最新CMV_PP65抗原检测及临床意义
人巨细胞病毒pp65抗原检测
I gM
症状 1
症状 2
抗原血症 1
抗原血症 2
移植后时间 首 次 pp65 抗 原 血 症 出 现 于 移 植 后 59 天 ， 2 天 后 出 现 喘 憋 、 低 氧 血 症 ，经 更 昔 洛 韦 治 疗 13 天 后 症 状 消 失 ， 抗 原 血 症 转 阴 ， 此 时 I gM才 开 始 出 现 弱 阳 性 ， 此 后 I gM持 续 阳 性 。移 植 后 6 个 月 ，再 次 出 现 喘 憋 、低 氧 血 症 ，查 pp65 抗 原 血 症 转 阳 , 经更昔洛韦治疗 7 天后症状消失、抗原血症转阴。
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低，
人巨细胞病毒pp65抗原检测
CMV感染的危险因素 CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染 病程长、未正规治疗的狼疮
人巨细胞病毒pp65抗原检测
三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和 再障病人中CMV感染中的应用
A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者T细胞功能重建 C 配型不完全符合者T细胞功能重建
人巨细胞病毒pp65抗原检测
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2 － 骨髓移植后CMV感染的危险因素
CD34＋细胞分选
GVHD(FK506)
TBI
合并其他病原体感染
人巨细胞病毒pp65抗原检测
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 －－治疗时间
人巨细胞病毒pp65抗原检测
研究目的
了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床
HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。 了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指
导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。
中国肾移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗指南（2023_版）
· 指南与共识·中国肾移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗指南（2023版）中华医学会器官移植学分会 中国医师协会器官移植医师分会 中国医疗保健国际交流促进会肾脏移植学分会 【摘要】 近几年在实体器官移植（SOT ）受者巨细胞病毒（CMV ）感染诊疗领域，无论是诊断方法还是新型抗CMV 药物都有了一些新的进展，对CMV 感染的诊治产生了积极的影响。
为了进一步规范中国肾移植术后CMV 感染的管理，中华医学会器官移植学分会组织了国内多个学科相关领域专家，参考《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南（2016版）》和国内外已发表的最新文献和指南，制定了《中国肾移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南（2023版）》，新版指南更新了CMV 流行病学，CMV 感染的危险因素和普遍性预防的研究进展，新增CMV 感染定义，细化CMV 血症和CMV 病的诊断标准，并对新型抗CMV 药物进行了介绍。
【关键词】 肾移植；实体器官移植；巨细胞病毒；感染；病毒血症；巨细胞病毒病；普遍性预防；抢先治疗【中图分类号】 R617, R373 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2024）03-0001-20Clinical diagnosis and treatment guidelines for cytomegalovirus infection in kidney transplant recipients in China (2023edition) Branch of Organ Transplantation of Chinese Medical Association, Branch of Organ Transplantation Physician of Chinese Medical Doctor Association, Branch of Kidney Transplantation of China International Exchange and Promotive Association for Medical and Health Care. *The First Affiliated Hospital of Xi 'an Jiaotong University , Xi 'an 710061, China Correspondingauthors:DingXiaoming,Email:***************.cnXueWujun,Email:******************.cn【Abstract 】 In recent years, there have been significant advances in the diagnosis and treatment of cytomegalovirus (CMV) infection in solid organ transplant (SOT) recipients, including diagnostic method and anti-CMV drugs. These advancements have had a positive impact on the management of CMV infection in SOT recipients. To further standardize the management of CMV infection after kidney transplantation in China, Branch of Organ Transplantation of Chinese Medical Association organized a multidisciplinary group of experts in relevant fields. They referred to the ‘Diagnosis and Treatment Guidelines for Cytomegalovirus Infection in Solid Organ Transplant Recipients in China (2016 edition)’ and the latest published literature and guidelines, resulting in the development of the ‘Clinical Diagnosis and Treatment Guidelines for Cytomegalovirus Infection in Kidney Transplant Recipients in China (2023 edition)’. The updated guideline includes CMV epidemiology, research progress on the risk factors and universal prevention of CMV infection, the definition for CMV infection, detailed diagnostic criteria for CMV viremia and CMV disease, as well as an introduction to new anti-CMV drugs.【Key words 】 Kidney transplantation; Solid organ transplantation; Cytomegalovirus; Infection; Viremia;Cytomegalovirus disease; Universal prevention; Preemptive therapyDOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2024096基金项目：国家自然科学基金（82370802、82170766、82270789、81970646）；陕西省卫生健康肾脏移植科研创新平台（2023PT-06）执笔作者单位： 710061 西安，西安交通大学第一附属医院（丁小明）；首都医科大学附属北京友谊医院（林俊）；首都医科大学附属北京朝阳医院（胡小鹏）；复旦大学附属中山医院（戎瑞明）；西安交通大学第一附属医院（郑瑾）通信作者：丁小明，Email ：***************.cn ；薛武军，Email ：******************.cn第 15 卷 第 3 期器官移植Vol. 15 No.3 2024 年 5 月Organ Transplantation May 2024 巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是一种全球传播广泛的β-疱疹病毒，原发感染之后在体内会呈潜伏状态，当人体的免疫功能下降时病毒会被再激活。
人巨细胞病毒pp65抗原检测-医学资料
* 人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症较特异性抗体IgM阳性 早出现30天1。优点是可定量检测，5小时内可出结果。
研究目的
了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床
HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。
了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指 导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。
pp6 5抗 原 阳 性 1 3 3
1 6
pp6 5抗 原 阴 性 4
1 6
2 0
计
1 7
1 9
3 6 P < 0 .0 1
发 生 G V H D 组 的 C M V 感 染 发 病 率 明 显 高 于 未 发 生 组 。
FK506
用药 未用药
pp65抗原阳性 6
10
16
pp65抗原阴性 0
20
20
3周－2月感染 54. 8%
16
14
12
10
8
6
4
2
0
alloPBSCT
allo-BMT
BMT+PBSCT
AUTOPBSCT
»¼ Õß Àý Êý
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18 16 14 12 10
8 6 4 2 0
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pp65Ñô ÐÔ pp65Òõ ÐÔ
T B I与 C M V 感 染 的 关 系
白 细 胞 ≤ 3000/mm3； 血 小 板 《 75× 109/L； 单 核 细 胞 增 多 ， 异 淋 > 10%; 视网膜炎； CXR 示 间 质 性 肺 炎 和 低 氧 血 症 ， 无 其 他 原 因 解 释 者 ； 肝炎（肝功异常、肝脾肿大），无其他原因解释者； 移植物功能异常 大 脑 病 变 /神 经 系 统 异 常 /多 神 经 炎
人巨细胞病毒pp150-pp65蛋白的表达与应用
人巨细胞病毒pp150-pp65蛋白的表达与应用金玉芬;李艳蕾;华艳;张晓刚;于庭【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)012【摘要】目的构建并表达人巨细胞病毒(HCMV)pp150-pp65蛋白,将纯化的重组蛋白制备成胶体金试剂盒对其抗原性进行评价.方法采用PCR方法扩增HCMV pp150-pp65基因片段,连接到原核表达载体pET28a进行表达并纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并与北京英诺特生物技术有限公司合作研制出巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒(胶体金法),与进口试剂盒(酶免法)进行临床标本比对试验.结果成功构建了HCMV的高效表达载体pET28a-pp150-pp65,并得到分子量在45 kd的高表达蛋白,具有良好的抗原性.将该蛋白制备成胶体金试剂盒,经600份血清标本的检测,与进口CMV-IgG试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为92.7%和83.1%,总的符合率为90.2%;与进口CMV-IgM 试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为88.1%和89.2%,总的符合率为88.5%,稳定性良好.结论高效表达纯化的pp150-pp65重组蛋白抗原性强,利用其建立的胶体金试剂盒与国产已上市试剂盒和进口试剂盒比对,不仅具有较高的灵敏度和特异性,而且经初步临床应用,表明该试剂盒能检测不同临床感染阶段的患者,具有较好的市场前景.【总页数】4页(P2193-2196)【作者】金玉芬;李艳蕾;华艳;张晓刚;于庭【作者单位】吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,吉林,长春130041;北京英诺特生物技术有限公司,北京100070;北京英诺特生物技术有限公司,北京100070;吉林大学第二医院,吉林,长春130041【正文语种】中文【中图分类】R373.1+1【相关文献】1.人巨细胞病毒pp150-gp52蛋白原核可溶性表达与IgM捕获ELISA方法建立和应用 [J], 孙卫国;孙雯娜;侯江厚;杨秉芬;张灵霞2.应用人脐带血单个核细胞体外同时表达EB病毒和巨细胞病毒蛋白抗原 [J], 戴丽君;彭爱华;陈运贤;许多荣;罗绍凯;洪文德;李树浓3.人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用 [J], 李长贵;周铁群;邱平4.人巨细胞病毒pp150蛋白片段与MDBP蛋白片段的融合表达及初步应用 [J], 郭大东;高雪芹;韩金祥;刘毅;张华宁5.人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用 [J], 李长贵;周铁群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染中的价值
［１］ ＳＺＣ ＺＥ ＰＵ Ｒ Ａ Ａ ， Ｗ Ｅ ＳＴＭ Ｏ Ｒ Ｅ ＬＡ Ｎ Ｄ Ｄ ， Ｖ ＩＮ Ｏ Ｇ Ｒ Ａ Ｄ Ｏ Ｖ Ａ Ｙ ， ｅｔ ａｌ． Ｅ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃｙｔｏｍ ｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｉｍ ｍ ｕｎｏｃｏｍ ｐｒｏｍ ｉｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ［Ｊ］． Ｈ ｅａｌｔｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａ ｓｓｅｓｓｍ ｅｎｔ， ２００６， １０（１０）： ６－７．
１１／３７） Ｃ Ｍ Ｖ － ＰＰ６５ 抗原阳性， 均给予更昔洛韦抗病毒治疗， １１ 例患者中 ３ 例（ ８．１％ ， ３／３７） 发 展 成 巨 细 胞 病 毒
病 ， 均 发 生 于 停 用 或 未 采 用 更 昔 洛 韦 时 ； 另 外 ２６ 例 患 者（ ７０．３％ ， ２６／３７） ＰＰ６５ 抗 原 始 终 阴 性 ， 随 访 ３ 个 月 无 巨
Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｓｈａ， Ｈｕｎａｎ ４１００１１， Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｒｅｎａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ａ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ ３７ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｒｅｎａｌ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ． Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｅｌｅｖｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ （２９．７％， １１／３７） ｗｅｒｅ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｈａｄ ｔｏ ｒｅｃｅｉｖｅ ａｎｔｉ－ ｖｉｒｕｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ． Ｔｈｒｅｅ ｐａ－ ｔｉｅｎｔｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ａｌｌ ｔｈｅ ３ ｃａｓｅｓ ｈａｐｐｅｎｅｄ ｗｈｅｎ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｗｅｒｅ ｗｉｔｈｄｒａｗｅｄ． Ｏｔｈｅｒ ２６ ｐａｔｉｅｎｔｓ （７０．３％， ２６／３７） ｗｅｒｅ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｎｅｇａｔｉｖｅ ａｎｙｔｉｍｅ ａｎｄ ｎｏ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ ｈａｐｐｅｎｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ３ ｍｏｎｔｈｓ′ｆｏｌｌｏｗ－ ｕｐ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｎａｌ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｏｆ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ．
CMVPP65抗原检测及临床意义
• 通过动态监测CMVpp65抗原的表达水平，可以评 估病情的进展和治疗效果，指导临床治疗方案的 调整。
流行病学调查
• CMVpp65抗原检测可以用于流行病学调 查，了解CMV的感染率和流行趋势，为预 防和控制感染提供依据。
03 CMVpp65抗原检测的临 床意义
诊断CMV感染
诊断准确性
CMVpp65抗原检测能够准确快速地 检测出CMV感染，尤其在病毒血症期， 其阳性率较高，有助于早期诊断。
区分病原体
CMVpp65抗原检测可以与其他病毒 引起的疾病相区分，如EB病毒、巨细 胞病毒等。
监测治疗效果
评估抗病毒治疗
通过监测CMVpp65抗原水平，可以 评估抗病毒治疗的效果，指导临床调 整治疗方案。
监测复发
对于已经接受治疗的患者，定期监测 CMVpp65抗原有助于发现病毒复发， 及时采取干预措施。
CMVpp65抗原检测及临床意义
目 录
• 引言 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测的临床意义 • CMVpp65抗原检测的局限性 • 展望
01 引言
目的和背景
CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值
探讨CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值，包括其在诊断、治疗和预防CMV感染方 面的作用。
1 2
疫苗研发
研究更有效的CMV疫苗，降低感染风险和疾病 负担。
抗病毒药物
开发新的抗病毒药物，提高治疗效果和降低副作 用。
3
个体化治疗
根据患者的具体情况制定个体化的预防和治疗方 案，提高治疗效果和患者生活质量。
提高公众对CMV感染的认识和预防意识
01
02
03
人巨细胞病毒蛋白pp65在胶质瘤中的表达及意义
人巨细胞病毒蛋白pp65在胶质瘤中的表达及意义李鹏起;费舟;李秉琴;闫志丰;陈晓燕;袁亮;董秋峰;杨鑫;李三中;甄海宁【摘要】Objective The expression and significance of pp65 protein of human cytomegalovirus (HCMV) in gliomas were investigated.Methods The expression of pp65 protein of HCMV was detected by immunohistochemistry in 175 cases of human brain ghoma and 10 cases of normal human brain tissue,as well as the relationship between its expression and clinicopathological features of gliomas was futher analyzed.Results Expression of pp65 protein in gliomas was significantly higher than that in normal human brain tissues (Z =-4.338,P=0.000).Immunostaining intensity of pp65 protein in malignant ghomas was significantly higher than that in benign gliomas (Z =-0.960,P=0.037),while the immunostaining intensity of pp65 protein was not significantly associated with the pathological grade (r =0.096,P=0.208),as well as with the gender (r =0.138,P =0.069),age (r =0.016,P =0.837) and tumor site (r =-0.147,P =0.52) of ghoma patients.Conclusion HCMV infection and its protein pp65 expression may be associated with the tumorigenesis of human brain gliomas,however its exact oncogenous mechanism needs further study.%目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)蛋白pp65在胶质瘤中的表达水平及其意义.方法采用免疫组化方法检测HCMV蛋白pp65在175例人脑胶质瘤组织及10例正常人脑组织中的表达,分析其表达水平与胶质瘤临床病理学特征的关系.结果 pp65蛋白在胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常人脑组织(Z=-4.338,P=0.000);pp65蛋白在高恶性度胶质瘤中的免疫染色强度明显强于低恶性度胶质瘤(Z=-0.960,P=0.037),而pp65蛋白免疫染色强度与胶质瘤的病理级别无明显的相关性(r =0.096,P=0.208),以及pp65蛋白免疫染色强度与胶质瘤患者的性别(r=0.138,P=0.069)、年龄(r=0.016,P=0.837)和肿瘤部位(r=-0.147,P=0.052)也均无明显相关性.结论 HCMV感染及其蛋白pp65表达可能与人脑胶质瘤的发生存在一定关系,但其确切的致瘤机制尚需进一步研究.【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2017(016)003【总页数】5页(P202-206)【关键词】人巨细胞病毒;磷酸化糖蛋白65;胶质瘤;免疫组化【作者】李鹏起;费舟;李秉琴;闫志丰;陈晓燕;袁亮;董秋峰;杨鑫;李三中;甄海宁【作者单位】第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;海东市乐都区人民医院妇产科,青海海东810700;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R373;R739.41胶质瘤是中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤，其发病率约占颅内肿瘤的45%。
血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用
血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用摘要】目的探讨血PP65抗原、尿CMV-DNA和血IgM抗体检测对婴儿巨细胞病毒（CMV）活动性感染的诊断价值。
方法通过免疫荧光技术对142例CMV病毒性感染患儿进行血PP65抗原检测，同时用实时荧光定量PCR方法测定尿CMV-DNA，并用ELISA法检测血清CMV-IgM，比较三种方法的检测结果；对25例PP65阳性患儿进行短期随访，分析PP65的临床应用价值。
结果 142例CMV感染患儿中，PP65抗原阳性率89.4%(127/142)，阳性细胞范围7-145/2×105个多形核白细胞。
PP65与尿CMV-DNA两种方法检测的结果差异无统计学意义（χ2=0.125，P>0.05），但PP65与血CMV-IgM检测结果差异有统计学意义（χ2=53.16，P<0.01）。
PP65抗原和尿PCR的阳性符合率98.4%（127/129），阴性符合率86.7%（13/15），与IgM抗体阳性符合率是51.2%（65/127），阴性符合率19.5%（15/77）。
PP65相对于PCR的敏感性为98.4%（127/129），特异性为97.6%（124/127）；PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性，高水平PP65感染患儿多发全身性感染，低水平PP65抗原血症多为单脏器感染（χ2=49.03，P<0.005）。
在感染恢复期，PP65转为阴性或明显下降。
结论PP65抗原检测是诊断活动性CMV感染的快速、敏感、特异的有效方法，量化结果有助于监测病情，评价感染状态。
【关键词】巨细胞病毒 PP65抗原荧光定量PCR IgM抗体人巨细胞病毒（CMV）在人群中感染非常普遍，是小婴儿及免疫功能低下者较常见和严重的病原体之一。
在感染早期进行特异性的抗病毒治疗能够有效提高治愈率，减少并发症及死亡率。
大多数情况下CMV在临床上呈不显性或潜伏性感染，病毒可持续存在或终生在机体某些组织或器官中潜伏，此时病毒与机体处于相对平衡状态，一旦平衡被破坏，则可导致病毒复制被激活，病毒由不显性或潜伏感染转为显性或活动性感染。
巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达及临床意义
㊃论著㊃通信作者:杨立娜,E m a i l :l i n d a y o n y2014@h o t m a i l .c o m 巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 表达及临床意义杨立娜(辽阳市第三人民医院检验科,辽宁辽阳111000) 摘 要:目的 探讨感染巨细胞病毒(C MV )感染性肺炎的儿童体内中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 的表达及诊断价值㊂方法 收集2014年11月至2016年10月在我院收治的C MV 感染性肺炎儿童113例,年龄2~4岁,其中男80例,女33例,通过C MV -p p 65抗原检测将C MV 肺炎的儿童分为C MV 肺炎高活动性感染组㊁C MV 肺炎活动性感染组和非C MV 肺炎感染阴性对照组,同时选取我院门诊体检健康同年龄段儿童男21例㊁女12例作为健康对照组㊂采用流式细胞仪分别检测上述各组的中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 表达比例㊂计算C D 11b 在诊断儿童C MV 肺炎过程中的受试者工作曲线(R O C 曲线)㊂结果 C MV 肺炎高活动性感染的儿童中性粒细胞表达C D 11b 的比例与非C MV 肺炎感染阴性对照组和健康对照组比较差异有统计学意义(P <0.05)㊂C D 11b 诊断儿童C MV 肺炎高活动性感染组的最佳临界值为表达率40.11%,敏感度为100%,特异度为63.19%,受试者工作曲线下面积为0.612;C D 11b 诊断儿童C MV 肺炎活动性感染组的最佳临界值为表达率63.87%,敏感度为92.87%,特异度为98.34%,受试者工作曲线下面积为0.991㊂结论 儿童C MV 肺炎感染后中性粒细胞C D 11b 表达下调,可以作为鉴别诊断儿童C MV 肺炎活动性感染的实验室依据㊂关键词:肺炎,病毒性;巨细胞病毒;细胞活素类;流式细胞术中图分类号:R 563.1 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2017)08-0703-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2017.08.014E x p r e s s i o na n d s i g n i f i c a n c e o f n e u t r o ph i l s u r f a c e a d h e s i o nm o l e c u l e s C D 11b f r o mc y t o m e ga l o v i r u s i n f e c t i o n i n c h i l d r e n Y a n g Li n a D e p a r t m e n t o f L a b o r a t o r y ,t h eT h i r dP e o p l e sH o s p i t a l o f L i a o y a n g ,L i a o y a n g 111010,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Y a n g L i n a ,E m a i l :l i n d a y o n y2014@h o t m a i l .c o m A B S T R A C T :O b j e c t i v e T os t u d y d i a g n o s i sa n dc l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fn e u t r o p h i ls u r f a c ea d h e s i o n m o l e c u l e s i n c l u d i n g C D 11bf r o m c y t o m e g a l o v i r u s (C MV )i n f e c t i o n p n e u m o n i ai nc h i l d r e n .M e t h o d s B l o o ds a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m113c h i l d r e no fC MVi n f e c t i o n p n e u m o n i a i n c l u d i n g ma l e80a n df e m a l e40c a s e sb e t w e e n N o v e m b e r 2014a n dOc t o b e r 2016.H e a l t h y m a l e 21c a s e s a nd fe m a l e 12c a s e s s e r v e d a s h e a l t h y c o n t r o l g r o u pf r o mo u t pa t i e n t s i n t h es a m e p e r i o d .C h i l d r e no fC MVi n f e c t i o n p n e u m o n i a w e r ed i v i d e di n t oh i g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p ,C MV i n f e c t i o n g r o u p a n dt h en e g a t i v ec o n t r o l g r o u p ,a n dh e a l t h yg r o u p a sn o r m a l c o n t r o l g r o u p a c c o r d i n g t oC MV -p p65a n t i g e nd e t e c t i o n .N e u t r o p h i ls u r f a c e a d h e s i o n m o l e c u l e C D 11b w a s a n a l y z e d b y f l o w c y t o m e t r y a n d c o m pa r e d r e s p e c t i v e l y .R O Cc u r v e o f C D 11b i nc h i ld re n of C MV i n f e c t i o n p n e u m o n i aw a sm a d e .R e s u l t s T h e e x p r e s s i o n r a t i o o f C D 11b i nh ig ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p w a ss i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n ta sc o m p a r e d w i t hn e g a t i v ec o n t r o l g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p (P <0.05);o p t i m a l c u t -o f fv a l u eo fC D 11bi nhi g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p w a s40.11%,t h e s e n s i t i v i t y w a s 100%,t h e s p e c i f i c i t y i nh i g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p wa s63.19%,a n dt h ea r e au n d e r t h eR O C w a s 0.612.T h e o p t i m a l c u t -o f f v a l u eo fC D 11b i nC MVi n f ec t i o n g r o u p w a s63.87%,t h es e n s i t i v i t y o fC D 11bw a s 92.87%,t h e s p e c i f i c i t y o fC D 11bw a s98.34%,a n dt h ea r e au nde ro fR O Co fC D 11bw a s0.991.C o n c l u s i o n T h e n e u t r o p h i l sC D 11be x p r e s s i o n i nc h i l d r e no fC MVi nf e c t i o n p n e u m o n i a i sd o w nr eg u l a t i o n .C D 11be x pr e s s i o nc a nb e u s e da s a l a b o r a t o r y d i a gn o s i sb a s i s o f c h i l d r e n sC MVi n f e c t i o n .K E Y W O R D S :p n e u m o n i a ,v i r a l ;c y t o m e g a l o v i r u s ;c y t o k i n e s ;f l o wc y t o m e t r y人巨细胞病毒(h u m a n c y t o m e ga l o v i r u s ,H C MV )是具有双螺旋结构的D N A 病毒,属于疱疹病毒科中的β亚科,在疱疹病毒家族中,其基因结构最为复杂,且碱基的长度也最长[1]㊂巨细胞病毒(C MV )属于条件致病病毒,在健康人体内,C MV 虽然可以检测出阳性抗体,由于健康人免疫系统的监视作用,能够有效地防止C MV 活动性感染的发生㊂但是,在免疫力低下的人群体内,则容易发生C MV 活动性感染,目前报道的容易发生C MV 活动性感染的主要人群为婴幼儿和长期服用免疫抑制剂的患者㊃307㊃‘临床荟萃“ 2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s ,A u gu s t 5,2017,V o l 32,N o .8Copyright ©博看网. All Rights Reserved.如移植术后的患者和因疾病需要大量服用激素的患者等[2-5]㊂C MV具有组织和细胞的泛嗜性,因此临床表现也不一,可以累及泌尿生殖系统㊁中枢神经系统㊁肝脏㊁肺㊁血液循环系统等病变,其中以巨细胞病毒性肺炎最为常见[6-7]㊂我国属于C MV病毒感染的高发区域,有研究显示在我国通过C MVI g G抗体检测方法检测健康人群,其C MV的阳性感染率高达70%~100%,而孕妇C MV的感染率更是高达95%以上,对于周岁儿童C MV的阳性率约为80%[8-9]㊂由于儿童免疫系统尚处于发育期,其免疫功能有待完善,因此儿童C MV肺炎的发生比例较高,有研究报道,2~6岁C MV抗体检测阳性的儿童罹患C MV 肺炎比例可达13%[10]㊂如果儿童C MV肺炎活动性感染不能得到有的救治则病程发展迅速,病情凶险,严重者可能危及生命,因此在临床上早期发现并明确诊断C MV感染对于治疗该病具有重要的意义㊂1资料与方法1.1研究对象2014年11月至2016年10月在我院收治的儿童C MV肺炎感染者113例,其中男80例,女33例,年龄2~4岁,平均(3.3ʃ0.2)岁;同时选取我院门诊体检健康同龄儿童33例,男21例,女12例,作为健康对照组,本研究经我院伦理学委员会批准,选择研究纳入人群均获得其儿童监护人的同意并签署知情同意书㊂1.2试剂及检测方法 C MV-p p65抗原检测:采用酶联免疫吸附测定法(E L I S A)定性检测,采用C MV B r i t e T M T u r b oK i t试剂盒(荷兰I Q公司),将儿童的血液在肝素抗凝后采用密度梯度离心法分离白细胞,并调整白细胞的密度为2ˑ106/m l,将调整好的白细胞液滴入载玻片内并使用试剂盒中的固定液和打孔剂分别处理白细胞,将p p65的一抗在湿盒中孵育6小时后,取出在避光条件下使用高倍镜下镜检㊂C D11b检测:C D11b购买于美国B D公司,使用破膜固定液将白细胞分离后,使用磷酸盐缓冲溶液(P B S)将白细胞密度调整为5ˑ106/m l细胞悬液,取出195μl,并加入5μlC D11b流式抗体,避光保存20分钟后,采用流式细胞仪检测㊂1.3 C MV活动性感染诊断标准儿童外周血中C MV-p p65抗原检测阳性,C MV-p p65抗原检验阳性细胞>100个/5ˑ104白细胞为高活动性C MV感染,C MV-p p65抗原检验阳性细胞<100个/5ˑ104白细胞诊断为C MV活动性感染㊂儿童C MV肺炎的诊断标准参照1998年由中华医学会儿科分会制定的‘C MV感染诊断方案“[11]:①从儿童受检的血㊁尿㊁唾液或组织等任何一种中分离出C MV;②用特异的单克隆抗体从受检的组织或细胞中检测到C MV抗原如早期速发抗原(I E A)㊁热病抗原(F A)或p p65等;③从外周血白细胞中查得C MV抗原(以上3项中有任何一项阳性时,不仅可以诊断C MV感染,并能诊断为产毒性感染);④用分子杂交或P C R法从受检材料中检出C MV-m R N A,表明产毒性感染,如检出C MV-D N A特异片段,只能表明C MV感染,不能区分为产毒性或潜伏性感染㊂1.4统计学方法使用G r a p h p a dP r i s m5软件完成,符合正态分布的定量资料用均数ʃ标准差(x-ʃs)表示㊂符合正态分布方差齐的计量资料组间比较采用方差检验㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1 C MV-p p65抗原检测结果根据C MV-p p65抗原检测结果,将儿童分为C MV高活动性感染组㊁C MV活动性感染组和非C MV感染阴性对照组㊂其中儿童C MV高活动性感染组20例,占试验组儿童总数的17.7%,C MV活动性感染组48例,占试验组儿童总数的42.48%,阴性对照组45例,占试验组儿童总数的39.82%㊂2.2 C D11b在中性粒细胞表达经过流式C D11b 抗体标记后,儿童C MV肺炎高活动性感染儿童体内中性粒细胞可以检测C D11b表达的比例占中性粒细胞总数的(38.17ʃ5.22)%,与C MV活动性感染组(49.23ʃ4.22)%㊁阴性对照组(61.56ʃ4.37)%和健康对照组(63.34ʃ5.27)%比较差异有统计学意义(P<0.05)(图1)㊂C D11b诊断儿童C MV高活动性感染的最佳临界值为表达率40.11%,敏感度为100%,特异度为63.19%,受试者工作曲线下面积为0.612;C D11b诊断儿童C MV活动性感染的最佳临界值为表达率63.87%,敏感度为92.87%,特异度为98.34%,受试者工作曲线下面积为0.991(图2)㊂与健康对照组比较,**P<0.01;与非C MV感染阴性对照组比较,##P<0.01图1各组中C D11b在中性粒细胞表面的表达㊃407㊃‘临床荟萃“2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2017,V o l32,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.图2C D11b诊断儿童C M V高活动性感染和C M V活动性感染的R O C曲线3讨论婴幼儿由于免疫力低下容易诱发丙型肝炎病毒㊁柯萨奇B病毒㊁风疹病毒㊁流行性腮腺炎病毒㊁轮状病毒和C MV等病毒感染[12]㊂而C MV是已知的病原微生物中最容易引起婴幼儿急㊁慢性感染的病毒之一,而且C MV具有潜伏-活化的生物学特征,有研究显示1周岁儿童C MV抗原的阳性检出率高达80%,一旦儿童的免疫功能低下,C MV就可以直接诱发C MV的活化并最终导致C MV活动性感染,其临床表现以儿童C MV肺炎最为常见[10]㊂儿童C MV肺炎的病理改变主要集中在细支气管,可以出现细支气管周围炎,临床表现则与间质性肺炎相似,主要表现为发热㊁咳嗽并伴有肺哮鸣音,严重者可以出现呼吸困难㊂在早期由于缺乏特异性的检测指标,因此极易引起误诊,造成病情延误[13-14]㊂同时, C MV具有泛嗜性的特点,特别是在免疫力低下的患者中,C MV感染可以引起多个器官的病变,而且临床表现往往不典型,临床上鉴别诊断C MV感染十分困难㊂如果长时间不能得到有效的救治,还可以并发儿童免疫功能的损伤,严重危害儿童的身体健康㊂因此,临床上应对儿童C MV性肺炎引起高度重视,及时完善相关检查,做好鉴别诊断并采用适当治疗方案,实现抢先治疗,以改善儿童病情及预后,提高儿童生存质量㊂白细胞黏附分子是介导细胞之间的相互接触和结合分子的统称,其主要是存在于细胞表面或者细胞基质中的糖蛋白,发挥作用形式是通过受体与配体的相结合介导细胞间的信号传导㊂当受体与配体结合后,细胞之间㊁细胞与周围的基质间和细胞-基质-细胞之间的相互黏附,参与了细胞信号的整个转导与活化的过程㊂在中性粒细胞表面有多种黏附分子,其中包括整合素家族㊁选择素家族㊁黏蛋白样家族㊁免疫球蛋白超家族和钙粘素家族[15]㊂其中整合素是一种能够介导细胞与其周围环境之间的连接的跨膜受体㊂在细胞间信号转导过程中,整合素可以将细胞外基质的信号等有关信息传入细胞,同时也可以由细胞内向细胞外传递信号㊂整合素是由α(120000~185000)和β(90000~110000)两个亚单位形成的异二聚体[16]㊂C D11b是整合素家族中β2亚族的中的一员,相对分子质量约为160000,基因位点在16号染色体短臂p11~p13.1,单核巨噬细胞和自然杀伤(N K)细胞表面均可以表达,成熟的中性粒细胞表面C D11b处于非活化状态,在在体内的其他细胞中仅有低水平表达㊂C D11b的活化与多种因素有关,其中包括补体片段㊁一些趋化因子和细菌代谢的内毒素和脂多糖等,当白细胞与上述小分子接触后在数分钟内就可以高表达C D11b,因此C D11b的上调被认为是炎症相关的早期标志物之一㊂因此,C D11b的上调被认为是中性粒细胞被激活的标志㊂有研究报道,新生儿在重症肺炎的早期就有中性粒细胞表面C D11b高表达,且随着病情好转C D11b表达逐渐降低[17]㊂这一过程提示C D11b 在重症肺炎早期就可发生变化㊂儿童发生C MV病毒感染时,病毒的代谢产物可以引起机体内肿瘤坏死因子α等炎症趋化因子的高表达,这些炎症因子则可以诱发早期中性粒细胞表面黏附分子C D11b的变化[18]㊂但是,这个过程在体内存在时间很短,如果当诱发因素没有得到有效控制,C D11b上调的现象会随着时间而下降,这一过程可能与中性粒细胞转变为脓细胞而失去生物学活性有关㊂由于儿童C MV感染型肺炎的特点为隐匿性发病,早期的临床症状不典型,不易被察觉,因此儿童C MV感染性肺炎在早期往往不能被及时发现,出现临床症状后,感染程度加重,C D11b的表达下调㊂C D11b诊断儿童C MV肺炎活动性感染的R O C曲线下面积为0.991,具有较好的诊断价值,特异度可达98.34%,即出现C MV活动性感染后中性粒细胞表面C D11b表达明显降低,对鉴别诊断C MV活动性感染具有重要价值;而诊断C MV高活动感染R O C曲线下面积为仅0.612,诊断价值不如C MV活动性感染高,但敏感度仍较高可达100%㊂综上所述,儿童C MV感染性肺炎外周血中性粒㊃507㊃‘临床荟萃“2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2017,V o l32,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.细胞表面C D11b表达下调这一现象对C MV活动感染的诊断有重要意义㊂配合中性粒细胞表面C D11b 指标可以有效地提高C MV感染的检出率,使儿童在早期能够得到有效地诊治,实现 抢先治疗 ㊂参考文献:[1]董妞妞,徐锦.巨细胞病毒包膜糖蛋白B㊁H㊁N及其基因型的研究进展[J].检验医学,2016,31(3):159-162. [2]宋华,张书红,徐晓华,等.婴幼儿巨细胞病毒感染的临床特点[J].临床荟萃,2008,23(20):1472-1473.[3]沈一燚,刘志峰.巨细胞病毒感染与脂质代谢相关性研究进展[J].临床儿科杂志,2015,33(5):494-497.[4]汪生,刘丹波,郑晓丽,等.不同方式的造血干细胞移植术后巨细胞病毒感染的临床分析[J].中国实验血液学杂志,2015, 23(5):1438-1444.[5] A z e v e d oL S,P i e r r o t t i L C,A b d a l aE,e t a l.C y t o m e g a l o v i r u si n f e c t i o n i nt r a n s p l a n tr e c i p i e n t s[J].C l i n i c s,2015,70(7):515-523.[6]吴春涛,刘苏,佟艳会,等.先天性心脏病患者中弓形虫㊁风疹病毒㊁巨细胞病毒基因的定量检测[J].临床荟萃,2009,24(1):49-50.[7]彭芬,沈昌桃,吴华莉,等.新生儿巨细胞病毒感染的临床特征分析[J].中华医院感染学杂志,2015(18):4257-4259.[8]胡云,甘忠芳.新生儿巨细胞病毒感染的危险因素分析及干预对策[J].中国地方病防治杂志,2014,(S1):241-241. 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【doc】检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较
检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较278临床检验杂志2004年第22卷第4期ChineseJournal.fClinicalhb.rat.ryscience, 2004,v.1.22,N..4文章编号:1001—764X(2004}04-0278-02中图分类号:R446.6文献标识码:A?实验研究?检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较赵缜.,孙洪斌,彭奕冰,季育华(1.上海瑞金医院集团闵行医院检验科,上海201100;2.上海瑞金医院检验科)摘要:目的比较血pp65抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒(CMV)活动性感染的诊断价值.方法收集58位移植患者的血标本(共208份),分离血浆和多形核白细胞,血浆用于CMVIgM抗体检测(ELISA),白细胞用于pp65抗原血症检测(荧光免疫组化).同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析,检测CMVDNA.结果pp65抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关(r:0.87),也与病人的临床症状密切相关,可用于监测移植患者CMV的活动性感染.IgM抗体与pp65抗原阳性的一致率为21.2%,对CMV感染的敏感性为22.3%,特异性为95.6%.结论pp65抗原阳性细胞数能反映CMV的数量,可监测CMV活动性感染,检测方法特异,灵敏,操作简单,适宜临床实验室应用.血清IgM抗体检测因为敏感性较低,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测.关键词:巨细胞病毒;pp65抗原血症;IgM抗体:荧光定量PCR巨细胞病毒(CMV)在移植患者中的感染是广泛的,而且其活动性感染已成为患者死亡的重要原因之一.早期快速监测,采取适当治疗至关重要Ll.pp65抗原检测是国际公认的监测CMV活动性感染的"标准方法"之一L2.但是,目前我国仍然以检测血清CMVIgM抗体为主L4].本文对2种方法进行了比较,报告如下.1材料和方法1.1研究对象为上海市瑞金医院,儿童医学中心,儿科医院和苏州医学院附属医院的移植患者共58例,包括31例肾移植患者,20例骨髓移植患者和7例肝移植患者.1.2标本收集在知情同意的情况下,采集被检者静脉血3ml,EDTA抗凝.共208份.6h内分离血浆,然后用6%多聚甲醛溶液分离外周血多形核白细胞.血浆一部分用于CMVIgM抗体检测,其余冻存;取白细胞悬液涂片,2×10细胞/片,自然晾干, 4%中性多聚甲醛固定.1.3检测方法1.3.1pp65抗原检测用荧光免疫组化法,检测人外周血多形核白细胞中的pp65抗原.第一抗体为鼠抗CMVpp65单克隆抗体混合物(C10/C11),第二抗体为FITC标记的羊抗鼠IgG.检测试剂盒为CMVBrite(荷兰IQ公司),按说明书操作.荧光显微镜下观察结果,全片pp65抗原阳性细胞数≥5 个为阳性.1.3.2血浆CMVIgM抗体检测用ELISA(美国BiocheckInc公司),按说明书操作.1.3.3血浆CMVDNA检测从208份血浆标本中随机抽取50份,用CMVDNA荧光定量PCR检测试剂盒检测(匹基公司),按说明书操作.检测系统为LightCycler荧光定量PCR仪(罗氏公司).PCR结果≥10/ml拷贝为阳性.2结果2.1pp65抗原与CMVDNA检测结果的比较随机抽取50份血浆标本,用荧光定量PCR检测CMVDNA,并与pp65抗原检测结果比较.结果CMVDNA阳性14份,pp65抗原阳性15份,二者均阳性11份.两种方法检测结果的一致率为88%,同一份标本的DNA拷贝数与pp65阳性细胞数有很好的相关性(r=0.87,资料略).2.2pp65抗原与血清IgM抗体检测结果的比较208份血液标本中,pp65抗原阳性94份,IgM抗体阳性26份,二者均阳性21份.两种检测方法的阳性一致率为21.2%,以pp65抗原阳性为标准,IgM抗体法的敏感性为22.3%,特异性为95.6%.在94份pp65抗原阳性标本中,临床症状期采集的标本pp65阳性细胞数明显高于无临床症状期标本(前者平均为97个/片,后者平均为23个/片).IgM抗体是否阳性与临床症状无明显相关性.2.3在58例移植患者中,有36例于移植后出现pp65抗原阳性,平均持续36d,其中29例血清IgM作者简介:赵缜,1972年生,男,硕士,检验医师,主要从事病毒的免疫学研究.临床检验杂志2004年第22卷第4期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience,2004,V o1.22.No.4279抗体始终保持阴性,7例血清IgM抗体阳性,其中2例pp65抗原血症早于IgM出现(1例为50d,另1例为41d),1例在治疗后pp65转阴性,但IgM仍持续阳性超过3个月,而无临床症状;另有2例血清IgM抗体阳性,但pp65抗原血症阴性,其中1例出现相关临床症状,1例无相关临床症状.3讨论pp65抗原是CMV复制早期产生的被膜蛋白,位于衣壳与包膜之间.当CMV活动性感染时,一个显着的标志是外周血多形核细胞中呈现大量pp65蛋白j.随着研究的深入,pp65抗原检测已渐渐成为诊断CMV活动性感染的"标准方法"之一,并用于药物的疗效观察和病人的预后监督.我们对58例移植病人分析发现,pp65抗原的出现明显早于临床症状,而且pp65阳性细胞数与患者临床疾病的严重性明显相关,它对CMV活动感染的监测具有高度的敏感性和特异性.此法优于IgM抗体的测定,敏感性和特异性都较高,适于临床实验室应用.参考文献:[1]赵缜,季育华.移植病人中HCMV激活感染标志的研究进展[J].国外医学?病毒学分册,2001,8(4):180—182.[2]HornefMW,HacksteinH,KirchnerH,eta1.Significanceof cytoplasmicstaininginthecytomegaloviruspp65antigentest[J].Eur JClinMicrobiolInfectDis,1999,18(1):66-68.[3]SinghN,PatersonDL,GayowskiT,eta1.Cytomegalovirus antigenemiadirectedpre—eruptiveprophylaxiswithoralversusI.V. ganciclovirforthepreventionofcytomegalovirusdiseaseinliver transplantrecipients:arandomizedcontrolledtrial[J].Transplantation,2000,70(5):717-722.[4]夏吉荣,王富兰,祝继英.人巨细胞病毒活动性感染的分析[J].重庆医科大学,2003,28(2):195—197.[5]SiaIG,Pate1R.Newstrategiesforpreventionandtherapyof cytomegalovirusinfectionanddiseaseinsolid—organtransplantrecipients[J].ClinMicrobiolRev,2000,13(1):83—121. Monitoringofactivecytomegalovirusinfectionintransplantpatients:comparisonofpp65antigenemiatestandCMV?specificIgMassayZHAOZhen,SUNHongbin,PENGYibing,eta1.(DepartmentofLaboratoryMedicine,Min hangHospital,RuijinHospitalCompany,ShanghaiSecondMedicalUniversity,Shanghai201100,China.)Abstract:ObjectiveTocomparethediagnosticefficacyofthepp65antigenemiatestandtheC MV—specificIgMassayinmonitoring activeCMVinfectionoftransplantpatients.MethodsInthisstudy208bloodsemplesfrom58t ransplantpatientswerecollectedanddetectedbythesetwomethods.Andthenwecarriedaprospective,parallelandblindstudyonp artofthesesamplesinordertocomparethepp65antigenemiatestwithafluorescentquantitativePCRassay.Results1.Thenumberof CMV antigen—positivecellsbythepp65 antigenemiatestandthelevelofCMVDNAbythequantitativePCRhavegoodcorrelation(r= 0.87).2.ThepositiveagreementrateofIgMassayinplasmaandCMVpp65antigenemiaassaywas21.2%.ForpredictionofactiveC MVinfection.thesensitivityand specificityofIgMassayincomparisonwithpp65antigernemiatest.were22.3%and95.6%re spectively.ConclusionThepp65 antigenemiaassaycouldreflectthelevelofCMV andpredictactiveCMVinfectionintranspla ntpatients.TheCMV—specificIgMassay hadmoderatespecificitybutoftengavelatepositiveresultsandwasnotsensitiveenoughforus easpredictiontoolsfortransplantpatients.Keywords:eytomegalovirus;pp65antigenemia;lgMantibody;fluorescentquantitativePC R(收稿日期:2003.11-15,修回日期:2004-02-02)(本文编辑:杨林)(上接第277页)参考文献:[1]BizzaroN,BrandaliseM.EDTA—dependentpseud0thmmb0cytopenia. Associationwithantiplateletandantiphospholipidantibodies[J].AmJClinPathol,1995,103(1):103—107.[2]MoriM,KudoH.TransientEDTA—dependentpseudothrombocytopenia inapatientwithsepsis[J].IntensiveCareMed,2000,26(2):218—220,[3]WilkesNJ,SmithNA,MallettSV.Anticoagulant—induced inapatientpresentingforcoronaryarterybypassgrafting[J].BrJAnaesth,2000,84(5):640舭2.[4]SaneDC,DamarajuLV.Occurrenceandclinicalsignificanceof pseudothrombocytopeniaduringabeiximabtherapy[J].JAmColl Cardiol,2000,36(1):75-83.[5]AhnHL,JoYI.EDTA—dependentpseudothrombocytopenia confirmedbysupplementationofkanamycin;acasereport[J]. KoreanJInternMed,2002,17(1):65-68.[6]MatarazzoM,ContursoV.EDTA—dependentpseudothrombocytopenia inacaseoflivercirrhosis[J].PanminervaMed,2000,42(2):155?157.[7]DeCaterinaM,FratellanzaG.EvidenceofacoldimmunoglobulinM autoantibodyagainst78一kDplateletglycoproteininacaseofEDTA—dependentpseudothrombocytopenia[J].AmJClinPathol,1993,99 (2):163—167.(收稿日期:2003-02—16,修回日期:2004-02-25)(本文编辑:陈军)。
HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值
中国现代医药杂志2018年5月第20卷第5期 MMJC，May 2018，Vol 20，No.579DOI ：10.3969/j.issn.1672-9463.2018.05.023HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值于锰锰 李小芹作者单位：450000 河南郑州，郑州大学附属儿童医院消化内科人巨细胞病毒（HCMV ）感染为儿科常见病、多发病，属于疱疹病毒科β属，是一种具有潜伏性的双链DNA 病毒，当免疫功能发育不全或者减弱后，HCMV 原发性或者潜伏-再激活感染就会使患者表现出黄疸、肝脾肿大、咳嗽、发热及贫血等临床症状，因上述临床症状不具备特异性，因此对患者开展早期HCMV 感染活性诊断意义重大。
有文献指出，HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染中有明显价值[1]。
现选择2014年7月~2017年7月在我院就诊的疑似HCMV 感染患儿为研究对象，探讨HCMV-PP65抗原检测对其诊断价值，报道如下。
1 材料与方法1.1一般资料 选择2014年7月~2017年7月于我院就诊的疑似HCMV感染患儿为研究对象，共200例。
男116例，女84例。
年龄2.5月~5.14岁。
按照卫计委颁布的关于HCMV 感染诊断方案，最终确诊为感染者共计104例。
排除其余类型感染。
分别使用HCMV-PP65抗原检验、化学发光法、FQ-RCR 法对200例患儿进行检测。
1.2设备与试剂 化学发光仪，荧光定量PCR 仪，荧光显微镜。
HCMV-PP65抗原检验试剂盒，DNA 提取试剂盒，化学发光免疫分析试剂盒，FQ-PCR 检验试剂盒。
1.3样本收集及检测 在患儿监护人知情同意前提下，收集受试者空腹静脉血5.0ml 进行检验，均分为2份。
其中1份进行3.0ml ED-TA-K2抗凝，开展PP65检测。
样本收集完成后6h 内对PMNLs 细胞进行分离。
另取1份2.0ml 促凝，以3 000r/min 离心，分离血清和血浆。
肾移植围手术期检测CMV-PP65抗原的意义
０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
ｔｏ
Ｉｎ
ｋｉｄｎｅｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｐｅｒｉｏｅｒａｔｉｖｅ ｐｅｒｉｏｄ，ｔｈｅ ＣＭＶ－ＰＰ６５
ａｎｔｉｇｅｎ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ
ｔｏ
ｔｈｅ ｅａｒｌｙ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｏｆ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
１．２．２
ＣＭＶ病患者（ｎ＝３１）
３ｌ ＣＭＶ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｏ
ＣＭＶ—ＰＰ６５抗原检测：采用免疫组织化学的
催化信号扩增法检测人血白细胞ＣＭＶ感染情况，并 统计ＣＭＶ抗原阳性的白细胞个数。阳性诊断标准 为阳性细胞＞５个／２×１０５个白细胞口Ｊ。每周检测 １次，跟踪检测１５周。 １．３观察指标根据阳性诊断标准统计两种检测 方法每次检测所得的阳性患者例数及首次出现阳性 结果的时间。追踪检测１５周后统计全部患者中 ＣＭＶ感染及ＣＭＶ病的发病例数。 １．４统计学方法采用ＳＰＳＳ １６．５软件对两组所 得的数据进行统计分析，一般资料用均数±标准差 （孟±ｓ）的形式表示，计量资料采用ｔ检验，计数资料 比较采用Ｘ２检验，Ｐ＜０．０５显示差异有统计学 意义。
２０１０，２８：２６３－２６５．
见，ＣＭＶ．ＰＰ６５抗原检测法检测ＣＭＶ病的敏感性为 １００％，明显高于抗ＣＭＶ—ＩｇＭ抗体检测法的 ５８．１％，两者比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 两种检测方法的特异性分别为７５．４％和７６．８％，两 者比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
２．２
出现阳性结果的平均时间４８例ＣＭＶ－ＰＰ６５
ＵＳ．
器官移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗规范（2019 版）
第１０卷 第２期２０１９年３月Ｖｏｌ． １０ Ｎｏ． ２Ｍａｒ． ２０１９器官移植Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ【摘要】 为了进一步规范中国实体器官移植（SOT ）受者巨细胞病毒（CMV ）感染的诊断和治疗，中华医学会器官移植学分会组织器官移植专家、感染病学专家及呼吸内科专家，在《实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南（2017版）》的基础上，从CMV 感染的主要危险因素、实验室诊断、临床类型、预防方案，CMV 病的治疗，儿童SOT 术后CMV 感染或CMV 病的防治，CMV 肺炎合并伊氏肺孢子菌肺炎的防治等方面，制订本规范，以期为我国SOT 术后CMV 感染的规范化防治提供指导意见。
【关键词】 器官移植；巨细胞病毒；感染；巨细胞病毒病；巨细胞病毒肺炎；伊氏肺孢子菌肺炎；更昔洛韦【中图分类号】R617，R373 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445（2019）02-0005-07器官移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗规范（2019版）中华医学会器官移植学分会DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2019.02.005基金项目：国家自然科学基金（81570680、81571555）执笔作者单位：100039 北京，中国人民解放军总医院第八医学中心器官移植研究所（石炳毅、肖漓）通信作者：石炳毅，Email ：********************由于免疫抑制剂的大量且长期应用，实体器官移植（solid organ transplant, SOT ）受者各种病原体感染的机会显著增加。
病毒感染中，以巨细胞病毒（cytomegalovirus, CMV ）感染最常见。
CMV 是一类常见的疱疹病毒，在人类血清中的阳性率为30%～97%[1]。
免疫功能正常人群感染CMV 后，通常表现为短时间的发热或无症状，此后CMV 会在多种细胞中呈终生潜伏状态，成为再次活化的储存，携带者成为易感人群[2]。
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点—、前言巨细胞病毒（CMV ）感染是实体器官移植（SOT ）术后最为常见的病毒感染，临床表现多样。
未采取预防措施的SOT受者CMV感染率较高，在不同移植类型和不同患者人群中也存在明显差异。
CM V侵入人体成为CMV 感染，可为静止性感染或活动性感染。
CMV侵袭肺、肝脏、胃肠道、肾上腺、中枢神经系统以及骨髓等多种器官组织并引起相应临床症状,称为CMV病。
CMV感染可对移植受者造成多方面损害，包括移植物功能丧失、受者死亡或医疗成本増加。
CMV感染与移植物急性排斥反应互有促进作用；并可增加或加重移植受者各种机会性感染，如CMV肺炎。
二SOT受者CMV感染的主要危险因素（一）供、受者血清CM V状况接受血清CMV阳性供者的器官移植的CMV阴性受者（供者阳性/受者阴性，D+/R-）应视为CMV感染极高风险人群。
相对而言，D-/R-移植受者CMV感染的发生率最低（＜5%\（二）移植器官的种类CMV感染风险与移植器官的种类相关：肺、小肠、胰腺移植受者比肾、肝移植受者危险性更高。
（三）其他危险因素其他危险因素包括受者的免疫力低下、合并其他病毒感染、急性排斥反应、高龄和器官移植物功能不全等；供者在重症监护病房（ICU ）监护时间较长，面临多重感染的风险，移植后也可造成受者获得性感染风险增加。
推荐意见：1. 推荐所有器官移植供、受者术前均进行CMV血清学检测，参考风险分层，指导制定预防策略（I-BL2. 建议术后对受者进行CMV-IgG血清学检测（I-B）O抗CMV-IgG 阳性或抗CMV-IgG呈4倍以上增高者为高危纟吉果为临界值或不确定时, 可按阳性考虑（2-C L3. ABO血型不合器官移植、接受淋巴细胞清除性抗体治疗以及术前存在人类免疫缺陷病毒感染的受者均可视为高危患者（I-B）O三、实验室诊断推荐意见：1. CMV的早期快速诊断,推荐外周血及尿液的CMV DNA核酸定量(QNAT )检测，或间接免疫荧光法(IFA )外周血白细胞的CMV-PP65抗原检测(I-A)t> CMV DNA病毒载量> 103拷贝/ml为病毒复制阳性，CMV-PP65抗原一个以上细胞阳性即可报告阳性。
CMV_PP65抗原检测及临床意义-文档资料
• CMV是导致胎儿先天性感染的最常见的病原体， 占约整个出生新生儿的0.5-2.5%。
• 分娩时胎儿通过产道可感染CMV，但该感染不 遗留后遗症。
• CMV产后感染大多数发生在婴幼儿及童年时期， 通常是无症状，感染途径大多是与CMV排毒者 的密切接触，如各种体液如唾液、尿液、乳汁、 泪液、血液、生殖道分泌物等。少数可通过输 血及器官移植感染。
• 分离白细胞(EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml) • 细胞计数即浓度调整，3.0106/ml • 细胞离心涂片及固定。 • 染色，IIF法，第一抗体是抗CMVpp65单抗，
第二抗体是羊抗鼠免疫球蛋白荧光抗体。 • 读片及结果判断
CMVPP65阳性
CMV PP65阳性意义
• CMV活动性感染，并可在出现临床症状 前检测到。
• 做为疗效观察的指标。
CMV PP65阳性治疗
• 更昔洛韦，ganciclovir
标本的采集
• EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml(白细胞过 低患者，如 200个/mm3，需要采集5－ 10ml抗凝的静脉血。
• 时间：周1或周4送标本(检验科病毒室， 新楼3段2层)。
CMV感染的最重要的形式
•滋病、
肿瘤化疗患者(尤其是白血病和淋巴瘤)以 及器官移植受者。
巨细胞病毒抗原血症(CMVpp65)检测的操 作步骤(CMV BriteKit，MCA Development, The Netherlands)
• 基本原理是检测分子量65KD的基质磷蛋白 (pp65)，该蛋白位于外周血白细胞的核仁内。
关于测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值
关于测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值【摘要】目的以快速、简便的人巨细胞病毒特异性抗体亲和指数(CMV-IgG AI)检测方法作为有效的诊断工具，用于区分孕妇CMV原发感染与非原发感染。
方法以标准的间接ELISA方法，8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂，用标准曲线方法定量测定标本中的CMV-IgG含量。
结果共检测218例标本，其中187例为CMV既往感染标本，31例为继发或再感染、可疑原发感染和原发感染标本。
以抗体亲和指数<35.0 %作为阳性判断标准，此时方法的灵敏度为75.0 %，特异度为91.4 %，可用度为67.2 %。
既往感染、继发或再感染、可疑原发感染、原发感染4组的平均AI值分别是(61.42±25.69) %，(70.38±21.88) %，(66.73±23.62) %，(29.78±25.93) %，原发感染组与其它3组非原发感染比较，差异有统计学意义(P<0.01))。
结论以8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂，用标准曲线方法定量测定标本中CMV-IgG含量适用于检测巨细胞病毒IgG抗体亲和指数(CMV-IgG AI)，认为CMV-IgM联合CMV-IgG AI检测是区分原发与非原发感染的血清学方法之一。
【关键词】巨细胞病毒;亲和指数;IgG抗体;原发感染;酶联免疫吸附试验【Abstract】 Objective To establish a rapid， easy and simple method for determination of CMV-IgG AI to serve as effective diagnostic tool to distinguish primary CMV infection from non-primary infection in pregnant women. Methods The measurement of CMV-IgG AI is accomplished by standard indirect ELISA method using 8 mol/L urea as a mild protein denaturing agent and the amount of CMV-IgG in the specimen was measured quantitatively using a standard curve method. Results Of the 218 samples， 187 were from women with past CMV infection and 31 from those with secondary infection or re-infection， suspicious primary infection and primary infection. When the CMV-IgG AI less than 35.0 % was defined as positive， the sensitivity was 75.0 %， the specificity was 91.4 %，and availability was 67.2 %. The mean AI in the samples from women with past infection ， secondary infection or re-infection， suspicious primary infection and primary infection was( 61.42±25.69)%，(70.38±21.88)%，( 66.73±23.62)%，(29.78±25.93)%， respectively. There is a statistical difference between the primary and non-primary CMV infection (P<0.01). Conclusion The amount of CMV-IgG in the specimen quantitatively measured by a standard curve with 8 m urea solution as a mild protein denaturing agent， was found to be suitable for determination CMV-IgG AI. At present the combination of CMV-IgG AI and CMV-IgM assay seem to be one of the best serological tests for differentiating primary CMV infection from non-primary CMV infection.【Key words】 Cytomegalovirus; Avidity index; IgG antibody，primary infection; Enzyme-linked immunosorbent assay( ELISA)人巨细胞病毒(cytomegalovirus， CMV)是可以引发宫内感染最常见的病毒之一，对胎儿危害极大，可引发胎儿多种病变或畸形[1]，在活产儿中感染率为0.2 %～2.0 %左右，是风疹的2倍[2]。
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CMV感染的最重要的形式
• CMV先天性感染。 • 在免疫抑制患者的感染，包括艾滋病、
肿瘤化疗患者(尤其是白血病和淋巴瘤)以 及器官移植受者。
巨细胞病毒抗原血症(CMVpp65)检测的操 作步骤(CMV BriteKit，MCA Development, The Netherlands)
• 基本原理是检测分子量65KD的基质磷蛋白 (pp65)，该蛋白位于外周血白细胞的核仁内。
• 做为疗效观察的指标。
CMV PP65阳性治疗
• 更昔洛韦，ganciclovir
标本的采集
• EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml(白细胞过 低患者，如 200个/mm3，需要采集5－ 10ml抗凝的静脉血。
•自行编辑修改，仅供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢
• 分离白细胞(EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml) • 细胞计数即浓度调整，3.0106/ml • 细胞离心涂片及固定。 • 染色，IIF法，第一抗体是抗CMVpp65单抗，
第二抗体是羊抗鼠免疫球蛋白荧光抗体。 • 读片及结果判断
CMVPP65阳性
CMV PP65阳性意义
• CMV活动性感染，并可在出现临床症状 前检测到。
CMV_PP65抗原检测及临床意 义
CMV三种感染方式
• CMV是导致胎儿先天性感染的最常见的病原体， 占约整个出生新生儿的0.5-2.5%。
• 分娩时胎儿通过产道可感染CMV，但该感染不 遗留后遗症。
• CMV产后感染大多数发生在婴幼儿及童年时期， 通常是无症状，感染途径大多是与CMV排毒者 的密切接触，如各种体液如唾液、尿液、乳汁、 泪液、血液、生殖道分泌物等。少数可通过输 血及器官移植感染。