几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
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为 １ 的０ ５ｏ１ － Ｃ缓冲液３ｍ， ０ ． ．ｍｌ Ｈ １ １ ４ ０ ／ ＣＫ ０ｌ 在４℃台 式恒温摇床上保温３ 后过滤， ｈ 多次冲洗残留物， 用凯
氏定氮法测定残留物的蛋白质含量。 计算饲料蛋白质
为２ Ｉ／ｇ妒鱼消化道混合液； ５０ ｍ ； ０Ｕ 草鱼消化道混合 液； 双抗为青霉素Ｇ钾盐（ ０ ｍ） １ Ｉ／ｌ ５ Ｕ 和硫酸链霉素
匀， 再加浓硫酸２ｍ， ０１ 在消化炉上小心加热， 起初电 压
调大， 冒烟时调小电压， 大量冒烟后再调大电压， 加热 至样品呈透明的浅蓝色或白色为止， 关上电源， 使消 化瓶自 然冷却。 而后， 用蒸馏水冲洗消化瓶， 洗液注人 １０ １ ０ｍ 容量瓶内， 定容。同时做一个空白 对照试验。
１ ．２ 蒸馏 ．１ ２．
于体积 １ ｍ， 值 １ 的Ｈ ｌ Ｃ缓冲液中。 ０ ｌ Ｈ ． Ｃ ＫＩ ０ ｐ ４ －
ｃ ． 用移液管移取 ３ｍ 上述混合液置于三角瓶中。 ０ｌ
鱼类消化道的粗酶液离体消化 １ 后终止反应， ２ ｈ 用定量滤纸过滤， 并用温水冲洗 ３４ 取滤渣（ － 次， 含滤 纸） １ ℃ 在 ０ 下烘干至恒重并准确称重。凯氏定氮法测 ５ 定饲料原料及其消化后相应滤渣的粗蛋白含量。 粗蛋白消化率 （ ＝ ｘ饲料样品粗蛋白含 ％） １ （ ０ ０
１ ． ３ 离体消化程 序 ．２ ２．
黄沦海等： 几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
①胃蛋白酶处理
ａ 饲料样品２ 分别置于２０ ． 称取０ｇ ． ５ 份， ５ ｍ 带盖 ｌ 三角瓶中（ 每个样品测２ 个平行样） 。
ｂ 称取１７ 蛋白 准确到００ ） ．７ 胃 酶（ ． 准确 ７ｇ ．１ ， ０ｇ置
１ ． １ 胃蛋 白酶最适量的选择 ．２ ２．
标定甲基红一 嗅甲酚绿混合指示剂 ：取 ２ ｍ ０ ｌ
０ ％甲 ． 基红酒精溶液， ０ １ 嗅甲酚绿酒精溶 １ 与２ｍ ０ ％ ． ５
液， 混匀。
胃蛋白酶活性为 １ １ ００ 胰蛋白复合酶活性 ：０ ； ０
分别取０ｇ 豆粕置于３ ． ５ 个三角 瓶中， 人含不 各加 同胃 酶活性单位（ ０ ， ０ ， ０ ） Ｈ值 蛋白 １ Ｉ １ １ ２ １ 的Ｐ ０Ｕ ６Ｕ ０Ｕ
２ ０ ．７ ６ ０ ０２
３ Ｎ ８ １ ３出口肉中十种磺胺残留量检验方法 ００－９ ． Ｓ ２ ９
（ 辑：敏 ｌ ｙｔ ．ｍ 编 刘 跃，－ ｏ ｃ ） ｍ ＠ ｍｏ
黄沦海等： 几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
１ 材料与方法
１ 材料 ． １
１ ． 饲料原料 ．１ １ 酪蛋白、 鱼粉、 豆粕、 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉 米蛋白粉， 均为经 １５ ０℃烘干处理的样品， 粉碎过 ６ １ ．３ 滴定 ０ ．１ ２． 目 筛后保存备用。 用０５ ． ＭＭ盐酸标准溶液滴定， ０ Ｏ 到接收液由 绿 色变为灰红色即是终点。同样滴定空白实验的接收 １ ． 主要试剂 ．２ １ 硫酸（Ｂ －７）硫酸铜（Ｂ ５ ８、 ６５ ７、 Ｇ ２ Ｇ ６ －７）硫 液。 ６
料的方法， 测定了７ 种常用蛋白质饲料原料的消化 率， 为饲料生产者配制鱼用饲料提供基础数据， 同时
为体外测定鱼用蛋白质原料消化率提供参照。
； ， 咫 孚卿； ，咫 卜异 卿 ，异 夕笋 乒 界咫 黔笋 毛尹 界笋 ；， 日 即 ； 四； ；９ ‘叨；〕 日 ， 业 笋 所笋 黔即毛尹 ；罗；， 矛， 护日护， 护，护日 沪， 矛， 护叨护，护， 矛， 渗， 矛， 矛日护妇矛叨护，护， 沪罗 沙罗 沪罗 ； 入尹 ；罗 ；， 罗 尹 尹， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， 那 岁 尹 乒，
化的真实情况。 ｏｅ 和Ｅｇ （ ９） 蛋白 Ｂｉｎ ｇ ｍ １ ｓ ｕ １ 在胃 酶－ ９
胰蛋 白酶两步法 中利用标准过滤装置测得饲料蛋 白
质消化率与鼠和猪的真消化率十分接近， 他们认为这
种方法测得的蛋白质体外消化率经内源氮校正与回
用高， 而且对外界环境的要求较高， 季节、 温度、 光照
等都会影响消化率测定值。 体外消化法是利用精制的 消化酶或研究对象的消化道酶提取液在试管内进行
３ 结论
工业出版社，０３ ４－５ ２０ ． ８３ １ ３
通过上述实验反复测试， 本方法提取操作简单、 快 速， 上色谱条件下， 在以 分辨率高， 干扰少， 适用于各种
饲料中磺胺二甲Ｖ陡、 ， 磺胺六甲氧Ｐｕ， Ｋ） 磺胺氯哒嗓、 Ｉ ｔ
２ 于世林． 高效液相色谱方法及应用［］ Ｍ． 北京： 化学工业出版社，
表２ 不同胰蛋白酶浓度下的豆粕蛋白质体外消化率
胰 白 活 （） 蛋 酶 性Ｉ １ Ｕ １ ２ ０ ０ ５ ０ ０ ０
消化率（ ％） ３． １ ５ ３． ７ ８ ３． ５ ５
连接好凯氏蒸馏装置，加热使之产生蒸汽。取 ２％硼酸溶液 ２ｍ 置于 １０ １ ０ ０ｌ ５ｍ 三角瓶内， 并加混合 指示剂 １ 然后将其置于冷凝管下。吸取消化稀释 滴，
人消化瓶中， 加入无水硫酸钠和硫酸铜的混合物［ ［ ｍ
分别取０ｇ 豆粕置于３ ． ５ 个三角瓶中， 用含有胃 蛋
白酶浓度为０ ５ｏ１ Ｃ－ Ｃ 缓冲液做前处理， ． ｍｌ 的Ｈ ｌＫ Ｉ ０ ／
（ Ｓ４ Ｈ ） （ａＯ－ ： ， Ｃ ０－ பைடு நூலகம் ： ２ ４１ ｇ 与试样混合均 Ｕ ５ ０ ｍ Ｓ ） ９ Ｎ ］ ６
之 后加０ｍｌ的 ． ｏ 氢氧化 ２ ／ １ 钠溶液 处理消化液使之Ｐ Ｈ
值等于６ 。再分别加人含不同胰蛋白 ． ８ 酶活性（ ０ ， ｌｌ ０ｕ １ Ｉ， ０ ）的０ ５ ｏ１ ＨＰ４ ａＨ缓冲液。 ５ Ｕ２ Ｉ ０ ０Ｕ ． ｍｌ的Ｋ ２ － Ｏ ０ ／ ＯＮ 继续培养 ３， ｈ测定饲料的蛋白质消化率， 确定出胰蛋 白酶的最适用量为 １０ （ ） ５１ 表２． Ｕ
中图分类号 Ｓ １． ８６ ２ ３
消化率是动物从食物中所消化吸收的部分 占总
作配方提供参考［ 然而， Ｐ ］ 。 体外消化法无法反映体内消
摄人量的百分比， 是评价饲料营养价值的重要指标之
一。测定饲料消化率主要有两种方法： 体外法和体内 法。 体内法测定的消化率能够比较真实的反映鱼类对 饲料的消化情况。 但体内法测定方法复杂、 时间长、 费
为分析纯。
１ ．４ 计算 ．１ ２． Ｖ Ｖｘ Ｃ （ ＝Ｎ ， ， ｚ ｌ Ｘ１ ０ Ｂ ％） Ｈ（ － ） ４ ０ ％
硼酸 （Ｂ －８（ ６８７） Ｇ ２ 分析纯） ｇ ： 溶于ｌ ｍ水配 ２ ０ ｌ ０
成 ２ 溶液（ ／） ％ ＷＶ ｏ 混合指示剂： 甲基红（Ｇ ５－７）． Ｈ ３ ８ ６０ ％乙醇 －９ １ 溶液， 嗅甲酚绿（Ｇ ２０ ９０ ％乙醇溶液， Ｈ ３ ２－７）． －１ ５ 两 溶液等体积混合， 阴凉处保存期三个月以内。 ０ ５ ｏ１ Ｃ溶液： ． ｌ ． ｍｌ Ｈ ｌ ０ ／ 取４ ｍ 浓盐酸， ２ 用蒸馏水定
《 门料工业）２０ 年第２ 直第 ２ 朋 －０５ ６ ０
ｊ柳 ． ９ １ ＞４率Ａ鲤方法韵毙钗 ｒＩＭＭ磺１０＊外Ｎｑ ｊＭｉｓ ４ ４ ０１ ＪＯｌ ， ｗＩ ｇ － Ｉｗ Ａｂ ＆ １ ｊ ，
黄沧海 陈东晓
摘 要 试验分别采用胃蛋白酶一 胰蛋白酶两步法、 食性鱼类（ ＃ 消化道粗酶提取液消 肉 如ｆ鱼） 化法和草食性鱼类（ 如草鱼） 消化道粗酶提取液消化法测定了酪蛋白、 鱼粉、 豆粕、 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉等 ７ 种蛋白质原料的体外消化率。３ 种测定方法中， 鱼粉的消化率差异不显著 （＞． ）豆粕、 Ｐ０ ５ ； ０ 菜籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉用两步法和草鱼消化酶法测定的消化率无显著差异 （＞． ） Ｐ０ ５； ０ 棉籽粕消化率用两步法测定值高于用消化酶法的测定值， 差异极显著（＜． ）豆粕、 Ｐ０ １； ０ 菜 籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉的消化率用两步法比用妒鱼消化酶测定的值高， 差异极显著（＜． ）草 Ｐ０ １； ０ 鱼消化酶法和妒鱼消化酶法对酪蛋白的消化率无显著差异（＞． ）而对于豆粕、 Ｐ０ ５ ， ０ 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉米蛋白 粉草鱼消化酶法测定值高于妒鱼消 化酶法的测定值， 差异极显著（＜． ） Ｐ０ １。结果 ０ 表明， 蛋白酶一 胃 胰蛋白酶两步体外消化法在测定鱼粉蛋白质消化率时可以替代鱼类消化液粗酶消 化法， 对于其它蛋白质原料使用该方法应慎重。 关键词 蛋白质饲料； 体外消化率； 测定方法
液 ｌｍ， ｏ ｌ由漏斗处加人反应室内， 再加４％ Ｏ ０ Ｎ Ｈ溶 ａ 液 ｌ 使蒸汽进人反应室， ｏｌ ｍ。 加热蒸馏， 直至三角瓶内 硼酸溶液增加 １ 倍体积， 移开三角瓶， 停止加热。 将空 白 对照的消化液做同样处理。
酸钾（Ｇ ２－７） Ｈ ３ ０ ６和氢氧化钠（Ｂ －７）均 －９ Ｇ ６９ ７， ２
肠末端蛋白质表观消化率高度相关。 我国饲料原料品
种多， 营养成分含量差异大， 加工方式各异， 饲料原料
对不同鱼类的营养价值差异更大。 由于鱼类生活在水
的消化试验，其测定值可近似反映鱼对饲料的消化 率。此法能快速测定原料的相对利用率， 为营养师制
中， 测定鱼类饲料真消化率比 测定畜禽的更加困难。
所以寻找一种准确、 简便、 实用的消化率测定方法对 评价鱼类饲料的消化率有着十分重要的意义。 本试验
（ ０ ／ｌ； ％ １ １ ｍ）１ 磺基水杨酸钠。 ５Ｕ ４
１ ． 主要仪器 ．３ １
消化率， 确定出胃蛋白酶的最适用量为 １ Ｉ （ ６ Ｕ 表 ０
１。 ） 表 １ 不同胃蛋白酶浓度下的豆粕蛋白质体外消化率
胃 蛋白 酶活性（ ） Ｉ Ｕ 消化率（ ） ％
实验用样品粉碎机、 分析筛（ 孔径０ ０ ｍ ．ｍ ） ６ 、 分析 天平（ 感量０ ０ｇ、 ． １） ０ 滴定管（ 酸式， ０ｌ 消化 ｌ ｍ）电炉、 ０ 、
炉、 电热式恒温烘箱、 干燥器、 凯氏蒸馏装置、 过滤装 置、 磁力搅拌器、 离心机、 恒温水浴振荡器等。
１ 试验方法 ． ２ １ ． 原料蛋白质测定 ．１ ２ １ ． １ 消化 ．１ ２．
２ ０ ０ ３ ． ３５
１ ．２ 胰蛋白酶最适用量的选择 ．２ ２．
称取０ －． 准确至００ｇ ７（ ． ０ｇ ６ ． １ 无损失地放 ０ ） 试样，
容至 １ ｏ Ｌ
ｍ １ ｘ ０ 盖ｘ ０ ０
式中：Ｂ 含氮量； Ｃ—
Ｎ 所用 ｘ 滴定 盐酸的 ａ 浓度；
Ｖ 试样滴定时所需酸标准溶液的体积（Ｉ； ， — Ｍ） Ｖ 空白 滴定时所需酸标准溶液的 ２ － 体积（Ｉ Ｍ） ； 一 试样的质量（） ９。 １ ． 消化液测定法 ．２ ２
量一 消化后滤渣粗蛋白 含量） ／ 饲料样品 粗蛋白 含量
ｄ ． 将三角瓶置于（ １．℃台式恒温摇床中， ４ ０） ０ １ 以其 ２ 结 果 温度达到４℃时开始计时， ０ 震荡３， ｈ频率为８ 次／ｉ ０ ／ ｎ ２１ 饲料的粗蛋白含量 ｍ ， ．
磺胺六甲氧嗜陡、 磺胺氯哒嗦、 磺胺甲恶哇 ４ 种磺胺
磺胺甲恶哇的测定。本方法最小检出浓度满足了畜禽
常检测的需要， 具有良 好的准确度及精密度。 类药物， １ 所述测定步骤进行测定（ 次测定 饲料日 按照 ． ４ 取５ 参考文献 结果的 平均值） 由表 １ 。 所述结果可以 看出， 本方法回 收率较高， 线性良 该方法的测定低限为ｌ ｇｇ １ 庄无忌． 好。 ０ ／ｏ ｍｋ 动物和动物源食品中兽药残留物分析方法． 北京： 中国轻
采用胃蛋白酶一 胰蛋白酶两步体外消化法以及从肉食 黄沦海， 集美大学水产学院水生生物技术研究所， 博士， 性和草食性鱼类的消化道提取消化酶在体外消化饲
讲师， １２ ， ３ ０１福建省厦门市集美区印斗路４ 号。 ６ ３ 陈东晓， 集美大学生物工程学院。
收稿 日期 ２ ０ － ７ １ ：０ ５ ０ － １
氏定氮法测定残留物的蛋白质含量。 计算饲料蛋白质
为２ Ｉ／ｇ妒鱼消化道混合液； ５０ ｍ ； ０Ｕ 草鱼消化道混合 液； 双抗为青霉素Ｇ钾盐（ ０ ｍ） １ Ｉ／ｌ ５ Ｕ 和硫酸链霉素
匀， 再加浓硫酸２ｍ， ０１ 在消化炉上小心加热， 起初电 压
调大， 冒烟时调小电压， 大量冒烟后再调大电压， 加热 至样品呈透明的浅蓝色或白色为止， 关上电源， 使消 化瓶自 然冷却。 而后， 用蒸馏水冲洗消化瓶， 洗液注人 １０ １ ０ｍ 容量瓶内， 定容。同时做一个空白 对照试验。
１ ．２ 蒸馏 ．１ ２．
于体积 １ ｍ， 值 １ 的Ｈ ｌ Ｃ缓冲液中。 ０ ｌ Ｈ ． Ｃ ＫＩ ０ ｐ ４ －
ｃ ． 用移液管移取 ３ｍ 上述混合液置于三角瓶中。 ０ｌ
鱼类消化道的粗酶液离体消化 １ 后终止反应， ２ ｈ 用定量滤纸过滤， 并用温水冲洗 ３４ 取滤渣（ － 次， 含滤 纸） １ ℃ 在 ０ 下烘干至恒重并准确称重。凯氏定氮法测 ５ 定饲料原料及其消化后相应滤渣的粗蛋白含量。 粗蛋白消化率 （ ＝ ｘ饲料样品粗蛋白含 ％） １ （ ０ ０
１ ． ３ 离体消化程 序 ．２ ２．
黄沦海等： 几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
①胃蛋白酶处理
ａ 饲料样品２ 分别置于２０ ． 称取０ｇ ． ５ 份， ５ ｍ 带盖 ｌ 三角瓶中（ 每个样品测２ 个平行样） 。
ｂ 称取１７ 蛋白 准确到００ ） ．７ 胃 酶（ ． 准确 ７ｇ ．１ ， ０ｇ置
１ ． １ 胃蛋 白酶最适量的选择 ．２ ２．
标定甲基红一 嗅甲酚绿混合指示剂 ：取 ２ ｍ ０ ｌ
０ ％甲 ． 基红酒精溶液， ０ １ 嗅甲酚绿酒精溶 １ 与２ｍ ０ ％ ． ５
液， 混匀。
胃蛋白酶活性为 １ １ ００ 胰蛋白复合酶活性 ：０ ； ０
分别取０ｇ 豆粕置于３ ． ５ 个三角 瓶中， 人含不 各加 同胃 酶活性单位（ ０ ， ０ ， ０ ） Ｈ值 蛋白 １ Ｉ １ １ ２ １ 的Ｐ ０Ｕ ６Ｕ ０Ｕ
２ ０ ．７ ６ ０ ０２
３ Ｎ ８ １ ３出口肉中十种磺胺残留量检验方法 ００－９ ． Ｓ ２ ９
（ 辑：敏 ｌ ｙｔ ．ｍ 编 刘 跃，－ ｏ ｃ ） ｍ ＠ ｍｏ
黄沦海等： 几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
１ 材料与方法
１ 材料 ． １
１ ． 饲料原料 ．１ １ 酪蛋白、 鱼粉、 豆粕、 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉 米蛋白粉， 均为经 １５ ０℃烘干处理的样品， 粉碎过 ６ １ ．３ 滴定 ０ ．１ ２． 目 筛后保存备用。 用０５ ． ＭＭ盐酸标准溶液滴定， ０ Ｏ 到接收液由 绿 色变为灰红色即是终点。同样滴定空白实验的接收 １ ． 主要试剂 ．２ １ 硫酸（Ｂ －７）硫酸铜（Ｂ ５ ８、 ６５ ７、 Ｇ ２ Ｇ ６ －７）硫 液。 ６
料的方法， 测定了７ 种常用蛋白质饲料原料的消化 率， 为饲料生产者配制鱼用饲料提供基础数据， 同时
为体外测定鱼用蛋白质原料消化率提供参照。
； ， 咫 孚卿； ，咫 卜异 卿 ，异 夕笋 乒 界咫 黔笋 毛尹 界笋 ；， 日 即 ； 四； ；９ ‘叨；〕 日 ， 业 笋 所笋 黔即毛尹 ；罗；， 矛， 护日护， 护，护日 沪， 矛， 护叨护，护， 矛， 渗， 矛， 矛日护妇矛叨护，护， 沪罗 沙罗 沪罗 ； 入尹 ；罗 ；， 罗 尹 尹， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， 那 岁 尹 乒，
化的真实情况。 ｏｅ 和Ｅｇ （ ９） 蛋白 Ｂｉｎ ｇ ｍ １ ｓ ｕ １ 在胃 酶－ ９
胰蛋 白酶两步法 中利用标准过滤装置测得饲料蛋 白
质消化率与鼠和猪的真消化率十分接近， 他们认为这
种方法测得的蛋白质体外消化率经内源氮校正与回
用高， 而且对外界环境的要求较高， 季节、 温度、 光照
等都会影响消化率测定值。 体外消化法是利用精制的 消化酶或研究对象的消化道酶提取液在试管内进行
３ 结论
工业出版社，０３ ４－５ ２０ ． ８３ １ ３
通过上述实验反复测试， 本方法提取操作简单、 快 速， 上色谱条件下， 在以 分辨率高， 干扰少， 适用于各种
饲料中磺胺二甲Ｖ陡、 ， 磺胺六甲氧Ｐｕ， Ｋ） 磺胺氯哒嗓、 Ｉ ｔ
２ 于世林． 高效液相色谱方法及应用［］ Ｍ． 北京： 化学工业出版社，
表２ 不同胰蛋白酶浓度下的豆粕蛋白质体外消化率
胰 白 活 （） 蛋 酶 性Ｉ １ Ｕ １ ２ ０ ０ ５ ０ ０ ０
消化率（ ％） ３． １ ５ ３． ７ ８ ３． ５ ５
连接好凯氏蒸馏装置，加热使之产生蒸汽。取 ２％硼酸溶液 ２ｍ 置于 １０ １ ０ ０ｌ ５ｍ 三角瓶内， 并加混合 指示剂 １ 然后将其置于冷凝管下。吸取消化稀释 滴，
人消化瓶中， 加入无水硫酸钠和硫酸铜的混合物［ ［ ｍ
分别取０ｇ 豆粕置于３ ． ５ 个三角瓶中， 用含有胃 蛋
白酶浓度为０ ５ｏ１ Ｃ－ Ｃ 缓冲液做前处理， ． ｍｌ 的Ｈ ｌＫ Ｉ ０ ／
（ Ｓ４ Ｈ ） （ａＯ－ ： ， Ｃ ０－ பைடு நூலகம் ： ２ ４１ ｇ 与试样混合均 Ｕ ５ ０ ｍ Ｓ ） ９ Ｎ ］ ６
之 后加０ｍｌ的 ． ｏ 氢氧化 ２ ／ １ 钠溶液 处理消化液使之Ｐ Ｈ
值等于６ 。再分别加人含不同胰蛋白 ． ８ 酶活性（ ０ ， ｌｌ ０ｕ １ Ｉ， ０ ）的０ ５ ｏ１ ＨＰ４ ａＨ缓冲液。 ５ Ｕ２ Ｉ ０ ０Ｕ ． ｍｌ的Ｋ ２ － Ｏ ０ ／ ＯＮ 继续培养 ３， ｈ测定饲料的蛋白质消化率， 确定出胰蛋 白酶的最适用量为 １０ （ ） ５１ 表２． Ｕ
中图分类号 Ｓ １． ８６ ２ ３
消化率是动物从食物中所消化吸收的部分 占总
作配方提供参考［ 然而， Ｐ ］ 。 体外消化法无法反映体内消
摄人量的百分比， 是评价饲料营养价值的重要指标之
一。测定饲料消化率主要有两种方法： 体外法和体内 法。 体内法测定的消化率能够比较真实的反映鱼类对 饲料的消化情况。 但体内法测定方法复杂、 时间长、 费
为分析纯。
１ ．４ 计算 ．１ ２． Ｖ Ｖｘ Ｃ （ ＝Ｎ ， ， ｚ ｌ Ｘ１ ０ Ｂ ％） Ｈ（ － ） ４ ０ ％
硼酸 （Ｂ －８（ ６８７） Ｇ ２ 分析纯） ｇ ： 溶于ｌ ｍ水配 ２ ０ ｌ ０
成 ２ 溶液（ ／） ％ ＷＶ ｏ 混合指示剂： 甲基红（Ｇ ５－７）． Ｈ ３ ８ ６０ ％乙醇 －９ １ 溶液， 嗅甲酚绿（Ｇ ２０ ９０ ％乙醇溶液， Ｈ ３ ２－７）． －１ ５ 两 溶液等体积混合， 阴凉处保存期三个月以内。 ０ ５ ｏ１ Ｃ溶液： ． ｌ ． ｍｌ Ｈ ｌ ０ ／ 取４ ｍ 浓盐酸， ２ 用蒸馏水定
《 门料工业）２０ 年第２ 直第 ２ 朋 －０５ ６ ０
ｊ柳 ． ９ １ ＞４率Ａ鲤方法韵毙钗 ｒＩＭＭ磺１０＊外Ｎｑ ｊＭｉｓ ４ ４ ０１ ＪＯｌ ， ｗＩ ｇ － Ｉｗ Ａｂ ＆ １ ｊ ，
黄沧海 陈东晓
摘 要 试验分别采用胃蛋白酶一 胰蛋白酶两步法、 食性鱼类（ ＃ 消化道粗酶提取液消 肉 如ｆ鱼） 化法和草食性鱼类（ 如草鱼） 消化道粗酶提取液消化法测定了酪蛋白、 鱼粉、 豆粕、 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉等 ７ 种蛋白质原料的体外消化率。３ 种测定方法中， 鱼粉的消化率差异不显著 （＞． ）豆粕、 Ｐ０ ５ ； ０ 菜籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉用两步法和草鱼消化酶法测定的消化率无显著差异 （＞． ） Ｐ０ ５； ０ 棉籽粕消化率用两步法测定值高于用消化酶法的测定值， 差异极显著（＜． ）豆粕、 Ｐ０ １； ０ 菜 籽粕、 酵母粉和玉米蛋白粉的消化率用两步法比用妒鱼消化酶测定的值高， 差异极显著（＜． ）草 Ｐ０ １； ０ 鱼消化酶法和妒鱼消化酶法对酪蛋白的消化率无显著差异（＞． ）而对于豆粕、 Ｐ０ ５ ， ０ 菜籽粕、 棉籽粕、 酵母粉和玉米蛋白 粉草鱼消化酶法测定值高于妒鱼消 化酶法的测定值， 差异极显著（＜． ） Ｐ０ １。结果 ０ 表明， 蛋白酶一 胃 胰蛋白酶两步体外消化法在测定鱼粉蛋白质消化率时可以替代鱼类消化液粗酶消 化法， 对于其它蛋白质原料使用该方法应慎重。 关键词 蛋白质饲料； 体外消化率； 测定方法
液 ｌｍ， ｏ ｌ由漏斗处加人反应室内， 再加４％ Ｏ ０ Ｎ Ｈ溶 ａ 液 ｌ 使蒸汽进人反应室， ｏｌ ｍ。 加热蒸馏， 直至三角瓶内 硼酸溶液增加 １ 倍体积， 移开三角瓶， 停止加热。 将空 白 对照的消化液做同样处理。
酸钾（Ｇ ２－７） Ｈ ３ ０ ６和氢氧化钠（Ｂ －７）均 －９ Ｇ ６９ ７， ２
肠末端蛋白质表观消化率高度相关。 我国饲料原料品
种多， 营养成分含量差异大， 加工方式各异， 饲料原料
对不同鱼类的营养价值差异更大。 由于鱼类生活在水
的消化试验，其测定值可近似反映鱼对饲料的消化 率。此法能快速测定原料的相对利用率， 为营养师制
中， 测定鱼类饲料真消化率比 测定畜禽的更加困难。
所以寻找一种准确、 简便、 实用的消化率测定方法对 评价鱼类饲料的消化率有着十分重要的意义。 本试验
（ ０ ／ｌ； ％ １ １ ｍ）１ 磺基水杨酸钠。 ５Ｕ ４
１ ． 主要仪器 ．３ １
消化率， 确定出胃蛋白酶的最适用量为 １ Ｉ （ ６ Ｕ 表 ０
１。 ） 表 １ 不同胃蛋白酶浓度下的豆粕蛋白质体外消化率
胃 蛋白 酶活性（ ） Ｉ Ｕ 消化率（ ） ％
实验用样品粉碎机、 分析筛（ 孔径０ ０ ｍ ．ｍ ） ６ 、 分析 天平（ 感量０ ０ｇ、 ． １） ０ 滴定管（ 酸式， ０ｌ 消化 ｌ ｍ）电炉、 ０ 、
炉、 电热式恒温烘箱、 干燥器、 凯氏蒸馏装置、 过滤装 置、 磁力搅拌器、 离心机、 恒温水浴振荡器等。
１ 试验方法 ． ２ １ ． 原料蛋白质测定 ．１ ２ １ ． １ 消化 ．１ ２．
２ ０ ０ ３ ． ３５
１ ．２ 胰蛋白酶最适用量的选择 ．２ ２．
称取０ －． 准确至００ｇ ７（ ． ０ｇ ６ ． １ 无损失地放 ０ ） 试样，
容至 １ ｏ Ｌ
ｍ １ ｘ ０ 盖ｘ ０ ０
式中：Ｂ 含氮量； Ｃ—
Ｎ 所用 ｘ 滴定 盐酸的 ａ 浓度；
Ｖ 试样滴定时所需酸标准溶液的体积（Ｉ； ， — Ｍ） Ｖ 空白 滴定时所需酸标准溶液的 ２ － 体积（Ｉ Ｍ） ； 一 试样的质量（） ９。 １ ． 消化液测定法 ．２ ２
量一 消化后滤渣粗蛋白 含量） ／ 饲料样品 粗蛋白 含量
ｄ ． 将三角瓶置于（ １．℃台式恒温摇床中， ４ ０） ０ １ 以其 ２ 结 果 温度达到４℃时开始计时， ０ 震荡３， ｈ频率为８ 次／ｉ ０ ／ ｎ ２１ 饲料的粗蛋白含量 ｍ ， ．
磺胺六甲氧嗜陡、 磺胺氯哒嗦、 磺胺甲恶哇 ４ 种磺胺
磺胺甲恶哇的测定。本方法最小检出浓度满足了畜禽
常检测的需要， 具有良 好的准确度及精密度。 类药物， １ 所述测定步骤进行测定（ 次测定 饲料日 按照 ． ４ 取５ 参考文献 结果的 平均值） 由表 １ 。 所述结果可以 看出， 本方法回 收率较高， 线性良 该方法的测定低限为ｌ ｇｇ １ 庄无忌． 好。 ０ ／ｏ ｍｋ 动物和动物源食品中兽药残留物分析方法． 北京： 中国轻
采用胃蛋白酶一 胰蛋白酶两步体外消化法以及从肉食 黄沦海， 集美大学水产学院水生生物技术研究所， 博士， 性和草食性鱼类的消化道提取消化酶在体外消化饲
讲师， １２ ， ３ ０１福建省厦门市集美区印斗路４ 号。 ６ ３ 陈东晓， 集美大学生物工程学院。
收稿 日期 ２ ０ － ７ １ ：０ ５ ０ － １