不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析(一)

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析(一)

作者：陈翔，杨彤涛，马保安，范清宇’

【关键词】骨肉瘤Establishmentofhumanosteosarcomacellsublineswithdifferentpotentialof metastasisandstudiesontheirbiologicalcharacteristics

【Abstract】AIM:Togethumanosteosarcomacellsubcloneswithdifferentpotentialofmeta stasis.METHODS:Wegotdifferentmonocellclonesbythelimiteddilutionmeth odfromthehumanosteosarcomacelllineSOSP9607.Afterpreliminaryscreenin gbyinvitroinvasionassay,weselectedtwocelllinesashighmetastasispotentialc ellsubclonesandthreecellsubclonesaslowmetastasispotentialcellsubclones. Weinoculatedthesesubclonesintonudemiceforthreecirclesandobtaineddiff erentmetastaticpotentialsubclones.Wetheninspectedtheirdifferentbiologic alpropertiesbytestsofcellgrowthcurveassay,chromosomenumber,softagarcl oningtechnique,flowcytometryandautometastasisinnudemice.RESULTS:We gotthetwosubcloneswiththedifferentmetastasispotential:lowpotentialsubc loneH9andhighpotentialsubcloneE10.Theyhadthesamehypotriploidkaryoty pewithhumanchromosomemorphology.E10hadfastergrowthspeedthanH9a ndtheartificiallungmetastasisrateofH9andE10innudemicewas10%and100% ,respectively.TherateofSphasecellcyclewasrespectively16.8%and21.0%.CO NCLUSION:Thesetwosubclonescomefromthesamemothercelllineandtheirdi

fferencemainlyliesinthedifferentmetastaticphenotype.Thisstudywillhelpthe screeningofmetastasiscorrelatedgene,thestudyofthemetastaticmechanism andclinicalstudyofosteosarcoma.

【Keywords】osteosarcoma；neoplasmmetastasis；cellsubclone；biologicalspecialties

【摘要】目的：获得不同转移潜能的骨肉瘤细胞株.方法：从我室建立的人成骨肉瘤细胞系SOSP9607中通过有限稀释法获得不同的单细胞克隆，经过侵袭试验初筛后获得5株转移潜能不同的细胞株，再通过裸鼠体内连续传代法筛选出具有不同转移能力的细胞系.并利用细胞生长曲线测定，软琼脂克隆形成试验，流式细胞仪，裸鼠体内自发转移试验分析了他们的生物学性质.结果：获得两株转移潜能不同的骨肉瘤细胞株.其中,H9为具有低转移潜能的骨肉瘤细胞株,E10为具有高转移潜能的骨肉瘤细胞株，其染色体众数分布特征与母系SOSP9607基本相似，保持人类染色体核型；所至皮下移植瘤及肺转移瘤均符合人成骨肉瘤组织学特征，它们具有差异明显的体外生长速度，软琼脂克隆形成率H9（22±5）明显高于E10(98±12)，裸鼠体内试验性自发肺转移率分别为10%和100%，流式细胞仪测定H9和E10的S期细胞分别为16.8%和21.0%.结论：这两株细胞株来源于同一亲本，他们之间的差异集中在转移表型上，为今后利用分子生物学的方法筛选出转移相关基因从而为成骨肉瘤的转移机制及临床研究奠定基础.

【关键词】骨肉瘤；肿瘤转移；细胞株；生物学特性

0引言

肿瘤转移是一系列步骤组成的，包括侵袭周围组织，延血管或淋巴管运行、在靶器官上增殖等.自Fidler〔1〕提出肿瘤转移异质性概念后，国内外已相继有一些实验室建立了黑色素瘤，前列腺癌，肺癌的不同转移潜能的细胞亚系〔2-4〕.但从人骨肉瘤细胞中分离出具有不同转移潜能的肿瘤转移亚群的报道却不多见，这在一定程度上限制了对骨肿瘤转移机制的深入研究.为了在分子水平对其进行比较研究，获得具有相同的遗传背景不同转移潜能的肿瘤细胞株十分重要.

1材料和方法

1.1材料

成骨肉瘤细胞系SOSP9607细胞系由第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所实验室建立；RPMI1640(Gibco,USA),胰蛋白酶（华美生物工程公司）；胎牛血清与小牛血清（兰州民海生物制品公司）；细胞培养瓶与细胞培养板（Nunc，USA）；基底膜胶（北京大学医学部细胞中心）；侵袭小室（MiliporePI8P01250，USA）；流式细胞仪（第四军医大学免疫教研室提供）；BALB/cnu/nu裸小鼠（上海思莱克动物试验有限公司）；琼脂（Spain兰州民海生物制品公司）.

1.2方法

1.2.1SOSP9607的克隆化分离培养SOSP9607骨肉瘤细胞至对数生长期，用2.5g/L胰酶消化，倒置显微镜下记数，梯度稀释至4.6mL含230个细胞（每0.1mL含5个细胞），加入96孔板前36个孔，每孔0.1mL.