溴甲酚绿结合法

血清白蛋白溴甲酚绿比色法
原理：白蛋白具有与阴离子染料结合的特性。

在pH4左右，溴甲酚绿与白蛋白结合后由黄色变成绿色，绿色的深浅与白蛋白浓度成正比，因此，应用溴甲酚绿溶液可以直接比色测定血清白蛋白含量。

试剂：1、溴甲酚绿贮存液：在25ml烧杯中称入溴甲酚绿419mg，加入0.1N 氢氧化钠10ml，用玻璃棒搅拌，使溴甲酚绿完全溶解（如用溴甲酚绿钠盐，则称取432mg，用蒸馏水溶解）。

用蒸馏水将此溶液全部转注入1L容量瓶中，再加入叠氮钠100mg，最后加蒸馏水至1L刻度。

2、0.1M枸橼酸缓（柠檬酸）冲液，pH4.2：分别配制0.1M枸橼酸及0.1M 枸橼酸钠，然后按12.3：7.7的体积比例混合，每升混合液中加入叠氮钠100mg。

试测pH，如不符合要求，再在混合液中加入适量0.1M枸橼酸或0.1M枸橼酸钠以校正pH至4.2.
3、30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：称取聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）30g，加入适量蒸馏水，在约60℃水浴中使溶液，然后加蒸馏水至100ml。

4、溴甲酚绿应用液：取溴甲酚绿贮存液250ml，加0.1M、pH4.2枸橼酸钠缓冲液750ml，再加30%聚氧化乙烯月桂醚溶液8ml，混合。

以上试剂可在室温保存数月。

如不加叠氮钠则枸橼酸缓冲液和溴甲酚绿应用液应保存于冰箱中。

操作：将血清标本及标准血清用生理盐水作1/10稀释（例如血清0.20ml加生理盐水1.8ml），然后按表进行操作：
空白管标准管测定管
ul ul ul 血清标本20 标本血清40g/L 20
生理盐水20
溴甲酚绿应用液500 500 500
充分混合，室温放置10min后在1小时后用628nm处比色。

以空白管校正光密度
到0点，读取各管光密度读数
计算：测定管光密度/标准管光密度*40 g/L=血清白蛋白g/L。