透明质酸酶抑制实验

Elson-Morgan 改良法

一、实验原理

透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。

二、试剂和仪器

1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；

2、透明质酸钠：ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；

3、Buffer：溶液A（ mol/L 醋酸冰醋酸溶于1L蒸馏水中）

溶液B（ mol/L醋酸钠无水醋酸钠或三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中），混合稀释至100ml，配制成PH=的醋酸缓冲液；

4、乙酰丙酮溶液：50ml L 碳酸钠溶液和乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）

5、P-DAB显色剂：对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。

6、氯化钙溶液CaCl2：L

7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L

样品参考浓度ml

三、试验步骤

四、计算

透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%

试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值

B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值

C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值

D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值