第十五章 精斑检验

第十五章 精液斑检验
NSMC XDD
1
精液（斑）检验是法医学鉴定实践中的一项重 要内容，与血痕检验占有同等重要地位，特别是 对有关性犯罪或有性犯罪嫌疑的案件，以及对死 亡性质不明的女尸检查，精液（斑）的检验尤为 重要。 精液（斑）的法医学鉴定，可为判断案件性质、 划定侦查范围、认定或排除犯罪嫌疑人提供重要 线索。在亲子鉴定或其它有关性功能鉴定中，有 时需对新鲜精液进行检验。
7
凝固酶（精囊腺）5min内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺）20-30min内液化成稀薄 半流动体
精子产生过程
8
精斑检验的目的：
为案件侦查和审理提供线索和证据。
需解决的问题：
斑痕是否为精斑？若是精斑，确定精斑的个体来源。
精斑检验程序：
肉眼检验→预试验→确证试验→个人识别
9
第二节 精液斑的肉眼检查
12
尸体 上的 精斑
13
强奸杀人现场遗留纸团
14
紫外辅助检查：
原理： 精斑中的黄素在紫外线下呈银白色荧光，斑痕边缘呈浅紫蓝色 特点：

对检材无污损、无破坏，不影响进一步检验 特异性差（干扰物：阴道液、尿液、唾液、某些色素染料）
作用：仅能为进一步检验提供可疑部位 结果分析：
阳性仅表明可能是精斑，阴性不能轻易否定精斑
液）等也可形成类似结晶。同时，精液斑受到尿 液、血液等污染时，则不出现阳性反应。 结晶试验灵敏度低、特异性差，仅作为指向实验。
28
过碘胆碱 29
30
苦味酸结晶试验
原理：
精素分解产物与苦味酸生成精素苦味酸结晶
（青黄色有折光的十字、柱、星形结晶）
特点： 动物精液一般不出现阳性。
31
32
三、锌检出法
剪取肉眼可见的斑痕直接进行确证试验。
34
第四节 精斑的确证试验
精斑的确证试验是检验精斑中的特有成
份，其阳性结果可以确证精斑。主要有三
类方法：精子检出、免疫学检验和生物化
学检验。
35
一、精子检出法
显微镜下观察到典型精子，即能确证人精斑。检 出精子是认定精斑最简便、最可靠的方法，可被 法医实验室广泛采用。 精子具有典型而稳定的形态，不易受其他因素影 响而改变。在精斑中的精子形态相当稳定，十余 年的陈旧精斑也可能查见精子。镜下观察精子是 无色的，一般情况下精子头部有折光，尾部很细。
49
抗人精血清沉淀反应
原理：
用特异性抗人精液血清与可疑精斑检材浸液作沉淀反应， 出现肉眼所见白色沉淀为阳性反应，证明检材含有人精液
方法：
环状沉淀反应，琼脂双向扩散试验，对流免疫电泳
注意：
用已知人精斑作阳性对照，检材无精斑部位作阴性对照
50
51
前列腺特异性抗原p30的检测
前列腺特异性抗原（prostate specific antigen, PSA） 又称γ-精浆蛋白，由人类前列腺上皮细胞所分泌，是成年 男子精浆中特有的一类糖蛋白，分子量30 000，故名p30， 性质稳定，是确证精液斑的理想标记。常用检测方法有免 疫胶体金法和ELISA。 抗-p30血清具有高度的种属特异性和前列腺器官特异 性，灵敏度和准确性均高于精子检出法，不受精液中无精 子的影响。
镜检：精子头前半部不着色或浅染，后半部 呈蓝色，尾部红色
43
酸性品红亚甲基蓝染色法 镜检：精子头部呈红色，尾部呈蓝色
44
性交后精子存活时间： 阴道 3-8h 宫颈 2-5天 子宫、输卵管 1-10天 在性犯罪案件中，取阴道试子的时间越早越 好，提取部位为阴道后穹窿。
45
精斑陈旧、取材部位不准或遇到少精子症 者，只要找到一个完整的典型精子，即能 确证人精斑。
20
一、酸性磷酸酶检验(acid phosphatase, ACP)
实验依据：

精斑中的酸性磷酸酶含量高：约是其他脏器的100倍；也远
远高于动物精液及其他动、植物组织中的含量，但猴与人相 似。

来源于前列腺 精斑中酸性磷酸酶稳定性好： 抗腐败---常温保存10年、夏季室温8周腐败；
耐高热---125℃加热30m男性各附属性腺分泌物所形成的复杂混合物，精囊 液约占50％～80％，前列腺液占15％～30％，尿道球 腺液，尿道旁腺液约占5％。
精液斑： 精液浸润或附着于基质上，干燥后形成的斑痕。
3
4
精子
精液
精浆
男性生殖细胞，含亲代遗传 物质，由睾丸产生，每次射 精大概有0.6-2亿个精子。 男性附属性腺分泌物的混合 液，输送精子，为精子提供 营养，激发精子活力等。
36
正常未经染色精子形态
37
38
39
精斑检材的处理：
上清：抗人精沉淀试验； 中和试验
沉渣：涂片，染色，检 验精子
40
藻红染色法：
精子头部和尾部均染成红色。
亚甲蓝染色法：
精子头后部染成深蓝色，头前部、尾部不
着色或浅染。
41
亚甲蓝染色精子
42
HE染色法：
①苏木素染液
②0.5％伊红染液
③1％盐酸酒精溶液
①PCR-直接测序法 ②PCR-RFLP法
63
（二）精斑的血清型测定
精液中的多态性蛋白：Gm、Km、GC、血清类粘蛋白
（三）精斑的酶型测定
PGMl型测定 岩藻糖苷酶型 黄递酶型 γ-GGT型测定
64
PGM1型测定
磷酸葡萄糖变位酶：普通凝胶电泳可检出7条谱带。
65
DIA型
黄递酶型（diaphorase, DIA），DIA3仅存在于人类 精子和睾丸中，是男性生殖细胞特有的一种遗传标记，且 分型不受阴道液和其它体液的影响。
谢谢！
73
26
α -磷酸萘酚-固蓝B试验
原理：
ACP
α -磷酸萘酚
α -萘酚
固蓝B
偶氮化合物（紫红色） 特点：灵敏度好，特异性差阴道液等可能呈阳性反应。
27
二、结晶试验
人精液中含有一些成分，与不同试剂结合，能 形成一定形态的结晶体，据此可推测精斑的存在。 但形成结晶体非精液斑所特有，人体其它器官
（肝肾）等浸出液以及其它分泌液（阴道液、尿
原理：
人体组织和体液中精液含锌量最高，精液中
的锌主要来自前列腺，此法适用于无精子精斑。
特点：
特异性很高，除乳汁（稀释后阴性），其它分
泌物、体液、排泄物均呈阴性。混入血迹不影响
结果。
33
预试验注意：
除酸性磷酸酶检验外，其他各项试验灵敏度均不
高，预试验阴性的检材有时仍需进行确证试验。
精斑不一定要经过预试验后才进行确证试验，可
分泌型：分泌液与体液中检出ABH抗原
人体液、分泌液中的ABH血型物质是糖蛋 白，以水溶性形式存在，而分泌型精液中 的ABH血型物质的含量比红细胞中多且耐 热，非分泌型精液中ABH血型物质含量少， 常规方法不易检出。
57
1.吸收试验 2.解离试验 3.中和试验
精斑中的水溶性ABH物质能与相应抗体特异 性结合，使抗体与指示红细胞的凝集反应能力降 低或完全消失，红细胞不凝为阳性反应，证明精 斑中含有与抗体相对应的抗原。
精斑的形态：
无固定形态，外观常因附着物不同而有差异， 在软质载体，如衣裤、纸张、床单上等，手触之 有硬感，新鲜精斑有特殊腥气味。 典型的精斑呈不规则地图状，在深色纺织品上 呈灰白色浆糊状斑迹；在浅色纺织品上，多呈黄 白色地图状，边缘色深。
10
床单上精液斑
11
精斑的分布：
多附着于犯罪嫌疑人或被害人的衣裤、 女性外阴部、大腿内侧、腹壁，偶见口腔 内、肛门。现场的被褥、草席、床板、毛 巾、纸张、沙土、丢弃的避孕套等。此外， 阴道擦拭物也是常见的精斑检材。
66
（四）精斑的DNA分析
精液中的DNA：精子、睾丸细胞、上皮细胞
精液DNA数据：
每个精子含DNA约2.5 pg
PCR分析所需精液量低于5 ul，仅需10个精子
正常成人每次射精约3~5 ml，约0.6~2亿个精子
67
精子细胞核特点：
大量二硫键，能抵抗去污剂和外源性蛋白酶→ 提取DNA需加入还原剂（如DTT）→ 二步消化法 提取精阴混合斑精子DNA。
空泡状，含多种 水解酶和糖蛋白 细胞核，致密， 重要成分是DNA
线粒体鞘
正常精子分头、体、 尾三部分，长约 60μm，外形似蝌蚪, 头部长3～5μm，宽 2 ～ 3μm, 厚 l ～ 2μm, 正 面 观 呈卵 圆 形 ， 侧 面 观 呈梨 形 ， 主 要 由 顶 体和 致 密 的 精子细胞核组成。
结果判定：
阳性：立即出现红色，表明检材可能是精斑。
阴性：呈橙黄色，表明检材不是精斑或ACP被破坏。
24
由左至右：强阳性、阳性、弱阳性、阴性
25
注意事项：
①应同时剪取无斑痕处检材及已知精斑作阴性和阳性对照。 ②被水洗过淡质精斑，应适当延长缓冲液浸泡时间。 ③怀疑为假阳性，可适当加温或延长放置时间。 ④试验灵敏度高（剪取检材顺序：先空白、次可疑精斑、最 后已知精斑） ⑤特异性较差。
5
精液理化分析
细胞成分：
精子、睾丸细胞、白细胞、脱落柱状上皮细胞等
非细胞成分（90%是水）：
无机物：水、盐类、金属离子（锌） 糖类（果糖）、脂类、黄素、精胺、卵磷脂 共有蛋白:白蛋白、酸性磷酸酶(ACP)等 特有蛋白:PSA、DIA3等 精液功能蛋白：凝固酶、中性蛋白酶和纤溶酶等
有机物
6
精子的形态特点
Promega公司的Differex™ 系统使用标 准的蛋白酶 K 消化并结合相分离与差速离 心的方法来分离精子及上皮细胞DNA。
70
Y染色体DNA检测特点：
男性所特有，Y-STR单倍型遗传 检测Y-STR，无需分离男女成分 Y-STR呈父系遗传