂好 ，剩 余 马来 酰 亚 胺 衍 生 物 虽 然 防效 不 及 对 照 药 剂 ，但 都 表 现 出 了一 定 的 抗 菌 活 性 ，具 有 开 发 成 为 新 型 抗 菌 核 病 菌农 药 的 潜 力 。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 供 试 药剂和培 养基 本 实验所 用 马来酸 酐 、有机胺 和对 照试剂 氯硝
胺 均 购 自于阿 拉 丁 （上 海 ） 试 剂 有 限 公 司 ；对 苯 二 酚 、 乙酸 钠 、乙酸 乙酯等 常用试 剂购 于衢州 巨化 试剂 有 限公 司 ；所有试 剂均 为分 析纯 ；马铃薯 、青 菜 叶市场 购买 。
参 考 文 献 ：
［１］ Ｂｒｏｗｎ Ｊ Ｋ，Ｆｒｏｈｌｉｃｈ Ｄ Ｒ，Ｒｏｓｅｌｌ Ｒ Ｃ． Ｔｈｅ ｓｗｅｅｔ ｐｏｔａｔｏ ｏｒ
ｓｉｌｖｅｒｌｅａｆ ｗｈｉｔｅｆｌｉｅｓ ｂｉｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｂｅｍ ｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ｏｒ ａ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｃｏｍｐｌｅｘ ［Ｊ］．Ａｎｎｕｍ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，１９９５，４０，５１１
关 键 词 ：马来 酰 亚胺 ；制 备 ；菌 核 病 菌 ；防效 中 图 分 类 号 ：ｓ ４３６．３ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：０５２８—９０１７（２０１２）０８－１１５５—０４
目前 ，植 物致 病真 菌是 引起植 物病 害最 重要 的 因素 ，约 有 ７０％ 的 植 物 病 害 是 因为 真 菌 引 起 的 ， 真 菌能 引起 多种植 物病 害 ，对各 国 的农 业经 济造成 了巨大 的损 失 。菌 核 病 菌 （Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ） 作 为具 有代 表性 的植物 致病 真菌 ，寄 主范 围广 ，来 源复杂 而且 潜伏 侵染 ，腐生 性强 ，是 引起农 作物 病
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ａ为 Ｒ ＝ｎ—ｂｕｔｙｌ；ｂ 为 Ｒ ＝ｉｓｏ－ｂｕｔｙｌ；ｃ为 Ｒ ＝ｎ—ａｍｙｌ； ｄ为 Ｒ ＝ ｎ—ｈｅｘｙｌ；ｅ为 Ｒ ＝ ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ；ｆ为 Ｒ ＝ｎ－ｏｃｔｙｌ；ｇ为 Ｒ＝ｎ—ｄｏｄｅｃｙｌ；ｈ为 Ｒ ＝ ｐｈｅｎｙｌ；ｉ为 Ｒ＝ ｂｅｎｚｙｌ；Ｊ为 Ｒ＝ ２－ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ；ｋ为 Ｒ：３·ｐｈｅｎｐｒｏｐｙｌ； ｌ为 Ｒ＝４－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ； ｍ 为 Ｒ ＝ ４－ｔｏｌｙｌ；ｎ 为 Ｒ＝３，５·ｄｉｅｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ；Ｏ为 Ｒ＝２－ｍｅｔｈｙｌ一３一ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｉ Ｐ为 Ｒ ＝ ２－ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ； ｑ为 Ｒ＝３，４，５－ｔｒｉｆ ｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ。Ｐａｔｈ Ａ为 乙酸 酐 法 ；Ｐａｔｈ Ｂ为 共 沸法 。
害 的高风险 性 的 病 菌 ，而且 该 真 菌 易产 生 抗 药性 ， 所 以开发 高效 、低毒 的新 型抗 菌剂 十分必要 。
含 马 来 酸 酐 结 构 的 天 然 化 合 物 对 ｜ｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ 具有 良好 的抑制效 果 ，然 而该类 天 然 化合 物 的生物 活性对 ｐＨ 的依 赖性 较 大 ，在酸 性 条 件下 ，其 活性 较好 ，在碱 性条件 下 ，酸酐 结构容 易
图 １ 马来酰 亚胺 类化合 物的 两步合 成法
１．４ 二 甲 基 马 来 酰 亚 胺 类 化 合 物 对 离 体 菜 叶 的
防 效
取 叶位相近 、大小相 同的青 菜叶用 自来水 洗净后 再 用去离子 水浸润 ３０ ｍｉｎ，取 出晾干备用 。用 ０．１％ 的吐温 ８０水溶液作溶剂 ，将本实验制备的 １７种 ３，４一 二 甲基 马来酰亚胺衍生物 、氯硝胺 （对照 ）配制成含 药溶 液 ，每 种 药 物 浓 度 梯 度 分 别 设 为 １ ０００，８００， ６００，５００，４００，２００，１００，５０ Ｉａ，ｇ·ｍＬ～， 然 后 将 含药 溶液 用喷雾 器 分 别 喷至 洗 净 晾干 的菜 叶表 面 ， 使药 液均 匀分布 于菜 叶表 面 ，再 次 晾 干 ，以 ０．１％ 的 吐温 ８０作空 白，每处理 重复 ３次 。
２１ — ２６．
（责 任编辑 ：张瑞麟 ）
Ｉ
澎江雇 种学 ２０１２年第８期
开环 导致 其活 性迅 速 降低 ，而且 天然 化合 物种 类 单一 ，部分毒性 较大 ，这极 大地 限制 了在农 业上 的 使用 。近年来 ，在 对 马来酸 酐类 天 然化 合 物 的母 核 进行 结构修饰 和改造 过程 中发 现 了多种 高 活性 的抗 菌化 合物 ，其 中含马 来酰 亚胺 结构 的新 型抗 菌剂 因 为结 构稳定 、抗 菌活 性好 ，且毒 性 低而 逐渐 受 到大 家的关注 。本研 究 的主 要 内容是 对 马来 酸 酐结 构进 行化学修饰 ，并 检测 马来 酰亚胺类 化合 物对 ５． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ 的抑制效 果 ，现将有关结果 报道如下 。
在 ＰＤＡ培养 基 预培养 的 Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ菌 落边 缘 用直 径为 ６．０ ｍｍ 的打 孔器 取 菌碟 ，将 菌 丝 面 朝 下 接至 叶 片 正 中央 ，２３ ｃＩ＝恒 温 培 养 箱 光 照 培 养 。 ４８ ｈ后 ，观 察 叶 片 的被 侵 染 与 腐 烂 情 况 ，用 完全 抑 制浓 度 表 示 各 Ⅳ－取 代 马 来 酰 亚 胺 衍 生 物 对 Ｊｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ侵染 离体 叶片 的 防治效 果 。离 体 叶片 防 效 计算 公 式 ：防效／％ ＝１００ （对 照病 斑 直 径 一处 理病斑 直径 ）／ （对照病 斑直 径 一６）。
收稿 日期 ：２０１２－０４－０６ 基 金项 目： 国家 自然 科 学 基 金 （２１１７２１９８） 作 者简 介 ：沈 振 忠 （１９８６一），男 ，浙 江 临安 人 ，硕 士 生 ，研 究 方 向 为 天然 化 合 物 结 构 修 饰 与 抗 菌 活性 。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｚｚｌ１０４＠ １６３．ｔｏｍ。
Ｂｙｍｅ Ｄ Ｎ ， Ｒａｔｈｍａｎ Ｒ Ｊ， Ｏｒｕｍ Ｔ Ｖ， ｅｔ ａ１． Ｌｏｃａｌｉｚｅｄ
ｍｉｇｒａｔｉｎｅ ａｎｄ Ｄｉｓｐｅｒｓａｌ ｂｙ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ［Ｊ］． Ｏｅｃｏｌｏｇｉａ，
１９９６ ， １０５， ３２０ — ３２８．
周 福 才 ，杜 予 州 ，孙 伟 ，等 ．黄 板 对 菜 地 烟 粉 虱 的 诱 集 作 用 研 究 ［Ｊ］．华 东 昆 虫 学 报 ，２００３，１２ （１）：９６—１００． 罗宏 伟 ，黄 建 ，王 竹 红 ，等 ．烟 粉 虱 在 温 室 内 甘 薯 寄 主 上 生 物学 特 性 的 研 究 ［Ｊ］．华 东 昆 虫 学 报 ，２００３， １２ （２）：
秋 冬栽 培 的番茄地 不需 远离 番薯地 ，同时番 茄 移栽后 １５ ｄ左 右 是 烟 粉 虱 防 治 的重要 时期 ，对 于 控制 烟粉 虱虫 口基数 具有 重要 意义 。常规操 作 中往 往会 将番 茄大棚 周边 的杂 草 除去 ，该 项操 作是 否会 加速 烟粉 虱从 杂草 到番茄 的传播 与扩 散值 得进 一步 明 确 。