骨髓瘤细胞系

1株人成骨肉瘤细胞系的建立及特性观察

con taining hu man papillomavir us type16.N ucleic A cid s R es, 1991;19(15):4109-4114 8Theresa M C,T an,Robert CY et al.I n v itro an d in v iv o inhib ition of hum an papillomavirus type16E6and E7genes.Cancer R es, 1995;55(20):4599-46059W ong YF,Ch ung TKH,Cheung T H e t al.Effects of human pa-pillomaviru s type-s pecific antis ens e oligonu cleotides on cervical cancer cells con taining papillomavirus typ e16.M ed S ci R es,1994; 22(7):511-513 收稿1997-12-17　修回1998-02-23 编辑　王雪萍 ?研究快报? 1株人成骨肉瘤细胞系的建立及特性观察* 杨彤涛　范清宇　张殿忠　裘秀春　刘树林　马保安　周　勇　(第四军医大学唐都医院骨科　西安710038) 关键词　成骨肉瘤　细胞系　核型分析 中图号　R738.1 0　引言　成骨肉瘤是人类最常见的原发性恶性骨肿瘤,死亡率、致残率很高.建立该肿瘤的细胞系,有助于对其深入研究,我们新建立了1株人成骨肉瘤细胞系,体外已传120余代,现报告如下. 1　方法 1.1　组织来源　标本取材于17岁男性患者1996-07-16的截肢,病理诊断为成骨肉瘤(软骨母细胞型). 1.2　建系过程　将无菌切取的肿瘤标本剪成直径1mm左右的小块,贴壁接种于培养瓶底,底面朝上,同时加入含200 mL/L小牛血清及常规量青、链霉素的RP M I1640培养液, 2h后翻转.3d后见有细胞晕生长,定期半量换液,反复清除成纤维细胞.1mo后1∶2传第1代.至第4代时,细胞渐迅速生长,以后平均4d～5d传1代. 1.3　细胞生物学特性鉴定 1.3.1　细胞形态　将生长于盖玻片上的单层细胞以950 mL/L乙醇固定,行HE染色,光镜观察.另将细胞以25 mL/L戊二醛固定,常规方法处理,行扫描和透射电镜观察. 1.3.2　组织化学染色　将不同代数的细胞,培养于盖玻片上,950mL/L乙醇固定,进行碱性磷酸酶(钙钴法)、酸性磷酸酶(刘氏法)染色及阿新蓝-PA S染色法显示胞浆中酸性、中性粘多糖. 1.3.3　乳酸脱氢酶同工酶测定　取对数生长期的第65代细胞3×106个,PBS中制成悬液,反复冻融,收集上清,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,NA D-PM S-N BT染色显带定量. 1.3.4　染色体分析　取第80代细胞按常规方法处理,G显 *国家自然科学基金资助项目　No.39330200 杨彤涛,男,27岁,硕士生,住院医师带后进行核型分析. 1.3.5　裸鼠移植　取第78代细胞5×106个/只,分别接种于8只BA L B/c裸鼠右臂皮下,3w k后处死裸鼠,取移植瘤,固定后光镜、电镜观察. 2　结果 2.1　细胞形态　相差显微镜下,细胞呈上皮样排列,单层贴壁生长,有重叠生长现象.多数为多边形,可见瘤巨细胞. HE染色见胞浆轻度嗜碱,核大,核浆比例异常,可见较多分裂相.透射电镜示胞浆内较多粗面内质网,核大畸形,核仁大.扫描电镜下见细胞表面满布微绒毛.电镜下未见支原体. 2.2　组织化学染色　碱性磷酸酶(A K P)染色胞浆内弥漫着色.酸性磷酸酶(ACP)染色为阴性.酸性及中性粘多糖染色部分细胞呈阳性. 2.3　同工酶谱　为5条带,乳酸脱氢酶(L D H)同工酶相对含量百分数L D3>L D2>L D4>L D1>LD5. 2.4　染色体分析　为亚三倍体核型,染色体干系数目为64～66,占81%,结构异常涉及16条染色体,有衍生染色体、易位、缺失等改变. 2.5　裸鼠移植　8只裸鼠全部成瘤,光镜下形态与原肿瘤相似,电镜下细胞形态与培养的细胞一致. 3　讨论　原发性恶性骨肿瘤中成骨肉瘤发病率最高,随着对其研究的不断深入,国内外相继建立了若干成骨肉瘤细胞系,大多数保留了其来源组织的特征[1,2].我们建立的细胞系为上皮样细胞,多数为多边形和三角形,单层贴壁生长,有重叠生长现象,可见瘤巨细胞及有丝分裂相.细胞核大,核浆比例异常.增殖迅速,染色体为亚三倍体型,有多种染色体异常表现.裸鼠移植成瘤率100%,成瘤时间短.符合恶性肿瘤细胞特征.该细胞系L DH同工酶谱与成骨肉瘤组织的L DH同工酶谱基本一致,L D3活性最高,经过1a余体外培养,连续传代120余次,性质稳定,表明其为1株新建成的成骨肉瘤细胞系,为成骨肉瘤的研究提供了新的实验材料.进一步的研究工作正在进行中. 参考文献 1张佩玉,王红霞,蒋海燕et al.人成骨肉瘤细胞系OS-732的建立及其特征的观察.中华骨科杂志,1985;5(5):100-104 2Kaw ai A.A new ly establish ed hum an osteosarcoma cell line with os teoblas tic pr op erthes.Clin Orthop,1990;259:256-266 收稿1998-01-16　修回1998-03-19 编辑　王小仲 264第四军医大学学报(J F our th M ilit M ed U niv)1998;19(3)

多发性骨髓瘤(MM)

多发性骨髓瘤（MM） 定义：多发性骨髓瘤（MM）是一种以骨髓中积聚浆细胞为特征的恶性肿瘤，可导致骨质破坏和骨髓衰竭。临床表现 多发性骨髓瘤起病徐缓，早期无明显症状，容易被误诊。主要有贫血、骨痛、肾功能不全、感染、出血、神经症状、高钙血症、淀粉样变等。 1.骨痛、骨骼变形和病理骨折 骨髓瘤细胞分泌破骨细胞活性因子而激活破骨细胞，使骨质溶解、破坏，骨骼疼痛是最常见的症状，多为腰骶、胸骨、肋骨疼痛。由于瘤细胞对骨质破坏，引起病理性骨折，可多处骨折同时存在。 2.贫血和出血 贫血较常见，为首发症状，早期贫血轻，后期贫血严重。晚期可出现血小板减少，引起出血症状。皮肤黏膜出血较多见，严重者可见内脏及颅内出血。 3.肝、脾、淋巴结和肾脏病变 肝、脾肿大，颈部淋巴结肿大，骨髓瘤肾。器官肿大或者异常肿物需要考虑髓外浆细胞瘤或者淀粉样变。 4.神经系统症状 神经系统髓外浆细胞瘤可出现肢体瘫痪、嗜睡、昏迷、复视、失明、视力减退。 5.多发性骨髓瘤多见细菌感染 亦可见真菌、病毒感染，最常见为细菌性肺炎、泌尿系感染、败血症，病毒性带状庖疹也容易发生，尤其是治疗后免疫低下的患者。 6.肾功能损害 50%～70%病人尿检有蛋白、红细胞、白细胞、管型，出现慢性肾功能衰竭、高磷酸血症、高钙血症、高尿酸血症，可形成尿酸结石。 7.高黏滞综合征 可发生头晕、眼花、视力障碍，并可突发晕厥、意识障碍。 8.淀粉样变 常发生于舌、皮肤、心脏、胃肠道等部位。 初始诊断检查 所有患者的初始诊断检查应包括病史、体检以及以下基线血液和生化检查，以便区分症状性和无症状性MM：完整的血细胞计数（CBC）（带分类计数和血小板计数）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐、血清电解质、血钙、白蛋白、乳酸脱氢酶（LDH）、β2微球蛋白。BUN和肌酐升高提示肾功能减退，而LDH水平有助于评估肿瘤细胞负荷。β2微球蛋白水平可反映肿块情况，现在被认为是评估肿瘤负荷的标准指标。 大部分患者存在血清蛋白，伴或不伴相关尿蛋白。 为评估骨髓浆细胞浸润情况，建议行骨髓穿刺检查或活检以定量和/或定性了解骨髓浆细胞异常情况。为评估溶骨性病变情况，建议行全面的骨骼影像学检查。 诊断分类 初步将患者分为冒烟型（无症状）骨髓瘤或活动性(有症状)骨髓瘤。 国际骨髓瘤工作组（IMWG）商定的冒烟型（无症状性）患者标准包括低浓度M蛋白（≥30g/L）和/或骨髓浆细胞浸润≥10%；但并无无贫血、肾功能衰竭、高钙血症或骨病变。 冒烟型（无症状性）骨髓瘤 冒烟型（无症状性）骨髓瘤为无症状及无器官或组织受损的病程阶段。Durie-SalmonI期骨髓瘤患者伴低M蛋白、无明显贫血、高钙血症及骨疾病，应属此类。无症状性冒烟型MM患者在未治疗情况下常呈慢性病程持续很多年。 有症状骨髓瘤 血/尿M蛋白：无血、尿M蛋白量的限制，大多数病例IgG>30g/L或IgA>25g/L或24h尿轻链>1g，但有些有症状MM患者低于此水平

多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤 骨髓瘤即多发性骨髓瘤,或称浆细胞肉瘤本病由Rustizky于1873年首先描述其病理并定名为多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma),简称MM。MM属造血系统肿瘤,是浆细胞异常过度增生所至的恶性肿瘤。异常浆细胞即骨髓瘤细胞浸润骨髓及软组织,产生M球蛋白,引起骨骼破坏、贫血、肾功能损害和免疫功能异常等。近年来,多发性骨髓瘤发病有增高趋势。发病率为2～3/10万,发病年龄多见于中老年,以50~60岁之间为多,40岁以下者较少见。男性多于女性,男女比约为2:1。 一、病因 本病病因不详,可能与下列因素有关。 1.临床上有些慢性感染及炎症,如慢性骨髓炎、慢性肝炎、肾盂肾炎、结核等可伴有浆细胞恶性增生。这可能是由于抗原长期慢性刺激网状内皮系统的结果,同时也提出任何导致网状内皮系统受慢性刺激后可能引起骨髓瘤的发生的可能。 2.根据动物实验观察,发现本病可能直接因病毒感染而引起,长期病毒感染可表现为网状内皮系统增生。 3.由于多发性骨髓瘤的发病率在从事放射线工作者较一般人群为高,电离辐射被认为是发病原因之一。自1950年至1976年对日本原子弹爆炸后幸存者的研究表明,接受空气量100cGy后本病发病率是正常人的 4.7倍。 4.多发性骨髓瘤与某些遗传因素有关。染色体异常在隐匿型多发性骨髓瘤为0;新诊断的活动型为18%;进展型为63%;最常见的染色体异常为[t(11;14) q13;q32)]。 关于多发性骨髓瘤的起源存在不同的假说,其中较为公认的是肿瘤前体细胞学说。认为骨髓中TdT-、CALLA+的前B细胞受到某种抗原的刺激,发生增殖、恶变,中间不经过sIg+B细胞阶段直接分化为CALLA+的前浆细胞,由彰浆细胞发生克隆性扩增,分化为恶性浆细胞,形成骨髓瘤。另外CALLA+细胞可以进入外周血,引起骨髓瘤的播散,形成多发性病灶。外周血中正常分化的前B细胞向静止期B细胞转化的过程中受到抗原刺激,发生恶变,重新返回接种于骨髓内,转变为肿瘤前体细胞,发生多发性骨髓瘤。 二、多发性骨髓瘤细胞学 1.骨髓瘤细胞的细胞动力学 多发性骨髓瘤早期即临床前期,细胞增殖时间少于72h,约经过1~2年的时间,临床上才渐现骨髓瘤的表现。而当其临床表现明显时,瘤细胞增殖时间逐渐延长,约为4~6个月。当肿瘤增殖达一定容积时,骨髓瘤细胞数可保持在水平线上数月甚至数年,多发性骨髓瘤细胞属于终末细胞,需靠具有克隆扩增和分化能力的处于较早分化时期的恶变B细胞增殖分化而补充。此期谓之细胞稳定期。研究表明,如在细胞稳定期杀灭骨髓瘤细胞,同时增殖期瘤细胞也随之增加。因此,治疗过程中应用细胞周期非特异性药物的同时,要加用细胞周期特异性的药物才能取得较好的疗效。 2.骨髓瘤细胞的单克隆免疫球蛋白合成率。 骨髓瘤细胞有巨大免疫球蛋白(M蛋白)的合成能力,在2~4小时内所产生的M蛋白相当于细胞内所含的免疫球蛋白总量。研究推算得出:每个骨髓瘤细胞约含M蛋白500万~10000万分子,每个骨髓瘤细胞每天合成M蛋白为2.5~38Pg。

TSA对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制为临床治疗

1.骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下： 步骤1:用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5% CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。 步骤2:取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～ 200ng·mL-1）的培养基继续培养24h。 步骤3:对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。步骤4:分别提取TSA浓度为0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。 分析回答： （1）与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移，其主要原因是。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是，细胞培养箱中保持5% CO2的作用是。 （2）步骤2中，设置0ng·mL-1TSA实验的主要目的是。 （3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是。 （4）图1所示结果表明。 （5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中基因过度表达会加速细胞凋亡。

33．（共10分）药物N会抑制菌种A的生长，但对菌种B无明显影响。为了验证上述结论，请根据以下提供的材料与用具，补充和完善实验思路，预测实验结果并进行分析讨论。 材料与用具：菌种A、菌种B、药物N溶液、培养液、培养瓶若干、显微镜等。 （要求与说明：不考虑加入溶液对体积的影响，细胞计数的具体操作过程不作要求，实验条件适宜） 请回答下列问题： （1）实验思路： ①取菌种A、菌种B，经稀释后得到菌液。在显微镜下进行计数，并记录。 ③将上述样品在适宜条件下培养，每隔一段时间，分别取上述培养瓶中的菌液， ▲。 ④▲。 （2）预测实验结果（用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示实验结果）： （3）分析与讨论： 菌种A与菌种B的质膜成分不完全相同。药物N能与胆固醇结合，改变质膜通透性，从而起抑制和杀菌作用。据此可推测药物N对菌种B无影响的原因是▲。33．（共10分） （1）②甲组：菌种A+培养液乙组：菌种A+培养液+药物N 丙组：菌种B+培养液丁组：菌种B+培养液+药物N（各1分） ③在显微镜下分别进行计数，并记录。（1分） ④对实验数据进行统计分析。（1分） 31．疟原虫是一种单细胞动物。它能使人患疟疾，引起周期性高热、寒战和出汗退热等临床症状，严重时致人死亡。 （1）在人体内生活并进行细胞分裂的过程中，疟原虫需要的小分子有机物的类别包括_____________________________________________________（写出三类）。 （2）进入血液循环后，疟原虫选择性地侵入红细胞，说明它能够_________________并结合红细胞表面受体。 （3）疟原虫大量增殖后胀破红细胞进入血液，刺激吞噬细胞产生致热物质。这些物质与疟原虫的代谢产物共同作用于宿主下丘脑的_______________中枢，引起发热。

实验一、骨髓瘤细胞的培养

实验一、骨髓瘤细胞的培养 骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同 一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。 常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653 等。 骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640, DMEM培养基。小牛血清的浓度 一般在10?20%,细胞的最大密度不得超106/ ml, 一般扩大培养以1 : 2稀释传代，每2? 3天传代一次。细胞的倍增时间为16?20小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴 壁生长,只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。 二材料： 1. 试剂： （ 1 ）培养基杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640 或DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配置方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um滤膜），分装，4 C保存。 不完全RPMI-1640培养基：RPMI-1640培养基原液96ml,100 X L.G.溶液1ml，双抗溶液1ml, 7.5% NaHCO溶液1-2ml , HEPES溶夜1ml。 不完全DMEM培养基：DMEM 13.37g,超纯水或四蒸水980ml, NaHCO3.7g , 100X L.G. 溶液10ml，双抗溶液10ml , 7.5% NaHCO溶液1-2ml，用1N HCl调试pH至7.2-7.4，过滤除菌，分装4C保存。 完全RPMI-1640或DMEM培养基：不完全RPMI-1640或DMEM培养基80ml，灭活小牛血清15-20ml ,用于骨髓瘤细胞SP2/0 和建株后杂交瘤细胞培养。 （2）小牛血清灭活：从-20 C冰箱取出小牛血清，室温自然融化，56C 30min即可充分灭活，分装小瓶（5ml/瓶）,-20 C冻存备用，尽量避免反复冻融。 （3）青、链霉素（双抗）溶液（100X ）取青霉素G （钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g或100万单位，溶于100ml灭菌超纯水或四蒸水中，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20 C 冻存。 2. 器材： 超净工作台、CQ恒温培养箱、普通冰箱、电子天平，药物天平、巴氏吸管、10ml吸管、100ml 细胞培养瓶、滴管、灭菌小瓶等 三方法： 细胞冻存及复苏 先用24 孔细胞培养板扩大骨髓瘤细胞或单克隆抗体细胞株, 当长满时, 再扩大到100ml 细胞瓶。当其处于对数生长期时，将细胞洗下，用细胞冻存液（含10% DMS0 40% FCS的DMEM培养基）将细胞悬浮，调配成1-3 X 106个/ml,每个细胞冻存管分装1ml，移至液氮罐口悬吊2小时或-70 C冰箱过夜，然后沉入液氮中。复苏时，从液氮中取出冻存管后迅速置入40C水浴中，在1min内融化，1500rpm离心5min,弃上清，用少量完全培养基轻轻悬浮细胞,移入24 孔板中培养。 四、细胞培养应注意事项 1. 细胞培养瓶、吸管：使用前要严格消毒,对于新购置或已经使用的玻璃器皿,一般先用先用0.1%

多发性骨髓瘤常见分子细胞遗传学异常及其意义

多发性骨髓瘤常见分子细胞遗传学异常及其意义多发性骨髓瘤是一种常见的浆细胞恶性肿瘤，重要的染色体与基因异常导 致疾病的进展，在多发性骨髓瘤中具有独立的预后判断价值。随着检测方法的更新及技术的进步，异常染色体与基因的检出率越来越高，主要包括13号染色体全部或部分缺失伴或不伴14q32/IGH的重排等染色体异常。异常染色体与基因的检测具有重要价值，可完善MM预后评估体系，指导临床个体化治疗并为新药开发提供新的靶点。 标签：多发性骨髓瘤；分子细胞遗传学；预后 1染色体数目异常 1.1超二倍体 MM患者超二倍体主要表现为1、3、7、9、11、13、15、17、18、19、21、22三体型[1]；另外，近年来国内也有人发现MM患者8号染色体三体，王晓炜等[2]应用荧光免疫表型和间期细胞遗传学（FICTION）技术对MM骨髓涂片进行8号染色体检测，9例MM患者中，发现8号染色体三体1例，这可能与应用FICTION技术提高了检测效率有一定关系。 1.2亚二倍体 MM患者亚二倍体主要表现为6、8、13、14、X、Y单体型为特征；其中13号染色体单体缺失及其部分缺失是目前研究较为广泛的染色体异常之一。 2染色体结构异常 2.113号染色体异常 13 号染色体部分或完全缺失是MM 最早发现的染色体异常，MM 中较常见，而且是MM预后及生存期预测的指标之一。13号染色体异常，特别是13单体（-13）和13号染色体长臂部分缺失（13q-）与MM预后的关系越来越受到重视。目前认为13号染色体上存在MM 抑癌基因，其缺失与疾病危重、疗效和预后密切相关。Pérez-Simón等[3]采用荧光原位杂交（FISH）方法分析了15 种不同染色体异常在常规剂量化疗患者中的预后价值，发现13号染色体缺失是最重要的预示生存期短的预后指标，但对治疗反应无影响。由于13q-的断裂点范围在13q11~13q14，RB1基因正好也于这个区域，因此有人推测13号染色体完全或部分缺失所致MM预后不良可能与RB1基因改变有关。 Chiecchio等[4]通过FISH技术对400例新发MM患者染色体检测发现，至少有一种染色体数目或结构异常者达99%，其中13号染色体缺失：单体缺失及部分缺失约占47%。Fonseca等[5]采用cig-FISH 技术在54%的MM患者中检测

骨肉瘤(osteosarcoma)

概述骨肉瘤（osteosarcoma）又称成骨肉瘤，由肉瘤性成骨细胞及其直接产生的骨样组织、新生骨构成，是原发性恶性骨肿瘤中最常见，恶性程度最高的骨肿瘤。易发生肺转移。本病以15-25岁发病者居多。70%以上的病人发生在股骨远端和胫骨近端、肱骨近端的干骺端。预后不良。病理改变骨肉瘤的主要组织成分为肿瘤性成骨细胞、肿瘤性骨样组织和肿瘤骨。其成分的多寡，随肿瘤性成骨细胞分化程度而异。分化比较成热者，肿瘤骨多，称为硬化性骨肉瘤，分化比较原始者，肿瘤骨少，称为溶骨性骨肉瘤。介乎二者之间者，即有不同程度的溶骨性和硬化性骨肉瘤。在肉眼观察下，骨肉瘤的性质颇不一致，有坚硬如象牙者（硬化性骨肉瘤），有脆软如肉芽易出血、瘤骨极少者（溶骨性骨肉瘤），有生长迅速而血不足，以致部分肿瘤坏死，形成含棕色或血性液体的囊肿者，有生长迅速而血运丰富，肿瘤组织含有极多的扩张血管和血安，以致肿瘤产生搏动和杂音，形成假性动脉瘤者。显微镜检查，肿瘤组织的成分亦复杂无常。在硬化性部分的切片中，可以发现不分层，无骨小管系统，排列杂乱、染色颇深的肿瘤骨小梁。肿瘤骨小粱间隙之中，可能有未被破坏的正常骨质存在，与肿瘤骨对比，更显出肿瘤骨小粱不服从生理力线原则的紊乱现象。在溶骨性部分的切片中，则可以发现肿瘤骨稀少或不存在，偶尔或有散在的骨样组织，但肿瘤性成骨细胞极多，分化原始，大小不一，胞浆多少不匀，胞膜不清，胞核大，染色深，分裂多。此外血管丰富，有成窦状者，其管壁系由肿瘤细胞所形成。上述两种显微镜下的不同组织象，可能存在千同一骨肉瘤中。此点说明，骨肉瘤一且发生，不论其为硬化性或溶骨性，恶性的程度不可能有绝大差别。除上述镜下所见外，尚可发现两种比较少见的细胞：一为肿瘤巨细胞，胞核多至3—10个，染色颇深，一为异物巨细胞，散在于肿瘤坏死部分或出血部分的周围。其形态与骨巨细胞瘤的巨细胞同。总的说，骨肉瘤的主要成分为肿瘤性成骨细胞，骨样组织和肿瘤骨。但也可能有一些恶性程度不等的软骨组织小岛，数量小，不能左右骨肉瘤的本质。因此，不应因软骨组织的出现，更变骨肉瘤的名称。骨肉瘤转移早而迅速，转移瘤几乎完全发现于肺部，通过肺部转移至其他器官者则罕见；局部淋巴结因肿瘤坏死可有增生扩大现象，但很少有转移瘤的存在。临床表现疼痛为早期症状，可发生在肿瘤出现以前，起初为间断性疼痛，渐转为持续性剧烈疼痛，尤以夜间为甚。恶性大的肿瘤疼痛发生较早且较剧烈，常有局部创伤史。骨端近关节处肿瘤大，硬度不一，有压痛，局部温度高，静脉扩张，有时可摸出搏动，可有病理骨折。全身健康逐渐下降至衰竭，多数病人在一年内有肺部转移。实验室及其他检查一、实验室检查贫血、白细胞计数升高或正常、血细胞沉降率增快、血清碱性磷酸酶增高。二、X线检查 1、骨松质和髓腔改变骨肉瘤较有特征的改变是骨质增生，其中以肿瘤性新骨形成为重要特点，掺杂有反应性骨质增生。X线表现为骨质硬化变白。干骺端骨松质和髓腔改变有以下几种：①均匀性毛玻璃样密度增高；②雾状、斑片状或团块状肿瘤新骨形成；③反应性骨质硬化；④骨质破坏。2、骨皮质改变早期骨质发生溶骨性破坏，骨密度降低，表现为筛孔状细条透光线。以后皮质表面变得凹凸不平，溶骨区瘤骨形成后骨质密度增高。3、骨膜反应①线样或葱皮样骨膜反应：线样者为一层很薄的骨膜新生骨平行于骨干，葱皮样者为很多层次。②垂直样骨膜反应：骨膜新生骨斜行或垂直于皮质骨，外缘密度较高。光滑整齐，边缘清楚。③Codman三角（袖口症）和日光放射现象。三、CT检查能准确显示肿瘤，平扫时表现为不同程度的骨质破坏，也可表现为不规则皮质增厚和骨硬化。骨膜增生表现为高密度，肿瘤侵犯髓腔使低密度的髓内组织密度增高并有蔓延趋势。如果形成跳跃性转移灶，则显示骨皮质中断。CT增强后扫描可清楚显示软组织边缘，并有利于显示肿瘤与附近大血管的关系。四、MRI检查其影像学特点取决于肿瘤组织中主要细胞类型和有无出血坏死。成骨型骨肉瘤在T1、T2加权图像上都表现为低信号。成软骨型T2加权图像上为高信号，其中局限性低信号区为软骨钙化的成分。成纤维型常有短T1、短T2的纤维特点，T1、T2加权图像上均为低信号。毛细血管扩张型骨肉瘤内含有较大的囊性血腔，T1、T2加权图像上都表现为低信号。髓腔内的病灶在T1加权

细胞株分类

细胞株 人胚肾细胞 293T CRL-11268? 肾 DMEM＋10％FBS 人肾上皮细胞系 293 肾 DMEM＋10％FBS 人肾上皮细胞系 293H 肾 DMEM＋10％FBS 人脐静脉内皮细胞 HUVEC 脐带静脉 ECM或 EGM-2 人胚肺成纤维细胞 HLF 胚胎；肺 MEM α(+)+10%FBS 人胚肺二倍体细胞 CCC-HPF-1 胚胎；肺 DMEM+ 10% FBS 人微血管内皮细胞 MVEC 微血管 DMEM+ 10%NBCS 人肝癌细胞 Hep G2 HB-8065? 肝细胞癌 DMEM＋10％NBCS 人肝癌细胞 BEL-7402 肝癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 鼠肝癌细胞 H22 （悬浮）肝癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 人肺腺癌 细胞 SPC-A-1 肺癌 RPMI 1640 + 10% FBS 人肺癌细 胞 A549 CCL-185? 肺癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 人肺癌细胞 GLC82 肺癌 人小细胞肺癌细胞NCI-H446 HTB-171? 肺癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 人肺鳞癌细胞 NC1-H460 肺鳞癌 RPMI 1640 + 10% FBS 鼠Lewis肺腺癌细胞（非小细胞） LLC 肺癌 RPMI 1640 + 10% FBS 人胃腺癌细胞（低分化） BGC-823 胃癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 人胃癌细胞 NCI-N87 CRL-5822? 胃癌 RPMI 1640 + 10% FBS 人胃癌细胞（未分化） HGC-27 胃癌 RPMI 1640 + 10% NBCS 人乳腺癌细胞 MCF-7 HTB-22? 腺癌，乳腺，胸水。 DMEM＋10％NBCS 人乳腺癌细胞 MDA-MB-435S HTB-129? mammary gland; breast DMEM＋10％NBCS 129&Template=cellBiology 人宫颈癌细胞 HeLa CCL-2? 宫颈腺癌 DMEM＋10％NBCS 人结肠癌细胞 CaCo-2 HTB-37? 结肠癌 DMEM＋10％FBS 人胰腺癌细胞 PANC-1 CRL-1469? 胰腺；胰管；上皮细胞癌 DMEM＋10％FBS 人恶性黑色素瘤细胞 A-375 CRL-1619? 皮肤；恶性黑色素瘤 DMEM＋10％NBCS 鼠黑色素瘤细胞 B16-luc 黑色素瘤 RPMI 1640 + 10% NBCS 人纤维肉瘤细胞 HT1080 CCL-121? 纤维肉瘤 MEM或 DMEM＋10％FBS 人原髓细胞白血病细胞 HL-60 （悬浮） CCL-240? 外周血；早幼粒细胞；急性粒－单核细胞白血病

内科学(第七版)造血系统疾病第十一章 多发性骨髓瘤

第十一章多发性骨髓瘤 多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是浆细胞的恶性肿瘤。骨髓瘤绌胞在骨髓内克隆性增殖，引起溶骨性骨骼破坏；骨髓瘤细胞分泌单株免疫球蛋白，正常的多株免疫球蛋白合成受抑，本周蛋白随尿液排出；常伴有贫血，肾衰竭和骨髓瘤细胞髓外浸润所致的各种损害。我国MM发病率约为1／10万，低于西方工业发达国家(约4／10万)。发病年龄大多在50～60岁之间，40岁以下者较少见，男女之比为3：2。 【病因和发病机制】 病因不明。有学者认为人类8型疱疹病毒(human herpesvirus-8，HHV-8)参与了MM的发生。骨髓瘤细胞起源于B记忆细胞或幼浆细胞。细胞因子白介素-6(IL-6)是促进B细胞分化成浆细胞的调节因子。进展性MM患者骨髓中IL-6异常升高，提示以IL-6为中心的细胞因子网络失调导致骨髓瘤细胞增生。 【病理生理和临床表现】 (一)骨髓瘤细胞对骨骼和其他组织器官的浸润与破坏 1．骨骼破坏骨髓瘤细胞在骨髓中增生，刺激由基质细胞衍变而来的成骨细胞过度表达IL-6，激活破骨细胞，导致骨质疏松及溶骨性破坏。 骨痛为常见症状，随病情发展而加重。疼痛部位多在骶部，其次为胸廓和肢体。活动或扭伤后剧痛者有自发性骨折的可能，多发生在肋骨、锁骨、下胸椎和上腰椎。多处肋骨或脊柱骨折可引起胸廓或脊柱畸形。骨髓瘤细胞浸润引起胸、肋、锁骨连接处发生串珠样结节者为本病的特征之一，如浸润骨髓可引起骨髓病性贫血。单个骨骼损害称为孤立性骨髓瘤。 2．髓外浸润①器官肿大如淋巴结、肾和肝脾肿大。②神经损害胸、腰椎破坏压迫脊髓所致截瘫较常见，其次为神经根受累。脑神经瘫痪较少见。多发性神经病变，呈双侧对称性远端感觉和运动障碍。如同时有多发性神经病变、

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析(一)

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析(一) 作者：陈翔，杨彤涛，马保安，范清宇’ 【关键词】骨肉瘤Establishmentofhumanosteosarcomacellsublineswithdifferentpotentialof metastasisandstudiesontheirbiologicalcharacteristics 【Abstract】AIM:Togethumanosteosarcomacellsubcloneswithdifferentpotentialofmeta stasis.METHODS:Wegotdifferentmonocellclonesbythelimiteddilutionmeth odfromthehumanosteosarcomacelllineSOSP9607.Afterpreliminaryscreenin gbyinvitroinvasionassay,weselectedtwocelllinesashighmetastasispotentialc ellsubclonesandthreecellsubclonesaslowmetastasispotentialcellsubclones. Weinoculatedthesesubclonesintonudemiceforthreecirclesandobtaineddiff erentmetastaticpotentialsubclones.Wetheninspectedtheirdifferentbiologic alpropertiesbytestsofcellgrowthcurveassay,chromosomenumber,softagarcl oningtechnique,flowcytometryandautometastasisinnudemice.RESULTS:We gotthetwosubcloneswiththedifferentmetastasispotential:lowpotentialsubc loneH9andhighpotentialsubcloneE10.Theyhadthesamehypotriploidkaryoty pewithhumanchromosomemorphology.E10hadfastergrowthspeedthanH9a ndtheartificiallungmetastasisrateofH9andE10innudemicewas10%and100% ,respectively.TherateofSphasecellcyclewasrespectively16.8%and21.0%.CO NCLUSION:Thesetwosubclonescomefromthesamemothercelllineandtheirdi

多发性骨髓瘤

第二十章多发性骨髓瘤 概述： 多发性骨髓瘤是一种主要侵及骨髓，导致骨质破坏的恶性浆细胞肿瘤。国内的流行病学统计资料较少，在欧美的发病率为2－4/10万，（近年来发病率有逐年增高的趋势）。好发于老年人，40岁以下约占2%，男女比例为1.6－3.0：1。 疗效短暂，现有治疗手段难以达到治愈。近年来随着新药出现，以及造血干细胞移植和移植后的维持治疗延长了疾病控制和生存，改善了生活质量。 第一节诊断： 一、临床特征： （一）区域性表现： 1.骨痛：呈游走性或间歇性，常由活动引起。病情进展 转为持续性剧烈疼痛：（其 2.骨骼肿块、病理性骨折：局部肿块多见于胸骨、肋骨、 颅骨、锁骨等扁状骨。病理性骨折多见于胸椎下段和 腰椎上段、肋骨、锁骨等部位。 3.髓外器官受侵：肝、脾、淋巴结多见。 4.

5.神经系统病变。 （二）全身性表现： 1. 2.贫血：（为正细胞正色素性贫血，少数合并白细胞 3.反复感染：为本病最主要死亡原因。肺部感染最常 见。多为革兰氏阴性杆菌。此外化脓性感染、泌尿系 感染、带状疱疹亦可出现。 4. （写症状） 5.淀粉样变：可引起舌肥大、心脏扩大、外周神经病变和皮肤苔藓样变。 二、辅助检查： （一）影像学检查： 1. X线检查的表现： ⑴溶骨性改变, 骨质缺损，如头颅可见典型圆形穿凿样溶骨性改变； ⑵弥漫性骨质疏松； ⑶骨质疏松基础上合并病理性骨折，多见于肋骨、腰椎等； ⑷骨硬化极少见，多为局限性改变。 2. MRI：用于脊髓压迫患者或可疑孤立性骨浆细胞瘤患者的

检查。 3. CT：可发现早期病变，也可用于髓外浆细胞瘤评估。（二）实验室检查: 1. 白细胞计数多数正常，分类应注意有无浆细胞，若>20%或绝对值>2×109/L即为浆细胞白血病。 2. 血沉：多数增快。 3. 血钙测定：10%～30%患者出现血钙增高。 4. 高尿酸血症: 大量瘤细胞分解引起，肾功能损害时更为显著。 5. 血清β2微球蛋白（β2—MG）：增高的水平与肿瘤的活动 程度成正比，与疾病的预后、疗效及病情进展有关。6.血清蛋白电泳和免疫球蛋白测定： 蛋白电泳球蛋白区可见窄底高峰的单株Ig(即M蛋白)，系因某种Ig呈单株性增高而其它Ig合成受抑，水平低于正常所致。免疫电泳可确定异常Ig的种类和含量，如IgG、IgA、IgD、IgE、IgM 及轻链κ或λ型。偶有双株型或非分泌型。 7.尿本－周蛋白：约90%患者尿浓缩法可查出阳性。 三、多发性骨髓瘤的组织学类型： 浆细胞骨髓瘤 非分泌型骨髓瘤

中国多发性骨髓瘤诊治指南(2020年修订完整版)

中国多发性骨髓瘤诊治指南（2020年修订完整版） 摘要 多发性骨髓瘤（MM）是一种克隆浆细胞异常增殖的恶性疾病，在很多国家是血液系统第2位常见恶性肿瘤，多发于老年，目前仍无法治愈。随着新药不断问世及检测手段的提高，MM的诊断和治疗得以不断改进和完善。本次指南修订中增加了达雷妥尤单抗联合治疗部分及相关注意事项，在难治复发性MM部分增加了嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，强调自体造血干细胞移植对于适合移植患者仍然具有不可替代的地位。 多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种克隆浆细胞异常增殖的恶性疾病，在很多国家是血液系统第2位常见恶性肿瘤[1,2]，多发于老年，目前仍无法治愈。随着新药不断问世及检测手段的提高，MM的诊断和治疗得以不断改进和完善。本次指南修订中增加了达雷妥尤单抗联合治疗部分及相关注意事项，在难治复发性MM部分增加了嵌合抗原受体T 细胞（chimeric antigen receptor T cell，CAR-T）免疫疗法，强调自体造血干细胞移植（autologous hematopoietic stem cell transplantation，ASCT）对于适合移植患者仍然具有不可替代的地位。每2~3年1次的中国MM诊治指南的更新对于提高我国MM的诊治水平具有重要意义。 临床表现

MM常见的症状包括骨髓瘤相关器官功能损伤的表现，即"CRAB"症状[血钙增高（calcium elevation），肾功能损害（renal insufficiency），贫血（anemia），骨病（bone disease）]以及继发淀粉样变性等相关表现。 诊断标准、分型、分期 一、诊断所需的检测项目（表1[3]） 对于临床疑似MM的患者，应完成基本检查项目。在此基础上，有条件者可进行对诊断病情及预后分层具有重要价值的项目检测。 二、诊断标准 综合参考美国国家综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network，NCCN）及国际骨髓瘤工作组（International Myeloma Working Group，IMWG）的指南[4]，诊断无症状（冒烟型）骨髓瘤和有症状（活动性）骨髓瘤的标准如下。 （一）无症状（冒烟型）骨髓瘤诊断标准（需满足第3条+第1条/第2条）

多发性骨髓瘤的_护理

多发性骨髓瘤 多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM）为发生于B淋巴细胞的恶性浆细胞病。好发于中老年为40岁以上，但近年发病率有增高及发病年龄有提前趋势。本病误诊率很高，患者可因发热、尿改变、腰腿痛被误诊为呼吸系统感染、肾炎、骨病而延误病情。在诊治中应予足够重视。常见症状：骨痛，骨骼变形，病理骨折，贫血，出血，肝脾，淋巴结，肾脏病变，神经系统症状，感染，肾功能损害，高粘滞综合征，淀粉样变。 1疾病病因 病因与发病机制不清楚。可能与电离辐射、慢性抗原刺激、EB病毒或卡氏肉瘤相关的疱疹病毒感染诱发C-MYC、N-RAS或K-RAS或H-RAS等癌基因高表达有关。也可能与一些细胞因子有关，IL-6为多发性骨髓瘤的生长因子。 2临床表现 MM的临床表现除贫血、感染、出血血液病的常见临床表现外，可有骨痛（重者骨折）、蛋白尿（甚至尿毒症）、高凝状态或静脉血栓等其它临床表现。 临床上MM的误诊率高达40-50%，引起误诊的常见临床表现如下： 一、感染 由于正常免疫球蛋白减少，异常免疫球蛋白增多但无免疫活性；白细胞减少、贫血及放化疗等影响正常免疫功能，故易于反复感染。患者可以发热作为首发症状就诊。易发生上感、肺炎等呼吸道感染或泌尿系统感染，女性患者更易于发生泌尿系统感染。在病程晚期，感染是致死的主要原因之一。 故对于中老年患者反复发生感染，不应仅局限于抗感染治疗，应在抗感染治疗的同时，积极寻找是否有原发病。若患者合并有骨痛、贫血、出血等应考虑到本病的可能。 二、骨髓瘤骨病 骨痛和溶骨性骨质破坏是本病的突出临床表现。骨痛部位以腰背部最多见，其次为胸骨、肋骨和下肢骨骼。 由于本病患者常有严重骨质疏松，常在稍用力或不经意情况下即可发生病理性骨折，可造成的机械性压迫引起神经系统症状，严重者造成截瘫。若截瘫时间过久即使经过有效治疗，患者也很难恢复行走，极影响患者的生存质量。 也可出现骨骼肿物，瘤细胞由骨髓向外浸润骨质、骨膜及临近组织形成肿块。 局限于一个部位的孤立性浆细胞瘤较少见，最终可演变为多发性骨髓瘤。 X线检查在本病诊断中具有重要意义。阳性病变部位主要在颅骨、骨盆、肋骨、脊椎骨，也可见于四肢骨。典型表现为以下三种：①穿凿样溶骨性病变，为多发性类圆形透亮区，为本病的特殊X线表现。以颅骨、骨盆最易发现。②弥漫性骨质疏松。③病理性骨折，最常见于下胸椎及上腰椎，也见于肋骨等处。对疑似病例可行核磁共振检查以明确溶骨性病变的部位。 患者可因骨痛或腰腿痛不予重视，或就诊于骨科，被误诊扭伤、骨折、骨结核或骨肿瘤而延误病情。 故对于中老年患者严重骨质疏松或发生骨折的患者，在诊断时应考虑到本病。注意查血免疫球蛋白和血清蛋白电泳等以早期明确诊断。 常见影像学检查对MM患者的综合诊断价值依次为：PET-CT>MRI(核磁共振) >CT>X线检查。 三、骨髓瘤肾病 肾脏病变为本病常见而重要的病变。临床表现以蛋白尿最常见，其次为血尿。晚期可发展为慢性肾功能不全或尿毒症，为本病致死的主要原因之一。 国外研究发现，MM肾病患者在病理上肾小球病变较轻，而小管-间质病变严重，故患者临床上很少出现高血压。

多发性骨髓瘤的诊断标准

多发性骨髓瘤的诊断标准 识别多发性骨髓瘤的诊断标准，让我们为治疗做准备。多发性骨髓瘤(MM)为发生于B淋巴细胞的恶性浆细胞病。好发于中老年，但近年发病率有增高及发病年龄有提前趋势。本病误诊率很高，患者可因发热、尿改变、腰腿痛被误诊为呼吸系统感染、肾炎、骨病而延误病情。那么，多发性骨髓瘤都有哪些诊断标准呢?现在就让我们专家来为大家介绍一下，希望能为大家带来帮助! 现代中医血液肾病医院专家指出，多发性骨髓瘤的诊断标准有如下几种： 一、常规检查 骨髓：出现一定比例的异常浆细胞(骨髓瘤细胞主要为原始浆细胞或幼稚浆细胞)或组织活检证实为骨髓瘤细胞。血清中出现大量单克隆免疫球蛋白(单克隆免疫球蛋白可在血清蛋白电泳的γ区或β区或α2区出现一窄底高峰，又称M蛋白)或尿单克隆免疫球蛋白轻链(即尿本周氏蛋白);无其他原因的溶骨性病变或广泛骨质疏松。

二、鉴别诊断 1.反应性浆细胞增多症：见于结核、伤寒、自身免疫病等，一般骨髓浆细胞不超过10%，且均为成熟浆细胞。 2.其他产生M蛋白的疾病：诊断多发性骨髓瘤的方法要科学准确，慢性肝病、自身免疫病、恶性肿瘤如淋巴瘤等可产生少量M蛋白。 3.意义未明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)：血清中M蛋白低于30g/L，骨髓中浆细胞低于10%，无溶骨性病变、贫血、高钙血症和肾功能不全。M蛋白可多年无变化。约5%的患者最终发展为多发性骨髓瘤。 4.骨转移癌：不同的多发性骨髓瘤患者就要采用不同的方法进行治疗，还需要通过正确的检查才可以确定治疗方法，多伴成骨形成，溶骨性缺损周围有骨密度增加，且血清碱性磷酸酶明显升高。有原发病灶存在。 三、医学分析 1.免疫分型：用患者骨髓进行检查，CD10、CD19、 CD20等B细胞标记单抗、 CD38 、CD138浆细胞标记单抗表达增高。 2.细胞遗传学检查：多了解有关多发性骨髓瘤疾病的常识，会让人们把预防工作做到位，远离多发性骨髓瘤才不会受到伤害，多表现为14q+、del(14)、t(11;14);

多发性骨髓瘤患者外周血与骨髓中瘤细胞的检测及临床意义.

多发性骨髓瘤患者外周血与骨髓中瘤细胞的检测及 临床意义 [ 08-03-07 16:50:00 ] 编辑：studa20 作者：蒋元强，李建勇，吴雨洁，杨慧，沈云峰，陈丽 娟，徐卫，钱思轩，吴汉新，陆化，盛瑞兰 【摘要】本研究探讨多发性骨髓瘤（MM）患者的循环骨髓瘤细胞 （circulating myeloma cells, CMC）和骨髓骨髓瘤细胞(marrow myeloma cells, MMC)的相关性及其临床意义。采用四色流式细胞术对55例MM患者同时检测CMC和MMC的百分率，并结合患者的β2微球蛋白（β2-MG）、血浆白蛋 白（Alb）水平、染色体核型、肾功能等预后相关指标进行系统分析。将患者分成4组：A组为同时检测到CMC和MMC患者；B组为仅检测到MMC患者；C组为 仅检测到CMC患者；D组为未检测到瘤细胞患者。结果发现：与其他各组相 比，A组的β2-MG和肌酐浓度显著增高，白蛋白水平明显低下。就上述预后因 素而言，在检测到与未检测到骨髓瘤细胞患者之间，差异有统计学意义。初 发、复发/难治患者的CMC和MMC百分率明显高于部分缓解和完全缓解的患者。骨髓瘤患者CMC与MMC显著相关。结论：骨髓瘤患者CMC和MMC百分率不仅反 映肿瘤负荷，而且预示病情进展，特别是同时检测到CMC和MMC的多发性骨髓 瘤患者。 【关键词】多发性骨髓瘤；骨髓瘤细胞；循环骨髓瘤细胞；骨髓骨髓瘤细胞 Detection of Circulating and Bone Marrow Myeloma Cells in Patients with Multiple Myeloma and Its Clinical Significance AbstractThis study was aimed to investigate the correlation between circulating myeloma cells (CMC) and bone marrow myeloma cells (MMC) in patients with multiple myeloma (MM)and its clinical significance. Four-color flow cytometry was used to detect the percentage of CMC and MMC in 55 patients with MM. Other prognosis-associated factors such as β2 microglobulin (β2-MG), serum albumin (Alb), chromosomal abnormalities and renal function were simultaneously analyzed. The patients were divided into four groups: group A, in which CMC and MMC were simultaneously detected; group B, in which only MMC were detected; group C, in which only CMC were detected; group D, in which no myeloma cells were detected in peripheral blood or bone marrow. The results showed that the concentrations of β2-MG and creatinine were significantly increased and Alb markedly decreased in group A as compared with other groups. Statistical differences existed in the above-mentioned factors between patients with myeloma cells detected and not detected. The percentages of CMC or MMC in newly diagnosed, refractory and relapsed