人成骨肉瘤细胞系MG-63“Holoclone”样单克隆的分离及其成骨分化程度的鉴定

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胞生 长 曲线 。 13 3 软 琼脂 集 落 形 成 试 验 取 3 %保 温 的不 同 .. 7 密度 的细 胞 悬 液 9 4 m 移 人 小 烧 杯 中, 入 5 ℃ . l 加 0
5 %琼 脂 0 6m , 速混 匀 , 即浇 入 铺 有 底 层 琼 脂 . l迅 立
物表 达更 趋近 于未 分化 状态 。
形成 能力 和更 强 的粘 附能 力 [2。其 成 骨 分 化 标 志 13 ,
13 ̄ , 续 计 数 7 d 绘 制 生 长 曲 线 。采 用 C l 0 L连 / , e l
Cutg t ( C S分析骨肉瘤细胞增殖 。每组取 o i 一 CK) nn K 8 i 6 复 孔 , 培 养 板 移 人 C ' 箱 中 , 3 ℃ , % 个 将 0孵 在 7 5 c 2 9 %湿度 条 件 下 , 养 2 。每 孔 加 C K 8 o及 5 培 4h C .
1 3 2 细胞增 殖率 测 定 ..
用 9 : 板 接种 细胞 数 为 6L  ̄
讲都 是 一个异 质 性 的肿 瘤 , 其 一 直 就 采 用 间 充质 而 的分 化标 准来 进 行分 级 。尽管 目前 在 医学研 究 和外 科手 术上 都取 得 了长 足 的进 步 , 对 于高 危 骨 肉瘤 但
流式 细胞 仪 分 析 , 波 长 为 4 8n 、0 v氩 离子 在 8 l 30 m n 激光 条件 下 , 每份 样 品检测 1 0/ J ×14m 个细胞 。
13 5 R —C 将 选 定 细胞 株 分 别 接 种 2 . . TP R 4孔 板 ,
6 细胞在 9 孔板 中稀释成 每孔含 0 5 个细胞 , 3 6 . —1 在克 隆化 后 3—5 d选 出仅 含 有 单 个 细 胞 生 长 的并 生长 成完 全克 隆 的孔 进 行 标 记 , 细胞 增殖 至孔 面 待 积 13时 ( / 即细 胞数 超过 60个 ) 将细 胞移 至 2 0 , 4或
有 限公 司 C iaD P hn E C鼎 国生 物科 技有 限公 司 C ia hn
Tio Ivt gnUS T K _aR - C t a R a a r l n io e A a a T P R KiT Ka aJp n z r R
13 4 细 胞周 期 检 测 ..
①取 传 代 生 长 良好 的对 数
生长 期 细胞 , . 5 0 2 %胰 酶 消 化 收 集 细 胞 。加 入 4C  ̄
预 冷 的 7 % 乙醇 固定 2 , 5 4 h 预冷 P S洗 两 次 , 0 0 B 1 0 rm离心 5 mn 调 整 细 胞 浓 度 为 1 0/ L p i, ×16m 。加 入 0 5r 碘 化 丙 啶 ( 0t / L , ℃避 光 染 色 3 i。 . n l 5 gm ) 4  ̄ 0m n
孙树 东 , 娄 楠 王 , 岩 赵 建武 ,
(. 1吉林大学第二 医院 骨科 , 吉林 长春 104 ;. 30 12 吉林 大学中 日联谊医 院 骨科 ;
3 吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 基 因诊 疗 中心 ) .
骨 肉瘤 无论 从 临床 角度 还是 分子 生物 学 角度来
试剂 1 l放 人 c 2 箱 中孵 育 2h 酶 标 仪 波 长 0 , o孵 ,
4 0n , 5 / 读取 光 密 度 O n D值 。记 录结 果 ( 细胞 O D值

细 胞孔 O D值 一清 零组 O D值 ) 。以不 同单 克 隆亚
系为 横坐 标 , 细胞增 殖 百 分 率 ( 为 纵 坐标 ( 0h %) 以 增值 率作 为 10 )使 用 Mioo xe软件 绘制 细 0% , c sfE clቤተ መጻሕፍቲ ባይዱr t
的死 亡 率 仍 然 停 滞 在 3 %到 5 % , 如 何 针 对 其 0 0 而 近年 来 已有学 者 通 过 骨 肉瘤 的研 究 , 用 单 细胞 克 使 隆筛选 的方 法 , 图得 到 高 侵 袭 , 致 瘤 的 细 胞 亚 以 高 群 。而 我们采 用 先分 离得 到 hl l e 通过 多个 成 oc n后 oo 骨细 胞分 化标 志 物 的检 测 , 到 高侵 袭 及 高致 瘤 的 得 骨 肉瘤 细胞株 。并 对这 些 骨 肉瘤细 胞株 进行 了一 系 列 的 鉴 定 试 验 。 而 通 过 观 察 我 们 发 现 能 够 形 成 “ o c n” hl l e 的恶 性 肿 瘤 细 胞 是 肿瘤 中 的真 正 致 瘤 部 oo 分, 而这 些细胞 株形 成 的克 隆更 小 , 具有 很高 的克 隆
隆。
人 成 骨 肉 瘤 细 胞 MG6 购 自 A C 。 高 糖 -3 TC
D M( . ME ME H D M)Gbc S 优 等 胎 牛 血 清 ( B ) ii U A o F S H c n S yl eU A胰 酶 P m g S M O天 佳生 物科 技 o o r eaU A D S
1 材 料和 方法
1 1 材 料 .
( 浓度 为 0 3 . %)的 2 培 养 板 中 , 孔 加 0 8m , 4孔 每 . l 置 室 温 使 琼 脂 凝 固 , 孑 细 胞 数 为 10 接 种 1 每 L 0, 4d 后, 计算 克 隆数 , 个 集 落 细 胞 数 ≥5 为 1 克 每 0时 个
中国实验诊 断学
21 00年 1 月 1
第l 4卷
第 1 期 1
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1 9 —— 76 ・ — —
文 章 编 号 :07—48 (00 1 —16 —0 10 272 1)1 79 3
人 成 骨 肉瘤 细胞 系 MG 6 “ ooln " 单 克 隆 的 一3 H lc e 样 o 分 离 及 其 成 骨分 化 程 度 的鉴定
M re 10 aa aa a N 聚 合 酶 T K R akr 50 T kr Jp T q D A a n AAA JpnC k8碧 云天 生物研 究 所 C IA aa C . HN 1 2 克 隆筛选 . 采用 有 限稀 释 法 , 对 数 生 长 期 的骨 肉瘤 M 将
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