精斑检测

前列腺特异抗原(PAS)的检测是临床上对前列腺癌的诊断、治疗效果及预后评估的重要指标。

前列腺特异抗原(PAS)检测试纸条采用双抗体夹心法测定原理快速检测血液中的前列腺特异抗原(PAS)，试纸条灵敏度达4ng/ml，检测时间均需10-20分钟。

精浆主要是前列腺、精囊腺和尿道球腺等附属腺体分泌的混合液，还包括少量睾丸液、附睾液等。

平时，精子和精浆各组分“各安其位”，在排精过程中，精子和精浆混合构成精液。

精液是由精子和精浆组成的。

精子的数量虽多，但其体积仅占精液0.1%以下，其余部分都是精浆。

精斑预实验：常用的有:酸性磷酸酶预试验、精子检出试验、抗人精血清环状沉淀试验、酶联免疫斑点法检测P30试验。

1．紫外线检查
精斑在紫外线灯照射下呈银白色荧光，周围较深，带紫蓝色边缘。

经水洗涤残留于布质纤维中的精斑，在紫外线灯照射下下仍可见点状荧光，借此可以发现精斑所在的部位。

人体其他分泌物的斑痕，如汗液斑、尿斑、阴道分泌物、乳汁、鼻涕等，以及肥皂、浆糊斑、某些药物、化学纤维制品，在LP-365D紫外线灯照射下也可显现与精斑相类似的荧光。

因此，在紫外线下出现银白色荧光，不是精斑的特异性反应，不能作为确定精斑的根据。

2．碘化碘钾结晶试验
精斑中卵磷脂逐渐析出胆碱，胆碱遇碘则形成过碘胆碱结晶。

剪取可疑斑痕少许，置于玻片上，加试剂（碘化钾1．65克、碘2．54克、加水30毫升）1—2滴加盖玻片镜检，初见褐色颗粒，逐渐演变成针状结晶，然后则为褐色菱形结晶，结晶不稳定，于生成后1—3小时可消失。

此结晶并非精斑特异性反应，凡含有胆碱的物质（阴道粘液、子宫分泌物、脓液、鼻涕、唾液以及肝、肾等脏器）也可形成结晶。

因此，检见结晶只能推断是精斑的可能，而不能确定就是精斑。

3．酸性磷酸酶检验
精液中含有前列腺液，有大量酸性磷酸酶，对可疑斑迹进行检测，可作为精斑的预试验。

精液中的酸性磷酸酶．在合适的温度环境与酸性溶液中，可分解磷酸苯二钠，释放出酚。

酚经氧化剂铁氰化钾的作用，与氨基安替比林结合，产生红色酮类化合物，随检材中精斑的不同浓度而呈深浅不同的红色，浓度过高，可出现红色沉淀；阴性反应为橙黄色。

精液稀释至2万倍，仍可呈阳性反应。

这种方法具有简便、灵敏、迅速和不破坏检材的完整性等优点。

但特异性较差，酸性磷酸酶除存在于前列腺外，还广泛分布在人体血液、阴道分泌物、唾液、尿液以及胰、脾等脏器内。

利用精液所含酸性磷酸酶浓度显著高于其他体液的特点，还可作精液检验的确证试验，使用仪器设备，分离提纯酸性磷酸酶，绘制反应曲线，如果酸性磷酸酶浓度大于300单位／毫升，可推定为精斑，大于500单位／毫升，可靠性更大。

因为女性在服用某些药物或者处于生理期，酸性磷酸酶含量会飙升，这些情况不能通过酸性磷酸酶进行含量确证。

也需要特殊仪器设备，可靠性只是相对的。

还有一点值得注意，就是很多药物和染料含有萘酚类基团，也会和精斑反应完全一样。

精斑确证实验（也称精斑的确定）
最终还是需要进行镜子镜检，将精子染色，在显微镜下观察精子形态。

或者使用精斑检测试纸进行检测确定。

因为有些时候精子形态被破坏，无法检测到。

或者男性属于无精子症或少精子症或输精管结扎，这精子镜检无法检测到精子。

最好是使用精斑检测试纸进行确证检验，有没有精子都可以检测到精斑。

精斑预实验的主要作用是对精斑进行初选，节省精斑试纸的使用，现在的精斑试纸价格大幅降低，已经无需再进行精斑的预实验。

精斑确证实验后最终再进行精斑的DNA鉴定，对比嫌疑人的样本，确定精斑所属个体。

中文文献报道统计：
一、抗P30胶体金免疫试纸条灵敏度和特异性探讨（陈森，吕德坚，陆惠玲）比较了
1阴道拭子、阴道分泌液
2、10 min检查为阳性的4份样本稀释后．
3 、生理周期分泌液斑
4尿液斑
5 唾液斑
6汗液斑
7、多囊卵巢综合征患者阴道分泌液斑
8动物和人精液
结论是：，抗P30胶体金免疫试纸条的灵敏度、特异性较高
二、性侵犯案件中对于精斑试纸条使
用灵敏度以及特异性的研究李慧姚亚飞
比较(1)紫外线检查。

(2)碘化碘钾结晶试验。

(3)酸性磷酸酶检验这几种方法的灵敏性
用女性生理周期分泌物、汗液、唾液、尿液、多囊卵巢综合症的女性阴道分泌液斑所、人和动物精液（种属）进行P30的检测
试纸条的特异性受到女性不同时期性激素水平的严重影响比较大
文章有：
1991年双抗夹心间接ELISA法检测P30
1991年单克隆抗体酶联免疫吸附抑制试验测定精斑G2m（n）因子
1990年用等电聚焦酶免疫分析法检测人类精斑GC表现型的研究
2015年少精、弱精症精斑检验1例（文章中提到用抗人精斑检测试纸条是阳性，但是二步消化沉淀中检测是阴性，临床结果表明犯罪嫌疑人是少精弱精症患者
2011年（杨思思[1]贾晓杰[2]）精斑试纸在水中高腐尸体应用失效1例(精斑试纸检测阴性，DNA 检测阳性。

用二步消化法合并磁珠法来提取DNA，可能是由于精液特异性蛋白浓度低于精斑试纸条的检出值而呈阴性结果)
在实际应用中，P30试纸条检测精斑的灵敏度和特异性
还有待进一步的加强，如精斑浸液过浓、遭水洗破坏的精斑都常出现假阴性111；观察时间掌握不当、种属之间的交叉反应也不排除假阳性情况嘲。

另外，研究表明一定浓度(1>6．4％)的NaCl溶液会使该反应产生假阳性反应嘲。

可见，传
统的精斑确证方法在灵敏度、特异性、实用性等方面均存在着一些缺陷，仍有改进的必要。