2002-2019年中大考博肿瘤学真题及答案

2019肿瘤学1、什么是肿瘤“”寡转移“2、免疫检查点意义3、错配修复基因及微卫星意义4、局限期非小细胞癌综合治疗5、什么是肿瘤多学科综合治疗5、什么是肿瘤免疫治疗

1.寡转移是肿瘤转移过程中的一种中间状态,它是局限原发灶及广泛转移灶之

间生物侵袭性较温和的阶段,是肿瘤转移灶数目少于5个的特殊时期.寡转移治疗的关键是放疗、手术和射频消融等局部治疗,同时兼顾预防远处转移。肿瘤寡转移是指患者的原发肿瘤发生了远处转移,但是转移灶局限在某个器官内,而且转移灶的数量较少的肿瘤转移状态。

2.免疫检验点，为抑制受体和抑制信号通路，这些“检验点”在正常情况下能

抑制T 细胞的功能，同时在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸。3.免疫检查点分子（immune cheeckpoint）是免疫系统中起抑制作用的调节

分子，其对于维持自身耐受、防止自身免疫反应、以及通过控制免疫应答的时间和强度而使组织损伤最小化等至关重要。免疫检查点分子表达于免疫细胞上，将抑制免疫细胞功能，使机体无法产生有效的抗肿瘤免疫应答，肿瘤形成免疫逃逸。

4.与肿瘤相关的免疫检查点分子主要有：PD1、CTLA4、Tim3和LAG3，目前

研究较多的为PD1、CTLA4。

5.免疫检查点抑制剂就是针对相应的免疫检查点研发的一些单抗类药物，其主

要作用为阻断表达免疫检查点的肿瘤细胞与免疫细胞之间的作用，从而阻断肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用。

6.所谓“癌症免疫治疗”，即借助人体自身的免疫系统，去攻击癌细胞的治疗方法。詹姆斯·艾利森所发现的CTLA-4是首个被发现的“免疫检测点”，而本庶佑发现的PD-1 是目前学界大热的研究点，对于PD-1抑制免疫机能的认识也在不断刷新，其机制的复杂程度可能远胜过已知。

下面，我们一起了解一下癌症免疫治疗法，分为两种：

1. 免疫检测点抑制剂类药物

为了避免误伤，人体的T细胞在被激活的同时会表达某些有“免疫检测点”功能的蛋白，就比如两位诺奖得主分别发现的CTLA-4和PD-1。

T细胞的杀伤力很强，因而正常细胞的表面有相应的蛋白能与之匹配，能够解除T细胞的攻击性。换句话说，正常细胞会和T细胞发个信号，表明“我是自己人，别攻击我”。

可是癌细胞居然能学会表达相同的“信号”（蛋白）骗过T细胞。免疫检测点调节类药物的作用，则是要阻断检测到的癌细胞表面和其配型蛋白的连接（CTLA-4与CD80/CD86，PD-1与PD-L1/PD-L2），也就是说该类药物揭掉了癌细胞的伪装面具。

2.免疫细胞疗法

和药物不同，它并非直接通过口服或者通过注射进入人体，而是需要从患者体内提取T细胞，对其进行基因改造，使T细胞能够识别并附着于肿瘤细胞上的特定蛋白（比如CD19），从而获取对癌细胞的发现和攻击能力，并在实验室中被扩展成数亿。而后被重新输回患者体内，进而实现杀灭肿瘤细胞的目标。

7.MSI是微卫星不稳定性(microsatellite instability)的缩写，MSI是指与正常组织相比，

在肿瘤中某一微卫星由于重复单位的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。

8.错配修复基因MMR是在遗传性非息肉性大肠癌（HNPPC）中分离到的一组遗传易感基

因，该系统任一基因突变，都会导致细胞错配修复功能缺陷，结果产生遗传不稳定，表现为复制错误或微卫星不稳定，因而容易发生肿瘤。

9.MSI是微卫星不稳定、MMR是基因错配修复。MMR基因是DNA错配修复基因，它

的表达缺失可引起DNA复制过程中错配的累积，导致微卫星不稳定（MSI）的发生，约15% 的结直肠癌是经由MSI途径引发的。

肿瘤免疫治疗就是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反

应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。

肿瘤免疫包括：1.肿瘤疫苗；2.免疫调节剂；3.体细胞免疫治疗；4.免疫组合点阻断治疗

2018年必答题（15×4）

良恶性肿瘤的区别

简述SBRT的定义

立体定向放疗(SBRT)：

立体定向体部放疗（StereotacticBodyRadiationTherapy）的缩写为SBRT，借助CT、MRI或血管数字减影仪(DSA.等精确定位技术和标志靶区，利用高度精准的放疗技能，将根治性的放射剂量通过外照射方式聚焦到肿瘤部位，达到消灭根治肿瘤的目的。

过去几十年，头部的立体定向放疗（如伽马刀、X刀，赛博刀等）技能取得了快速发展，在头部肿瘤治疗中取得了较好的效果并积累了大量经验，将其原理和技能用于体部肿瘤的精准外放疗技能，即SBRT。

SBRT利用每次高剂量的放疗，短短几次照射即能达到根治性剂量以消灭肿瘤，所以也被称为立体定向消融体部放疗（StereotacticAblativeBodyRadiotherapy，SABR）。同头部立体放疗类似，都要求对肿瘤进行精准定位照射，同时尽量保护周围正常组织和器官。因此，病人的体位固定、放疗计划的验证、每次放疗时的质量保证等显得极为重要。随着图像引导（IGRT）等技能的出现，目前SBRT 在体部的多种肿瘤的治疗中已经取得很好的效果，尤其是小肺癌SBRT治疗具有效果好副作用小的大量临床经验。

癌变二阶段学说

绝大多数肿瘤的发生都是一个受多因素作用，表现为多阶段的复杂过程，癌发生的二阶段学说是指癌变至少由两个既有区别又有联系的阶段构成，第一个为特异性的激发阶段，由使用一次小剂量的致癌物所引起，使正常细胞变为潜伏性瘤细胞。激发过程是正常细胞经致癌物作用后转变为潜伏性瘤细胞的过程，比较短暂，一般是不可逆的，已证实大部分致癌物为诱变物，因此，激发过程具有诱变性质，即涉及到遗传突变。第二个阶段为非特异的促进阶段，由巴豆油等促癌物促成，使潜伏的瘤细胞进一步发展成为肿瘤。现已证明，这个过程见于肝、肺、膀胱、食管、乳腺、胃、胰腺癌。促进过程的初期具有可逆性，而后期是不可逆的，促癌物本身不具诱变性，促癌过程是被激发细胞进一步增殖，逐步形成克隆的选择过程，在这一过程中激发细胞生长失控，逃脱宿主免疫监视，逐步形成恶性表型，

继而发展成浸润、转移性癌。

2012年生理学诺贝尔奖获得者红细胞里面加入4个基因能形成诱导多能干细胞，问是哪4个gene

诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS cells）：2006年日本京都大学Shinya Yamanaka在世界著名学术杂志《细胞》上率先报道了诱导多能干细胞的研究。他们把

Oct3/4,Sox2、c-Myc和Klf4这四种转录因子基因克隆入病毒载体，然后引入小鼠成纤维

细胞，发现可诱导其发生转化，产生的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。

2012年10月，英国和日本两位科学家因“发现成熟细胞可以被重新编程为多功能的干细胞（即诱导多功能干细胞）”而摘取2012年度诺贝尔生理学或医学奖，从而使诱导多功能干细胞更为人们所知晓。

选答题（选2 20×2）

肺癌的鉴别诊断

1.肺结核

肺结核尤其是肺结核瘤（球）应与周围型肺癌相鉴别。肺结核瘤（球）较多见于青年

病人，病程较长，少见痰带血，痰中发现结核菌。影像学上多呈圆形，见于上叶尖或后段，

体积较小，不超过5cm直径，边界光滑，密度不匀可见钙化。结核瘤（球）的周围常有散在的结核病灶称为卫星灶。周围型肺癌多见于40岁以上病人，痰带血较多见，痰中癌细胞阳性者达40%～50%。X线胸片肿瘤常呈分叶状，边缘不整齐，有小毛刺影及胸膜皱缩，生长较快。在一些慢性肺结核病例，可在肺结核基础上发生肺癌，必须进一步做痰液细胞学和支气管镜检查，必要时施行剖胸探查术。

2.肺部感染

肺部感染有时难与肺癌阻塞支气管引起的阻塞性肺炎相鉴别。但如肺炎多次发作在同一部位，则应提高警惕，应高度怀疑有肿瘤堵塞所致，应取病人痰液做细胞学检查和进行纤维光导文气管统检查，在有些病例，肺部炎症部分吸收，剩余炎症被纤维组织包裹形成结节或炎性假瘤时，很难与周围型肺癌鉴别，对可疑病例应施行剖胸探查术。

3.肺部良性肿瘤

肺部良性肿瘤：如结构瘤、软骨瘤、纤维瘤等都较少见，但都须与周围型肺癌相鉴别，良性肿瘤病程较长，临床上大多无症状，X线摄片上常呈圆形块影，边缘整齐，没有毛刺，也不呈分叶状。支气管腺瘤是一种低度恶性的肿瘤，常发生在年轻妇女，因此临床上常有肺部感染和咯血等症状，经纤维支气管镜检查常能作出诊断。

4.纵隔恶性淋巴瘤（淋巴肉瘤及霍奇金病）

临床上常有咳嗽、发热等症状，影像学显示纵隔影增宽，且呈分叶状，有时难以与中央型肺癌相鉴别。如果有锁骨上或腋窝下淋巴结肿大，应作活检明确诊断。淋巴肉瘤对放射治疗特别敏感，对可疑病例可试用小剂量放射治疗，可使肿块明显缩小。这种试验性治疗有助于淋巴肉瘤诊断。

5.结核性胸膜炎

肿瘤妇科体格检查的主要手法以及临床意义

各类抗肿瘤药物的原理以及举例

★抗癌药物的种类及其作用机制 p125

（1）烷化剂——抑制DNA复制

直接与DNA分子形成交叉联结或在DNA分子之间形成交联，导致细胞结构破坏。对增殖和非增殖细胞均有强烈细胞毒作用（细胞周期非特异性）。CTX、顺铂、卡铂

（2）抗代谢类——干扰核酸合成，大部分作用于S期

与正常代谢物有相似结构，竞争性抑制核酸代谢酶，取代核酸合成的前体物质。对非增殖细胞影响小（细胞周期特异性）。MTX、5-FU

（3）抗生素类——干扰DNA转录和mRNA生成

插入DNA双链邻近的碱基对，引起DNA双链解离。

阿霉素、柔红霉素（心脏毒性），博来霉素（肺纤维化）

（4）微管蛋白抑制剂——阻止细胞分裂

长春碱类：与微管蛋白结合，阻止微管聚合和形成，细胞分裂停止在中期。（骨髓移植、神经毒性）

紫杉醇类：阻止微管解聚。（过敏、骨髓移植、神经毒性、脱发）（5）拓扑异构酶抑制剂——干扰DNA合成和复制

抑制拓扑异构酶I和II，使DNA双链断裂。（骨髓抑制）

（6）激素类——竞争性受体拮抗

竞争性受体拮抗，抑制激素依赖型肿瘤生长

（7）分子靶向药物

特异性地作用于肿瘤发生、发展、增殖、扩散和转移相关的分子。

选择性高、结构多变（靶向广）、疗效独特、毒性低

什么是肿瘤遗传易感性，遗传易感性对临床的的指导意义

(其他记不住了)

遗传易感性是不同人群、不同个体由于遗传结构不同，在外界环境影响的条件下呈现出易患多基因病的倾向，如肿瘤。

补充一下选答题：

1，简述肝癌的高危人群，AFP的临床意义

肝癌的高危人群：1.肝癌高发区的自然人群；2.有肝炎病史或HBsAg阳性/丙肝抗体阳性；3.有肝癌家族史；4.原发性肝癌切除术后患者；5，酗酒人群

AFP在临床中的应用主要是肝癌的诊断和病情预后评估、肝硬化或各种原因导致肝坏死后病情观察、生殖细胞源性肿瘤诊断和预后评估。其中在肝癌中的应用如下：⑴诊断肝癌，AFP>300 ng/ml且持续4~8周不排除肝癌，50~200 ng/ml 持续>2月，肝癌高危者。结合临床，AFP>400 ng/ml即可确诊原发性肝癌。应排除卵巢癌、子宫内膜癌、睾丸肿瘤。

⑵疗效观察和病情预后评估。术前无转移，切除彻底，术后会降至正常。若不降或降后复升，提示弥漫性肝癌或癌复发。术后化疗过程中AFP如保持术后水平，示病情稳定，下降示好转，持续不降疗效不佳。

AFP是人体在胚胎时期血液中含有的一种糖蛋白，由肝细胞和卵黄囊细胞内粗面内网核糖颗粒所合成，并出现于胎儿血清中。胎儿出生后，血清AFP浓度下降，几个月至1年内降至正常，正常成人肝细胞失去合成AFP的能力，因此血清中含量极微（一般<25μg/L）。当肝细胞出现癌变、肝细胞因各种原因如肝炎肝硬化等坏死后肝细胞增生时，可出现升高。其中肝炎、肝硬化可有AFP的分子变异体。除此之外，妊娠、胚胎癌如睾丸癌、卵巢癌和极少数胃、胰、胆管、结肠直肠癌也可升高，但其绝对值不如肝细胞癌高。

2，抑癌基因失活的方式，举例说明

中山大学2016肿瘤防治中心肿瘤学

简答题:Horner's 综合症；肿瘤血管生成步骤；转化生长因子beta作为抑癌基因及原癌基因的双重作用；癌痛治疗基本原则

问答题(选2)

一，抗癌药的分类，机制及代表药

二，癌症三级预防，宫颈癌I, II级预防策略

三，乳癌临床表现

四，胰腺癌临床表现

五，何谓费城染色体，临床意义

六，BCL2在细胞程序性死亡的调节机制

七，肿瘤靶向治疗，赫赛丁机制及适应症(还有一个忘了)

八，………

2016中大肿瘤学真题

必答题每题15分

1、简述贺纳综合征？

2、简述癌痛药物治疗基本原则？

3、试述TGF-β作为抑癌基因及癌基因的双重作用？

4、简述肿瘤血管生成的基本步骤？

选答题，选2题，每题20分

5、试述抗肿瘤药物的分类，作用机制和代表药？

6、何谓肿瘤的三级预防？试举宫颈癌的Ⅰ、Ⅱ级预防措施？

7、试述乳腺癌的主要临床表现？

8、试述胰腺癌的主要临床表现？

9、试述粘附分子的定义及分类？

10、试述酪氨酸激酶信号转导途径，列举肿瘤靶向药物Herceptin、Tarceva 的作用靶点及适应症？

11、试述何为“费城染色体”及临床意义？

12、试述Bcl2家族蛋白调控程序性细胞死亡的分子机制？

2009中山大学肿瘤学考博试题（完整版）

必答题4道

1.肿瘤治愈性手术有根治术和广泛切除术，两者概念有何不同，并举例说明

2.新辅助化疗的概念及临床意义。

3.物理电离辐射对细胞造成的损伤类型。

4.肿瘤多步骤转移的机制。

5-15题（选作2题）

5.恶性肿瘤的三级预防

6.癌症预防性手术的概念，举5例说明。

7.如何减少肿瘤手术中的医源性播散？

8.根治性化疗的原理及应用原则。

9.肿瘤微创介入诊断与治疗的概念和特点。

10.从放射物理学和生物学两方面谈谈肿瘤放射治疗的新进展。

11.高能电子束的临床剂量学特点。

12.肿瘤基因治疗的策略。

13.常见致癌因素及致癌特点。

14.受体酪氨酸激酶信号转导途径及其在肿瘤治疗中意义，举4例靶向酪氨酸激酶受体的抗肿瘤药物。

15.细胞周期各期主要特点以及关键监测点。

1、癌发生的二阶段学说

绝大多数肿瘤的发生都是一个受多因素作用，表现为多阶段的复杂过程，癌发生的二阶段学说是指癌变至少由两个既有区别又有联系的阶段构成，第一个为特异性的激发阶段，由使用一次小剂量的致癌物所引起，使正常细胞变为潜伏性瘤细胞。激发过程是正常细胞经致癌物作用后转变为潜伏性瘤细胞的过程，比较短暂，一般是不可逆的，已证实大部分致癌物为诱变物，因此，激发过程具有诱变性质，即涉及到遗传突变。第二个阶段为非特异的促进阶段，由巴豆油等促癌物促成，使潜伏的瘤细胞进一步发展成为肿瘤。现已证明，这个过程见于肝、肺、膀胱、食管、乳腺、胃、胰腺癌。促进过程的初期具有可逆性，而后期是不可逆的，促癌物本身不具诱变性，促癌过程是被激发细胞进一步增殖，逐步形成克隆的选择过程，在这一过程中激发细胞生长失控，逃脱宿主免疫监视，逐步形成恶性表型，继而发展成浸润、转移性癌。

2、基因突变的方式与原癌基因活化

1）点突变：是导致癌基因活化的主要方式，例如H-ras基因第12位密码子GGC 变为GTC，从而使编码的甘氨酸变为缬氨酸，使其产物P21蛋白发生改变导致ras基因活化。

2）DNA扩增：一些基因通过不明原因复制成多拷贝以游离形式存在称双微体，或再次整合入染色体形成均染区，一般表示高度的染色体结构破坏与不稳定性，基因考贝数增多往往导致表达水平增高，一般认为，基因扩增和过量表达均可影响细胞的正常生理功能。

3）染色体重排：比如淋巴瘤第8号染色体与第14号易位，慢粒9号与22号易位等。这种异常表达导致细胞的增殖和分化异常。

4）癌基因甲基化改变：DNA甲基化状态的改变可导致基因结构和功能的异常，是细胞癌变过程中重要的一步。DNA甲基化有重要的生物学意义：控制基因表达，维护染色体完整性、调节DNA重组、抵御外来DNA入侵等。低甲基化导致一些正常情况下受到抑制的癌基因或相关因子得到大量表达，另外，也会导致整个基因组的不稳定性增加。癌基因DNA甲基化水平越低，其表达水平越高，肿瘤的生物学特性越复杂。因此，DNA甲基化状态的分析有可能成为判断肿瘤生物学特性及临床预后的重要指标之一。

5）基因过量表达：基因表达水平改变是细胞癌变的早期事件，Met 基因过量表达主要发生胃癌、异型增生和肠上皮化生；Ras过量表达出现在慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生及胃癌中，是细胞增殖活跃的指标。提示基因表达水平改变是癌变的一个重要因素。

3、P53基因生物学特性与意义

P53基因编码53kd的核内磷酸化蛋白，具有蛋白质-DNA和蛋白质-蛋白质结合功能。是细胞周期中负调节因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、凋亡等到有关。分为野生型和突变型。是最重要的抑癌基因。

1) 野生型p53蛋白具有反式激活功能和广谱肿瘤抑制作用。

2) p53蛋白具有转录调节作用。

3) 可正调节一些在细胞增殖周期调控起关键作用的基因，包括可调节CDK活性的p21和DNA损伤导致细胞生长受阻相关的GADD45 基因。

4) 在细胞内的核心作用是介导DNA损伤后的细胞应激反应，维持遗传稳定性。

5) 在G1/S控制点起作用，决定细胞是否启动DNA合成或凋亡。

6) 突变型p53具有癌基因作用。

7) 当病毒蛋白与p53蛋白形成复合物时，使p53蛋白含量显著增加，增强细胞的增殖能

力。

4、信号传导通路的组成

基本组成：细胞外因子、受体、联结蛋白、G蛋白、第二信使、胞内激酶、核受体。

1)细胞外因子（一）刺激细胞生长的因子：1、生长因子：⑴受体具有酪氨酸激酶活性；⑵特异性，⑶多样性，⑷家族性，⑸交叉性。2、细胞因子：白介素、干扰素等，受体不具有激酶活性。3、激素、神经递质：通过G蛋白联结受体传递信号，如生长激素、乙酰胆碱等。（二）其他：抗原、肿瘤坏死因子TNF，粘附分子：纤粘连蛋白，胶原蛋白

2) 受体（一）酪氨酸激酶受体：大多数生长因子受体，具有酪氨酸激酶活性。有上皮生长因子受体、胰岛素受体、血小板衍生的生长因子受体家族、纤维细胞生长因子受体、神经生长因子受体家族、肝细胞生长因子受体家族（二）G 蛋白联结受体：大多激素、多肽、神经递质。有7个跨膜区，膜内区与G蛋白相偶联，传导信号。（三）细胞因子受体：淋巴细胞表面受体，白介素受体、

诱发细胞凋亡受体（Fas TNF 受体）（四）粘附因子受体：cadherins , integrins , Ig 超家族。

3)联结蛋白SH2区：特异性结合磷酸化的酪氨酸，使酶定位到膜上，以靠近它的底物；促使底物靠近催化酶并定位；直接调节酶的活性。使蛋白与蛋白之间作用更有效地进行，信号顺利传递下去。SH3区：识别与结合脯氨酸富集区，也能使蛋白定位于相应的区域，调节并激活酶的活性。PH 区：与介导G蛋白的βγ亚单位的生物功能以及与PIP2磷脂结合有关。DD：DD介导细胞内的Caspase 系统和其他激酶通路。

4)G蛋白分为经典G蛋白和小分子量G蛋白。在细胞生长、分化、细胞骨架、蛋白转运方面发挥重要的作用。Ras 蛋白也是一种G蛋白，与GTP结合后具有生物活性，发生12位突变后的Ras 蛋白，持续停滞在GTP活性状态，过度激活细胞内的许多通路，从而造成细胞生长调控紊乱。

5) 第二信使指由刺激细胞生长的生长因子与受体结合后在细胞内产生的具有生物活性的一些小分子，主要有cAMP、cGMP、DAG、PIP3、Ca离子. 大多通过激活G蛋白联结受体产生。CAMP激活PKA，cGMP 激活PKG，DAG激活PKC ，Ca++ 与钙调蛋白结合后，能激活许多激酶。

6）胞内激酶MAPK是丝氨酸/苏氨酸激酶，MAP激酶是MAP激酶传导通路中的重要中继站和枢纽，平位于胞浆内，被激活后运到细胞核内，或直接激活转录因子，或激活另外一些激酶，启动或关闭一些特定基因的转录，对刺激信号作出必要的反应，调节细胞的正常生命活动。

7）核受体有些激素如性激素通过核受体传导信号，这类受体位于胞浆内，当配体与之结合后，形成二聚体，转运到核内，核受体大多本身可以是转录因子，进入核内后直接调控某些基因的表达。

5、凋亡的特点及生物学意义

凋亡的特点

细胞凋亡分为形态学特征和生物化学特征。其中形态学特征有形态上首先变圆，随即与邻近细胞脱离，失去微绒毛，胞质浓缩，内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合，核染色质密度增高呈半月形，并凝聚在核膜周边，核仁裂解，进而胞膜内陷，自行分割为多个外有膜包裹、内涵物不外溢的凋亡小体（apoptosis body），最终被相邻的细胞所识别、吞噬或自然脱落而离开生物体。生物化学特征表现为：1、非随机性DNA降解；2、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻；3、保持充足的能量代谢直至细胞凋亡末期；4、半胱天冬蛋白酶（Caspase）的活化

凋亡的生物学意义

1）对生物体的发育和稳态的维持是至关重要的，尤其是在胚胎发育造型、细胞数量的精确控制和具潜在危险性的细胞的清除等发挥重要作用。

2) 细胞DNA损伤可诱导p53表达，使细胞停滞于G1期，以便提供时间修复，修复无能则触发细胞凋亡。

3) 凋亡与衰老也密切相关，随年龄增长，许多细胞失去凋亡能力，可能导致衰老与器官功能下降的重要原因。

6、肿瘤多步骤转移基本过程

1) 早期原发癌生长：所需养料通过邻近组织器官微环境渗透提供。

2) 肿瘤血管形成：当肿瘤直径超过1~2mm时，通过微环境渗透提供的营养物质已不能保证肿瘤的生长，此时，宿主组织血循环形成的毛细胞血管网进入肿瘤组织，肿瘤血管逐步形成。

3) 肿瘤细胞脱落并侵入基质：部分肿瘤细胞分泌一种物质抑制粘附因子表达，增加肿瘤细胞运动能力，使其从原发灶脱离成游离细胞，并分泌各种蛋白溶解酶，破坏细胞外基质，从而突破结缔组织形成的屏障。

4) 肿瘤进入脉管系统：新生毛细胞血管基底膜本身存在缺损，薄壁小静脉的壁也有缝隙、

微小淋巴管等结构为肿瘤细胞进入循环提供条件

5) 癌栓形成：进入血循环的肿瘤细胞大多数被杀死，只有极少数转移倾向极高的细胞形成癌栓在循环系统中存活下来。

6) 继发组织器官定位生长：循环中幸存的癌细胞到达继发组织器官后穿透血管进入周围

组织，在各类生长因子作用下增殖生长，最终形成转移肿瘤灶。

7) 转移癌继续扩散：当转移灶直径超过1~2mm时，新生毛细血管形成并与肿瘤连通，又开始新的转移过程

7、基因突变形式的几种检测方法

1) PCR-SSCP法：是在非变性聚丙酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依期碱基序列不同而形成不同构象，一个碱基改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。方法简便快速，适合大样本筛选。

2) 杂合双链分析法：由于突变型和野生型DNA形成异源杂合双链DNA在其错配处形成一突起，在非变性凝胶中电泳时会产生与相应的同源双链DNA不同的迁移率。

3) 突变体富集PCR法：基本原理是利用Ras 基因某个编码子部位存在已知的限制性内切酶位点，用连续2次巢式PCR扩增包括K-ras 第12、13编码子的DNA 片断，在两次扩增反应之间用相应内切酶消化，野生型因被酶切不能进入第2

次扩增，而突变型则能完整进入第2次PCR扩增并得到产物的富集。

4) 变性梯度凝胶电泳法：当双链DNA在变性梯度凝胶中进行到与DNA变性温度一致的凝胶位置时，DNA发生部分解链，电泳迁移率下降，当解链的DNA 中有一个碱基改变时，会在不同的时间发生解链，则因影响电泳速度变化的程度从而被分离。

5) 化学切割错配法：将待测DNA片断与相应的野生型DNA片断或DNA和RNA 片断混合变性杂交，在异源杂合的双链核酸分子中，错配的C能被羟胺切割，错配的T能被四氧化锇切割，经变性凝胶电泳即可确定是否存在突变。检测片断最长的方法。

6)等位基因特异性寡核苷酸分析法（ASO）：以PCR和ASO相结合，设计一段20bp左右的寡核苷酸片断，其中包含了突变部位，以此为探针，与固定在膜上的样品DAN杂交。

7) 连接酶链反应：是以DNA连接酶将某一DNA链的5’-磷酸与另一相邻3’-羟基连接为基础，应用二对互补的引物，双链DNA经加热变性后，二对引物分别与模板复性，若完全互补，则在连接酶作用下，使相邻两引物的5’-磷酸与3’-羟基形成磷酸二酯键而连接，如果配对碱基存在突变则不能连接和扩增。