杜氏利什曼原虫及黑热病防控的研究进展

2.（前）鞭毛体 2.（ Promastigote
虫体呈梭形 大小为10 20µm 1.5～ m 10～ 大小为10～20 m×1.5～4µm 核位于虫体中部 基体发出一鞭毛，长与虫体相近， 基体发出一鞭毛，长与虫体相近，弯曲 前鞭毛体运动 活泼， 活泼，鞭毛不 停地摆动
虫体前端菊花状
白蛉 （Phlebotomus sand fly ）
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免疫诊断
分子生物学 诊断
运用分子生物学的方法诊断杜氏利什曼原 虫感染研究得较早，效果满意，有很高的 敏感性和特异性。
•补充 补充
我国黑热病特殊临床表现
皮肤型黑热病：多数为结节型。 1. 皮肤型黑热病：多数为结节型。结节呈大小不 等的肉芽肿，或呈暗色丘疹状， 等的肉芽肿，或呈暗色丘疹状，常见于面部及颈 在结节内可查到无鞭毛体。 部，在结节内可查到无鞭毛体。 淋巴结型黑热病：无黑热病病史， 2. 淋巴结型黑热病：无黑热病病史，局部淋巴结 肿大，大小不一，较表浅，无压痛，无红肿， 肿大，大小不一，较表浅，无压痛，无红肿，嗜 酸性粒细胞增多。活检可查到无鞭毛体。 酸性粒细胞增多。活检可查到无鞭毛体。
特别鸣谢
耿贯一 流行病学1996：1004~1018 薛纯良、许隆祺、高兴政 寄生虫病诊断与治疗2002:31~41 Butler D, Uaurice J, Weiner DB, et al. Vaccines: a roller-coaster of hopes［J］. Nature, 1997，386: 537～538. Xu D, Liew FY. Protection against leishmaniasis by using of DNA encoding a major surface glycoprotein of L. major ［J］. Immunol, 1995,84:173～178. Ramazeilles C et al.Proc Natl Acad Sci uSA,1994;91(17);7859-7863 Chamdhuri G .Biochem Pharmacol,1997;5393):385-391 Brown MS ＆ Goldstein JL.Nature,1990;343(6258):508-509 Rohrer L et al.Nature,1990;343;(3258):570-572 Basu SK.Biochem Pharmacol,1990;40(9):1941-1946 Mukhopadhyay A et al.Science,1989;244(4905):705-707 杨浩然，王辉，李慧
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感染性的前鞭毛体 （白蛉体内） 白蛉体内）
2 治病机理
脾肿大 脾功亢进 全血 单核单核 巨噬细 胞破裂 利 杜 体 大 量 繁 殖 增生 淋巴结肿大 肝肿大 浆细胞 免疫复合 物沉积 Ⅲ型变 态反应 肾功 受损 肝功受损
WBC 血小板 RBC Ⅱ型变态反应
抵抗力 出血 贫血
白蛋白 球蛋白 白蛋白 排出
患者淋巴结常有轻微或中度肿大 ；夜间咳 嗽；绝大多数妇女在患黑热病后月经闭止， 发育也受影响。
黑热病病人--肝脾肿大 黑热病
示脾肿大 黑热病俗称 大肚子病” “大肚子病” 12岁男孩 12岁男孩 脾肿大 贫血 严重消瘦
4 黑热病的诊断治疗即防治措施
•诊断 病原检查
用组织穿刺法自脾、骨髓、肝或淋巴结取材，穿 刺液涂片后，用瑞氏或姬氏染色，油镜下检查无 鞭毛体。上述穿刺液还可接种在培养基中，培养 后检查有无前鞭毛体生长。 酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体 试验（IFA）、间接血凝试验（IHA）等的阳性 率较高，但与其它疾病常有交叉反应，亦不宜 用于疗效考核。
体小， 约为蚊子1/3 1/3， 体小，3㎜，约为蚊子1/3， 驼背状，全身密生细毛， 驼背状，全身密生细毛，灰 黄色
鞭毛体寄生于白蛉消化 道，二分裂法繁殖
1.2 生活史 生活史(life cycle)
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转变为前鞭毛体 白蛉体内） （白蛉体内）
无鞭毛体 人或哺乳动物体内） （人或哺乳动物体内）
二分裂繁殖﹑ 二分裂繁殖﹑发育
一个世界 一个梦想 生物最精彩
研究进展
•反义核酸技术在防治黑热病中的应用进展 反义核酸技术在防治黑热病中的应用进展
利什曼原虫所有mRNA的5´端均含有一共同的由35 个核苷酸组成的小外显子(5'-ACCGCUAUAUAAGUAUCAGUUUCUGUACUUUAU UG-3')，这为AON提供了极好的作用靶位。研究表 … 明，以小外显子为靶的16 nt PS AON(5'-CTGATGCTTATATAGC-3') 杀死培养鼠巨噬细胞中无鞭毛体， 而对宿主巨噬细胞无损害。当16nt pS AON浓度为 10µmol/L时，约30％感染巨噬细胞在培养后24小时 好转。为进一步提高细胞对AON的摄入，将16nt pS AON与软脂酸连接，并与人的低密度脂蛋白(LDL)混 合，用于体外感染巨噬细胞测试……
研究进展
•利什曼原虫核酸疫苗 利什曼原虫核酸疫苗
用含编码利什曼原虫GP63基因核酸疫苗pcDNA1-GP63直 接免疫BALB/c鼠，检测到质粒在小鼠至少存在40天，抗体 免疫组化染色显示高水平表达的GP63。硕大利什曼原虫 攻击感染，发现鼠已产生高度抵抗力。利什曼原虫抗原能 诱导免疫小鼠产生高水平细胞因子，通过Th1型细胞免疫 抵抗攻击。BALB/c小鼠一般对利什曼原虫感染敏感，因为 它不能激活Th1反应，除非加入外源性的IL-12。核酸疫苗 的发生、发展时间虽不长，却已取得了许多可喜的成就。 它具备的许多优点如操作方法简便，能同时诱导机体产生 高水平保护性的体液和细胞免疫力，且安全、持效，有抗 各种病原体感染及抗肿瘤的广阔应用前景，正引起各有关 研究领域学者的强烈兴趣。
利什曼病
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内脏利什曼病（黑热病） 内脏利什曼病（黑热病） 粘膜皮肤利什曼病 皮肤利什曼病
杜氏利什曼原虫
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黑热病
1.1形态 形态
1.无鞭毛体又称利杜体 1.无鞭毛体又称利杜体 ） Leishmanbody） （Leishman-Donovan body）
椭圆形或圆形 无游离的鞭毛 均值4.4 4.4µm 虫体很小 均值4.4 m×2.8µm m 鞭毛根﹚ 高倍镜下可见基体和根丝体 ﹙鞭毛根﹚
3 黑热病的临床表现 •消化系统症状 消化系统症状 •循环系统症状 循环系统症状 •其他症状 其他症状
患者常有口腔炎，患者食欲减退常有消化不良 及食后胃部饱胀的感觉。甚至可引发恶心呕吐 及腹痛等症状。
脉搏大都增速，血压降低。患者血浆蛋白总量的下 降以及贫血，因此可发生水肿，以下肢和脸部最常 见。偶亦出现全身性浮肿 。发热期间伴有鼻出血。
研究进展
•青蒿素有望用于治疗黑热病 青蒿素有望用于治疗黑热病
学家评估了青蒿素治疗杜氏利什曼原虫的效果。发现该药能在利什曼 原虫生长的各个阶段杀死它，特别是在致病的“无鞭毛体”阶段。青 蒿素对杜氏利什曼原虫无鞭毛体更有效，这一事实表明该药是通过巨 噬细胞起作用的。巨噬细胞是一种能吞噬和杀死入侵人体的有害生物 的免疫细胞。很可能青蒿素不会直接杀死利什曼原虫，而是进一步激 活巨噬细胞，从而让它清除利什曼原虫。青蒿素比目前的抗利什曼病 药物戊烷脒和米替福新更加安全。前者可能导致糖尿病，后者有可能 导致下一代出生缺陷。青蒿素的优点在于它是已经获得批准的药物， 因此毒理试验已经完成。由于利什曼病是印度的流行病，而且目前的 抗利什曼病药物存在副作用，使用青蒿素治疗利什曼病的前景非常令 人鼓舞。
白/球 球 蛋白 倒置
治愈后， 治愈后，病人获得稳定免疫力
3黑热病的临床表现 黑热病的临床表现 • 发热 •脾肿大 •脾肿大 •肝肿大 肝肿大
95﹪的黑热病人有发热症状，且一般在 下午发热，夜间伴有盗汗
一般在初次发热半个月后可触及，半年 后可能超过脐部，最大的可达耻骨上方
有半数左右的病人肝脏呈肿大，肝肿大出现常较脾肿大为迟， 肿大程度不如脾肿大明显， 很少有超过右肋缘下6cm者
21世纪是生物学的世纪 21世纪是生物学的世纪
杜氏利什曼原虫 (Leishmannia dunovani)
人体寄生利什曼原虫（ Leishmannia ） 人体寄生利什曼原虫（ 杜氏利什曼原虫(L. 杜氏利什曼原虫 dunovani) 热带利什曼原虫(L. tropica) 热带利什曼原虫 墨西哥利什曼原虫(L. 墨西哥利什曼原虫 mexicana) 巴西利什曼原虫(L. 巴西利什曼原虫 braziliensis)
防治措施
•治疗方法 治疗方法
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防制黑热病流行的重要环节。 采用五价锑剂葡萄糖酸锑钠，国产制剂ห้องสมุดไป่ตู้斯锑黑 克较好。对于少数经锑剂反复治疗无效的病人或 不适宜使用锑剂的病人，可用戊脘脒或二脒替等 芳香双脒剂治疗。皮肤性黑热病患者的治疗以戊 脘脒为佳 。
•预防措施 预防措施
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消灭病犬 保护健康犬 杀灭白蛉