脑微血管内皮细胞与体外培养神经干细胞共培养后Th1Th2相关细胞因子的表达

脑微血管内皮细胞与体外培养神经干细胞共培养后Th1/Th2相关细胞因子的表达

罗文芳

1

唐涛黎杏群林源罗杰坤钟鹏程刘清娥

（中南大学湘雅医院中西医结合研究所，湖南

长沙410008）

〔摘

要〕目的

体外观察脑微血管内皮细胞（MVECs ）对来自大鼠海马神经干细胞（NSCs ）免疫相关细胞因子表达的影响。方法

采用Tran-

swell 建立神经干细胞与脑微血管内皮细胞共培养模型（NSCs +MVECs ），用荧光免疫化学和RT-PCR 测定NSCs 中与Th1相关的IFN-γ、IL-2及与Th2相关的IL-4、IL-10的表达。结果两种细胞共培养后，神经干细胞呈INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10阳性；同时INF-γ、IL-2mRNA 的表达上调，而IL-4、IL-10mRNA 的表达下调，与空白对照组比较明显差异（P ＜0.01）。结论

脑微血管内皮细胞（MVECs ）有可能使神经干细胞的INF-γ、

IL-2表达上调，IL-4、IL-10的表达下调。

〔关键词〕脑微血管内皮细胞；神经干细胞；Th1细胞因子；Th2细胞因子〔中图分类号〕R743.34

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202（2012）03-0512-05；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.03.034

The expressions of Th1/Th2related cytokines after co-cultured microvascular endothelial cells with neural stem cells in vitro LUO Wen-Fang ，TANG Tao ，LI Xing-Qun ，et al .

TCM Research Insitute of Xiangya Hospital Central-South University ，Changsha 410008，Hunan ，China

【Abstract 】Objective To investigate microvascular endothelial cells （MVECs ）on the expressions of IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10of NSCs in vitro.Methods Rat neural stem cells （NSCs ）aged 3 5day were adopted for amplification in vitro ，and co-cultured microvascular endothelial cells with neural stem cells.After 48h ，the expressions of IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10were assayed by immunohistochemistry and RT-PCR.Results After 48h of co-cultured ，the NSCs was positive of expressions in cytokines INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10；and the expres-sions of INF-γ，IL-2were increased ，the expressions of IL-4，IL-10were deceased （P ＜0.01）.Conclusions MVECs maybe up-regulate the expressions of IFN-γ，IL-2and down-regulate the expressions of IL-4，IL-10of NSCs.【Key words 】Microvascular endothelial cells （MVECs ）；Neural stem cells ；Th1cytokines ；Th2cytokines

基金项目：国家自然科学基金资助项目（30472264）1

南华大学附属第一医院中医科

通讯作者：黎杏群（1933-），女，教授，主要从事中西医结合脑血管病及

肿瘤病研究。

第一作者：罗文芳（1980-），男，硕士，主要从事中西医结合脑血管病及

肿瘤病研究。

Th 细胞是决定移植免疫排斥的关键成分，Th1细胞产生IFN-γ和IL-2介导细胞免疫；Th2细胞则产生IL-4、IL-10等，介导体液免疫。针对同种异体抗原的移植免疫应答主要是由Th1细胞介导。研究发现，在移植器官功能发生障碍之前，常检测到IFN-γ、

IL-2基因表达增高〔1〕

。侧脑室的脑室下带（Svz ）和海

马的颗粒下带（SGz ）集中于血管周围，而且和内皮细胞间仅隔一层基板，这种解剖上的毗邻关系暗示了NScs 和内皮细胞间存在密切的联系。本实验模拟内皮细胞与神经干细胞的体内环境建立共培养模型，观察Th1/Th2细胞相关细胞因子的变化，探讨同种异体内皮细胞与神经干细胞的免疫反应关系。1材料与方法1.1材料1.1.1

实验动物

新生3d 的Sprague-Dawley 乳鼠6只，新生

7 10d Sprague-Dawley 乳鼠20只，雌雄不拘，由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供。

1.1.2主要试剂及药物M199干粉培养基、D-Hank's 液干粉

（Hyclone ），谷氨酰胺（上海伯奥），肝素钠、明胶、台盼蓝、胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶（Sigma ），胎牛血清（杭州四季青），DNase Ⅰ（Roche ），多聚赖氨酸（武汉博士德），bFGF 、EGF （Pepro Tech EC ），抗Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体（美国PharMingen ），Trizo1试剂盒、DNA Marker 、逆转录（RT ）试剂盒、Pre Mix Taq （宝生物大连），β-actin 引物（上海生工），一抗（Abcam ），辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG 、辣根酶标记链霉亲和素、浓缩DAB 试剂盒（北京中山），其他常用试剂为国产分析纯产品。1.1.3

主要仪器

OLYMPUS IXTO 倒置显微镜（日本OLYM-PUS ），QWJ300TVBB 型CO 2培养箱（美国产），Sanyo 超低温冰箱（日本三洋），ELX800酶标仪（美国产），超净工作台（苏州净化），

E260电子天平（梅特勒），Beckman J2-21型低温离心机（美国产），Beckman DU-640紫外分光光度计（美国产），Nikon 倒置荧光相差显微镜（日本尼康），

PCR 仪（美国ABI ），DDY 多导电泳仪（北京六一），

UPW-5超纯水仪（美国产），DHW-60恒温水浴箱、DHP-81恒温箱（上海医用仪器厂），50ml 培养瓶、培养板、滤器等耗材（Costar 、Millipore 等公司）。1.2方法

1.2.1

血管内皮细胞培养液的配制

用超纯水溶解M199干

粉培养基，配制成体积比为1ʒ1的M199无血清培养基（每1000ml 培基中另加2.2g 碳酸氢钠、1g 葡萄糖、0.9g 谷氨酰