骨桥蛋白在骨肉瘤中表达及其与侵袭转移关系
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ｔｏ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１１００４２，Ｃｈ／ｎａ． ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ
ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ（ＯＰＮ）ｉｎ
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ｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ
ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｅｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ２ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
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ａｎｄ ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ
ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ａ ｆｏｒｍｕｌａ
ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．
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ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｒｅｌａｔｉｎｇ ｇｅｎｅ，ｍｉｇｈｔ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ
ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐａｔｈｗａｙｓ．ＯＰＮ ｃｏｕｌｄ
ｂｅ ａ
ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｊｃｕｒｒｅｎｅｅ
采用Ｘ２检验方法进行。Ｐ＜ｏ．０５有统计学意义。
２结果
２．１
ＯＰＮ在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达情况 ＯＰＮ在骨肉瘤中的表达部位均在骨肉瘤细胞浆及细胞
膜，染成棕色及棕褐色颗粒为阳性，多呈弥漫状分布，偶见呈 灶性分布。未染成棕色为阴性。骨软骨瘤中亦可见ＯＰＮ呈 细胞浆及细胞膜表达。ＯＰＮ在骨肉瘤中表达阳性率为 ７６．７％，并且多表达为阳性及强阳性，在骨软骨瘤中为 ２２．２％，二者相比差异有显著意义（表１）。
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｏｓｔｅｏｓａｒｃⅪｍａ；ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ；ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｍｏｄｅｍ 【摘要】
Ｏｎｅｏｌｏｇｙ
２０１０，１８（１１）：２２５１—２２５３
目的：探讨骨桥蛋白（ＯＰＮ）在骨肉瘤组织中的表达情况及其与骨肉瘤远处转移的相关性，探索建立
数学模型预测骨肉瘤远处转移的可行性。方法：免疫组化Ｓ—Ｐ法检测ＯＰＮ在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达， 单因素分析ＯＰＮ表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系，并进一步利用多因素回归分析模型分析骨肉瘤远 处转移相关因素，建立数学预测模型。结果：ＯＰＮ在骨肉瘤中表达阳性率为７６．７％，在骨软骨瘤中为２２．２％， 二者间有显著性差异。ＯＰＮ与骨肉瘤ｌ临床病理特征的分析结果提示，ＯＰＮ的表达与患者性别、年龄、病理分 型无关，与临床分期和肺转移显著相关。随着临床分期程度的增高，肺转移的发生，ＯＰＮ表达呈增高趋势，组 问有显著性差异。单因素分析发现肿瘤体积、ＡＬＰ水平、临床分期、新辅助化疗、ＯＰＮ与骨肉瘤肺转移有相关 性。而多因素回归分析筛选出２项有统计学意义的独立因素：临床分期和新辅助化疗，由此建立Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归 方程。结论：ＯＰＮ可能是判断骨肉瘤恶性程度及预后的指标，多因素回归分析提示ＯＰＮ作为肿瘤转移相关基 因可能通过多种途径参与恶性肿瘤的转移。ＯＰＮ可成为预测肿瘤预后的指标，用于监测肿瘤复发转移。 【关键词】骨肉瘤；ＯＰＮ；转移 【中图分类号】Ｒ７３８．６ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４９９２．２０１０．１１．６５ 【文章编号】１６７２—４９９２一（２０１０）１１—２２５ｌ—０３ 骨肉瘤是青少年时期最常见的原发骨恶性肿瘤，随着新 【收稿日期】 【修回日期】 【作者单位】 辅助化疗和保肢手术的开展，骨肉瘤的生存率得到明显提 高。但骨肉瘤的转移问题仍然是影响其疗效的主要原因，一
ＯＰＮ表达与骨肉瘤临床病理特征的关系 骨肉瘤组织中ＯＰＮ表达与临床病理特征的分析结果提
示，ＯＰＮ的表达水平仅与临床分期和肺转移显著相关，而与 患者性别、年龄、肿瘤体积、病理分型等临床病理因素无关。
万方数据
・２２５３・
瘤转移相关基因或转移基因。已发现在肺癌、乳腺癌、食管 癌、肝癌、前列腺癌等¨４ ｏ多种肿瘤组织中表达增高，ｌ酊且发 现在很多肿瘤中ＯＰＮ的表达增高与肿瘤的复发转移有 关¨”“Ｊ。近年来，随着肿瘤分子生物学的发展，人们已经认 识到细胞癌变主要是由于遗传信息发生改变所致，致癌基因 的激活表达，抑癌基因的丢失或功能丧失，导致了细胞癌变， 而肿瘤转移基因与转移抑制基因的异常表达是肿瘤远处转 移的一个重要原因。针对肿瘤转移基因ＯＰＮ及其受体的干 预，可能成为防治肿瘤转移的潜在靶点。同时，ＯＰＮ也可能 是肿瘤远处转移和预后的预测分子。目前，关于ＯＰＮ的研 究大多集中在上皮源性恶性肿瘤中。而有关ＯＰＮ在骨肉瘤 组织中表达的相关实验研究尚未见报道。 本研究应用免疫组化方法研究ＯＰＮ在骨肉瘤组织与良 性骨软骨瘤组织中的表达，结果提示ＯＰＮ在骨肉瘤中高表 达，并且多表达为阳性及强阳性，与良性骨肿瘤骨软骨瘤比 较，两者间有显著性差异。结果证实ＯＰＮ与骨肉瘤的恶性 转化以及肿瘤的侵袭转移过程等恶性生物学行为相关。另 外，在临床病理资料的分析中，发现ＯＰＮ表达与临床分期有 关，骨肉瘤临床分期越晚，ＯＰＮ的表达水平越高，提示ＯＰＮ 的表达程度与病期进展相一致。骨肉瘤中ＯＰＮ的表达可作 为评估预后指标的结果，预示ＯＰＮ高表达时肿瘤有较高的 侵袭性和提示不良预后。 骨肉瘤的临床分期主要是由原发瘤的大小、区域淋巴结 状况以及远处转移的情况所决定的，对于骨肉瘤的治疗方案 的决定、预后评价十分重要。新辅助化疗对于骨肉瘤的疗效 不可替代的地位已经确立。本研究抽取的６０例病人中，有 ２３例未坚持系统化疗，约占全部病例的３８．３％。在随访与 病例分析中发现，新辅助化疗的不良反应及经济原因是骨肉 瘤患者不能坚持完成规范治疗的主要原因之一。由于新辅 助化疗不良反应个体化差异的存在，少数患者因明显不良反 应而被迫停止治疗，且由于化疗疗程长，依从性不好的患者 亦可能中断治疗；有些患者则因自身文化水平的限制，对疾 病和治疗的认识不够充分，也可能中断治疗。坚持完成骨肉 瘤综合治疗是提高骨肉瘤患者生存率的有效方法之一，由此 加强对骨肉瘤知识的宣传和教育普及必将有助于骨肉瘤综 合治疗的完成，而个体化治疗以及生物靶向治疗的出现和发 展将提高现有治疗手段的有效性，减轻不良反应。综上，研 究结果提示，骨肉瘤组织中ＯＰＮ呈高表达，明显高于正常骨 组织及骨软骨瘤组织，提示ＯＰＮ可能在骨肉瘤侵袭转移的 恶性转化过程中，促进了骨肉瘤的发生和发展。骨肉瘤远处
ｔｏ
ｐｒｅｄｉｃｔ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｌｉｎｉｃｏｐａｔｈ－
ｒａｔｅｓ
ｏｌｏｇｉｅａｌ ｆａｃｔｏｒｓ
ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
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随着骨肉瘤临床分期程度的增高，肺转移的发生，ＯＰＮ染色 呈逐渐增强趋势，组间比较差异有统计学意义（表２）。
表Ｉ臂肉癯及骨软骨瘤中ＯＰＮ的表达
Ｔａｂ．１ ＯＰＮ
ｅｘｐｎｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｆｌａｒｃｏｍａ
ｎ
ａｎｄ ｏｓｔｅｏｅｈｏｎｄｍｍａ
ｘ２＝１９．５１，Ｐ＝ｏ．００００１
表２骨肉瘤ＯＰＮ表达与临床病理资料的相关性
ＯＰＮ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｕｎｉ—ｖａｒｉａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａ ｍｏｄｅｌ
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ｔｏ
ｅｓｔｅｅｓａｒｃｏｍａ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ
・２２５１・
夺骨・软组织肿瘤夸
骨桥蛋白在骨肉瘤中表达及其与侵袭转移关系
商冠宁１”，吕 刚１，马旭１
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｉｌｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｆａｓｔａｓｉｓ
ＳＨＡＮＧ Ｇｕａｎ—ｎｉｎ９１一，ＬＶ Ｇａｎ９１，ＭＡ Ｘｕｌ
２２．２％ｉｎ
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ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ Ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ
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ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＮ
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ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｂｕｔ
２０ｌＯ一（Ｊ３—３ｌ
旦发生转移则预后较差。骨桥蛋白（Ｏｓｔｅｏｐｅｎｔｉｎ，ＯＰＮ）与肿 瘤转移的关系日益引起人们的关注，已被广泛公认为是肿瘤 转移相关基因或转移基因¨’２Ｊ。本研究运用免疫组化Ｓ—Ｐ 法检测骨肉瘤组织中ＯＰＮ的表达，分析ＯＰＮ表达与骨肉瘤 临床病理特征之间的关系探讨ＯＰＮ与骨肉瘤生物学行为的 相关性及在肿瘤侵袭转移的作用。 １资料与方法
Ｔａｂ．２
ｎ（％Ｊ
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＯＰＮ ｅｘｐｒｅ∞ｉｏｎ ａｎｄ ｅｈ＇ｎｉｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｏａｔｅｏｓａｒｅｏｍａ
ｎ（％）
３讨论 骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤，好发于青少年， 恶性程度高，远处转移早，预后较差，５年生存率低。近年来， 随着以新辅助化疗为主的综合治疗在骨肉瘤治疗中的开展， 患者生存率得到明显提高，但仍然有近１／３的患者因为肿瘤 对化学治疗和放疗等传统治疗方法敏感性低，在术后２—３ 年死于肺转移¨Ｊ。对于骨肉瘤转移机制的深入研究以及探 讨治疗骨肉瘤转移的新方法，已经成为改善骨肉瘤预后的根 本所在。 ＯＰＮ是一种磷酸化蛋白质，在人体组织中广泛分布，且 具有多种功能Ｈ】。ＯＰＮ分子中心有一个特殊的ＲＧＤ序列
沈阳
２０ｌＯ—０６—２４
１中国医科大学附属一院骨科，辽宁沈阳１１０００１ ２辽宁省肿瘤医院骨软组织肿瘸科。辽宁
１１００４２
【作者简介】
商冠宁（１９７５一），男，辽宁沈阳人，博士，副主任医师， 主要从事骨与软组织肉瘤的研究。Ｅ—ｍａｉｌ：，ｈｇｎｌ９７５
＠１６３．ｏＤｍ
万方数据
・２２５２・
１．１资料 １．１．１标本来源免疫组化实验标本为１９９７年３月至 ２００６年５月期间辽宁省肿瘤医院有完整临床随访资料的骨 肉瘤石蜡标本６０例，对照组为骨软骨瘤石蜡标本２０例。骨 肉瘤病例取材前未经化疗，其中男性４０例，女性２０例；年龄 ｌｌ一５３岁，中位年龄１９．３岁。组织学分型采用ＷＨＯ骨肿 瘤分类标准分类：骨母细胞型２５例，软骨母细胞型１７例，纤 维母细胞型１８例。临床分期参照Ｅｎｎｅｋｉｎｇ分期法：ＩＩ．期 １１例，Ⅱｂ期３７例，Ⅲ期１２例。 １．１．２主要试剂兔抗人ＯＰＮ多克隆抗体、Ｓ—Ｐ免疫组化 试剂盒：加强型ＤＡＢ试剂盒、ＰＢＳ缓冲液及枸橼酸盐缓冲液 均购自福建迈新生物技术开发公司。 １．２实验方法 应用免疫组化Ｓ—Ｐ法，实验步骤如下：石蜡切片经６０℃ 烤片１ｈ后，二甲苯常规脱蜡１５分钟，梯度酒精水化，酒精浓 度分别为９５％、８０％、７０％。每个梯度５分钟。然后用ＰＢＳ 冲洗三次，每次５分钟。用自来水冲洗切片３分钟至清洁透 明，然后将其置于蒸馏水中待用。将切片置于注入了１０００ｒａｌ ｐＨ为６．０的柠檬酸缓冲液的专用切片盒中，再将盒放入高 压锅中中，加盖后加热１０—１５分钟（抗原修复）。将切片盒 取出，置于室温中冷却。ＰＢＳ冲洗三次，每次５分钟。滴加 ３％Ｈ：Ｏ：（试剂Ａ）室温下孵育１０分钟，以消除内源性过氧化 物酶的活性，ＰＢＳ冲洗三次，每次５分钟。除去ＰＢＳ液，每张 切片滴加５０１ＬＬｌ封闭用正常山羊血清工作液试剂（试剂Ｂ）， 室温下孵育１０分钟。除去血清，每张切片滴加５０山的第一 抗体，（ＯＰＮ抗体ｌ：５０），４＊Ｃ过夜。ＰＢＳ冲洗三次，每次５分 钟。除去ＰＢＳ液，每张滴加５０“生物素标记的第二抗体（试 剂ｃ），室温下孵育１０分钟。ＰＢＳ冲洗三次，每次１０分钟。 除去ＰＢＳ液，每张切片滴加５０ｐ。ｌ链霉索抗生物素蛋白一过 氧化酶（试剂ｃ），室温孵育ｌＯ分钟。ＰＢＳ冲洗三次，每次３ 分钟。除去ＰＢＳ液，每张切片滴加１００１Ｌｌ新鲜配制的ＤＡＢ 溶液（１：ｌＯＯ），出现背景色时在显微镜下观察，如出现阳性征 则立即用自来水冲洗。苏木素复染４５秒一２分钟，自来水冲 洗返蓝。切片经梯度酒精脱水，溶液分别为７０％、８０％、 ９５％，每个梯度５分钟，二甲苯透明５分钟。待干燥后，中性 树胶封固。显微镜阅片、照相。免疫组化结果判断标准参照 Ｏｚｄｅｍｉｒ等的评分标准，以已知阳性的胃癌切片作为 所有数据统计均在ＳＰＳＳ １６．０统计软件包中完成，分别
１０ｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ Ｄｅｐａｒｔａｒｔｍｅｎｔ，Ｆｉｒｓｔ “ｄｏ以，ｌｇ Ｃａｎｃｅｒ
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Ｈｏｓｐｉｔａｌ
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Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１１０００１，Ｃｈｉｎａ；２Ｂｏｎｅ ｓ驴死ｓ比ｏｆＳｕｒｇｅｒｙ，
ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌｉｔ－
ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ
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ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ
ｏｓｔｅｏｆｌｓＥｃｏ一
啪．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ
ｓｔａｉｎ．Ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＮ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒｏｍａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｓ—Ｐ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｌｏｇｙ
２．２
（衄一Ｇｌｙ—Ａｓｐ），是多种整合素和ＣＤ４４的配体，起着细胞
黏附蛋白和细胞因子的作用。ＯＰＮ不仅在组织发育过程中， 而且与许多疾病，如肿瘤、炎症、免疫反应、血管重建等有关。 Ｓｅｎｇｅｒｐ’于１９７９年首先报道ＯＰＮ与肿瘤之间的关系以来， 其与肿瘤的关系日益引起人们的关注，已被广泛公认为是肿
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１１００４２，Ｃｈ／ｎａ． ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ
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ｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ
ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｅｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ２ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
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ａｎｄ ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ
ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ａ ｆｏｒｍｕｌａ
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采用Ｘ２检验方法进行。Ｐ＜ｏ．０５有统计学意义。
２结果
２．１
ＯＰＮ在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达情况 ＯＰＮ在骨肉瘤中的表达部位均在骨肉瘤细胞浆及细胞
膜，染成棕色及棕褐色颗粒为阳性，多呈弥漫状分布，偶见呈 灶性分布。未染成棕色为阴性。骨软骨瘤中亦可见ＯＰＮ呈 细胞浆及细胞膜表达。ＯＰＮ在骨肉瘤中表达阳性率为 ７６．７％，并且多表达为阳性及强阳性，在骨软骨瘤中为 ２２．２％，二者相比差异有显著意义（表１）。
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｏｓｔｅｏｓａｒｃⅪｍａ；ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ；ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｍｏｄｅｍ 【摘要】
Ｏｎｅｏｌｏｇｙ
２０１０，１８（１１）：２２５１—２２５３
目的：探讨骨桥蛋白（ＯＰＮ）在骨肉瘤组织中的表达情况及其与骨肉瘤远处转移的相关性，探索建立
数学模型预测骨肉瘤远处转移的可行性。方法：免疫组化Ｓ—Ｐ法检测ＯＰＮ在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达， 单因素分析ＯＰＮ表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系，并进一步利用多因素回归分析模型分析骨肉瘤远 处转移相关因素，建立数学预测模型。结果：ＯＰＮ在骨肉瘤中表达阳性率为７６．７％，在骨软骨瘤中为２２．２％， 二者间有显著性差异。ＯＰＮ与骨肉瘤ｌ临床病理特征的分析结果提示，ＯＰＮ的表达与患者性别、年龄、病理分 型无关，与临床分期和肺转移显著相关。随着临床分期程度的增高，肺转移的发生，ＯＰＮ表达呈增高趋势，组 问有显著性差异。单因素分析发现肿瘤体积、ＡＬＰ水平、临床分期、新辅助化疗、ＯＰＮ与骨肉瘤肺转移有相关 性。而多因素回归分析筛选出２项有统计学意义的独立因素：临床分期和新辅助化疗，由此建立Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归 方程。结论：ＯＰＮ可能是判断骨肉瘤恶性程度及预后的指标，多因素回归分析提示ＯＰＮ作为肿瘤转移相关基 因可能通过多种途径参与恶性肿瘤的转移。ＯＰＮ可成为预测肿瘤预后的指标，用于监测肿瘤复发转移。 【关键词】骨肉瘤；ＯＰＮ；转移 【中图分类号】Ｒ７３８．６ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４９９２．２０１０．１１．６５ 【文章编号】１６７２—４９９２一（２０１０）１１—２２５ｌ—０３ 骨肉瘤是青少年时期最常见的原发骨恶性肿瘤，随着新 【收稿日期】 【修回日期】 【作者单位】 辅助化疗和保肢手术的开展，骨肉瘤的生存率得到明显提 高。但骨肉瘤的转移问题仍然是影响其疗效的主要原因，一
ＯＰＮ表达与骨肉瘤临床病理特征的关系 骨肉瘤组织中ＯＰＮ表达与临床病理特征的分析结果提
示，ＯＰＮ的表达水平仅与临床分期和肺转移显著相关，而与 患者性别、年龄、肿瘤体积、病理分型等临床病理因素无关。
万方数据
・２２５３・
瘤转移相关基因或转移基因。已发现在肺癌、乳腺癌、食管 癌、肝癌、前列腺癌等¨４ ｏ多种肿瘤组织中表达增高，ｌ酊且发 现在很多肿瘤中ＯＰＮ的表达增高与肿瘤的复发转移有 关¨”“Ｊ。近年来，随着肿瘤分子生物学的发展，人们已经认 识到细胞癌变主要是由于遗传信息发生改变所致，致癌基因 的激活表达，抑癌基因的丢失或功能丧失，导致了细胞癌变， 而肿瘤转移基因与转移抑制基因的异常表达是肿瘤远处转 移的一个重要原因。针对肿瘤转移基因ＯＰＮ及其受体的干 预，可能成为防治肿瘤转移的潜在靶点。同时，ＯＰＮ也可能 是肿瘤远处转移和预后的预测分子。目前，关于ＯＰＮ的研 究大多集中在上皮源性恶性肿瘤中。而有关ＯＰＮ在骨肉瘤 组织中表达的相关实验研究尚未见报道。 本研究应用免疫组化方法研究ＯＰＮ在骨肉瘤组织与良 性骨软骨瘤组织中的表达，结果提示ＯＰＮ在骨肉瘤中高表 达，并且多表达为阳性及强阳性，与良性骨肿瘤骨软骨瘤比 较，两者间有显著性差异。结果证实ＯＰＮ与骨肉瘤的恶性 转化以及肿瘤的侵袭转移过程等恶性生物学行为相关。另 外，在临床病理资料的分析中，发现ＯＰＮ表达与临床分期有 关，骨肉瘤临床分期越晚，ＯＰＮ的表达水平越高，提示ＯＰＮ 的表达程度与病期进展相一致。骨肉瘤中ＯＰＮ的表达可作 为评估预后指标的结果，预示ＯＰＮ高表达时肿瘤有较高的 侵袭性和提示不良预后。 骨肉瘤的临床分期主要是由原发瘤的大小、区域淋巴结 状况以及远处转移的情况所决定的，对于骨肉瘤的治疗方案 的决定、预后评价十分重要。新辅助化疗对于骨肉瘤的疗效 不可替代的地位已经确立。本研究抽取的６０例病人中，有 ２３例未坚持系统化疗，约占全部病例的３８．３％。在随访与 病例分析中发现，新辅助化疗的不良反应及经济原因是骨肉 瘤患者不能坚持完成规范治疗的主要原因之一。由于新辅 助化疗不良反应个体化差异的存在，少数患者因明显不良反 应而被迫停止治疗，且由于化疗疗程长，依从性不好的患者 亦可能中断治疗；有些患者则因自身文化水平的限制，对疾 病和治疗的认识不够充分，也可能中断治疗。坚持完成骨肉 瘤综合治疗是提高骨肉瘤患者生存率的有效方法之一，由此 加强对骨肉瘤知识的宣传和教育普及必将有助于骨肉瘤综 合治疗的完成，而个体化治疗以及生物靶向治疗的出现和发 展将提高现有治疗手段的有效性，减轻不良反应。综上，研 究结果提示，骨肉瘤组织中ＯＰＮ呈高表达，明显高于正常骨 组织及骨软骨瘤组织，提示ＯＰＮ可能在骨肉瘤侵袭转移的 恶性转化过程中，促进了骨肉瘤的发生和发展。骨肉瘤远处
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ｃｏｒｒｅ—
ｓｈｏｗｅｄ
ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ，ＡＩＰ ｌｅｖｅｌ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｇｅ，ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ＯＰＮ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ
随着骨肉瘤临床分期程度的增高，肺转移的发生，ＯＰＮ染色 呈逐渐增强趋势，组间比较差异有统计学意义（表２）。
表Ｉ臂肉癯及骨软骨瘤中ＯＰＮ的表达
Ｔａｂ．１ ＯＰＮ
ｅｘｐｎｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｆｌａｒｃｏｍａ
ｎ
ａｎｄ ｏｓｔｅｏｅｈｏｎｄｍｍａ
ｘ２＝１９．５１，Ｐ＝ｏ．００００１
表２骨肉瘤ＯＰＮ表达与临床病理资料的相关性
ＯＰＮ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｕｎｉ—ｖａｒｉａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａ ｍｏｄｅｌ
ｗａｓ
ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ 眦．ａｎｄ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｌａｔｅｄ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｎｔ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｗａｇ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＯＰＮ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｉｎ
ｕｓｅｆｕｌ ｉｎ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ
ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ
ｔｏ
ｅｓｔｅｅｓａｒｃｏｍａ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ
・２２５１・
夺骨・软组织肿瘤夸
骨桥蛋白在骨肉瘤中表达及其与侵袭转移关系
商冠宁１”，吕 刚１，马旭１
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｉｌｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｆａｓｔａｓｉｓ
ＳＨＡＮＧ Ｇｕａｎ—ｎｉｎ９１一，ＬＶ Ｇａｎ９１，ＭＡ Ｘｕｌ
２２．２％ｉｎ
ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒｏｍａ．Ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ Ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ
ｎｏｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＮ
ｏｒ
Ｗａｇ ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｅａｎｆｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ
ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｂｕｔ
２０ｌＯ一（Ｊ３—３ｌ
旦发生转移则预后较差。骨桥蛋白（Ｏｓｔｅｏｐｅｎｔｉｎ，ＯＰＮ）与肿 瘤转移的关系日益引起人们的关注，已被广泛公认为是肿瘤 转移相关基因或转移基因¨’２Ｊ。本研究运用免疫组化Ｓ—Ｐ 法检测骨肉瘤组织中ＯＰＮ的表达，分析ＯＰＮ表达与骨肉瘤 临床病理特征之间的关系探讨ＯＰＮ与骨肉瘤生物学行为的 相关性及在肿瘤侵袭转移的作用。 １资料与方法
Ｔａｂ．２
ｎ（％Ｊ
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＯＰＮ ｅｘｐｒｅ∞ｉｏｎ ａｎｄ ｅｈ＇ｎｉｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｏａｔｅｏｓａｒｅｏｍａ
ｎ（％）
３讨论 骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤，好发于青少年， 恶性程度高，远处转移早，预后较差，５年生存率低。近年来， 随着以新辅助化疗为主的综合治疗在骨肉瘤治疗中的开展， 患者生存率得到明显提高，但仍然有近１／３的患者因为肿瘤 对化学治疗和放疗等传统治疗方法敏感性低，在术后２—３ 年死于肺转移¨Ｊ。对于骨肉瘤转移机制的深入研究以及探 讨治疗骨肉瘤转移的新方法，已经成为改善骨肉瘤预后的根 本所在。 ＯＰＮ是一种磷酸化蛋白质，在人体组织中广泛分布，且 具有多种功能Ｈ】。ＯＰＮ分子中心有一个特殊的ＲＧＤ序列
沈阳
２０ｌＯ—０６—２４
１中国医科大学附属一院骨科，辽宁沈阳１１０００１ ２辽宁省肿瘤医院骨软组织肿瘸科。辽宁
１１００４２
【作者简介】
商冠宁（１９７５一），男，辽宁沈阳人，博士，副主任医师， 主要从事骨与软组织肉瘤的研究。Ｅ—ｍａｉｌ：，ｈｇｎｌ９７５
＠１６３．ｏＤｍ
万方数据
・２２５２・
１．１资料 １．１．１标本来源免疫组化实验标本为１９９７年３月至 ２００６年５月期间辽宁省肿瘤医院有完整临床随访资料的骨 肉瘤石蜡标本６０例，对照组为骨软骨瘤石蜡标本２０例。骨 肉瘤病例取材前未经化疗，其中男性４０例，女性２０例；年龄 ｌｌ一５３岁，中位年龄１９．３岁。组织学分型采用ＷＨＯ骨肿 瘤分类标准分类：骨母细胞型２５例，软骨母细胞型１７例，纤 维母细胞型１８例。临床分期参照Ｅｎｎｅｋｉｎｇ分期法：ＩＩ．期 １１例，Ⅱｂ期３７例，Ⅲ期１２例。 １．１．２主要试剂兔抗人ＯＰＮ多克隆抗体、Ｓ—Ｐ免疫组化 试剂盒：加强型ＤＡＢ试剂盒、ＰＢＳ缓冲液及枸橼酸盐缓冲液 均购自福建迈新生物技术开发公司。 １．２实验方法 应用免疫组化Ｓ—Ｐ法，实验步骤如下：石蜡切片经６０℃ 烤片１ｈ后，二甲苯常规脱蜡１５分钟，梯度酒精水化，酒精浓 度分别为９５％、８０％、７０％。每个梯度５分钟。然后用ＰＢＳ 冲洗三次，每次５分钟。用自来水冲洗切片３分钟至清洁透 明，然后将其置于蒸馏水中待用。将切片置于注入了１０００ｒａｌ ｐＨ为６．０的柠檬酸缓冲液的专用切片盒中，再将盒放入高 压锅中中，加盖后加热１０—１５分钟（抗原修复）。将切片盒 取出，置于室温中冷却。ＰＢＳ冲洗三次，每次５分钟。滴加 ３％Ｈ：Ｏ：（试剂Ａ）室温下孵育１０分钟，以消除内源性过氧化 物酶的活性，ＰＢＳ冲洗三次，每次５分钟。除去ＰＢＳ液，每张 切片滴加５０１ＬＬｌ封闭用正常山羊血清工作液试剂（试剂Ｂ）， 室温下孵育１０分钟。除去血清，每张切片滴加５０山的第一 抗体，（ＯＰＮ抗体ｌ：５０），４＊Ｃ过夜。ＰＢＳ冲洗三次，每次５分 钟。除去ＰＢＳ液，每张滴加５０“生物素标记的第二抗体（试 剂ｃ），室温下孵育１０分钟。ＰＢＳ冲洗三次，每次１０分钟。 除去ＰＢＳ液，每张切片滴加５０ｐ。ｌ链霉索抗生物素蛋白一过 氧化酶（试剂ｃ），室温孵育ｌＯ分钟。ＰＢＳ冲洗三次，每次３ 分钟。除去ＰＢＳ液，每张切片滴加１００１Ｌｌ新鲜配制的ＤＡＢ 溶液（１：ｌＯＯ），出现背景色时在显微镜下观察，如出现阳性征 则立即用自来水冲洗。苏木素复染４５秒一２分钟，自来水冲 洗返蓝。切片经梯度酒精脱水，溶液分别为７０％、８０％、 ９５％，每个梯度５分钟，二甲苯透明５分钟。待干燥后，中性 树胶封固。显微镜阅片、照相。免疫组化结果判断标准参照 Ｏｚｄｅｍｉｒ等的评分标准，以已知阳性的胃癌切片作为 所有数据统计均在ＳＰＳＳ １６．０统计软件包中完成，分别
１０ｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ Ｄｅｐａｒｔａｒｔｍｅｎｔ，Ｆｉｒｓｔ “ｄｏ以，ｌｇ Ｃａｎｃｅｒ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＣｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１１０００１，Ｃｈｉｎａ；２Ｂｏｎｅ ｓ驴死ｓ比ｏｆＳｕｒｇｅｒｙ，
ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌｉｔ－
ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ
ｐｒｅｄｉｅｔ
ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ
ｏｓｔｅｏｆｌｓＥｃｏ一
啪．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ
ｓｔａｉｎ．Ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＮ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒｏｍａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｓ—Ｐ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｌｏｇｙ
２．２
（衄一Ｇｌｙ—Ａｓｐ），是多种整合素和ＣＤ４４的配体，起着细胞
黏附蛋白和细胞因子的作用。ＯＰＮ不仅在组织发育过程中， 而且与许多疾病，如肿瘤、炎症、免疫反应、血管重建等有关。 Ｓｅｎｇｅｒｐ’于１９７９年首先报道ＯＰＮ与肿瘤之间的关系以来， 其与肿瘤的关系日益引起人们的关注，已被广泛公认为是肿