高效液相色谱仪校验方案

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仪器编号：QC-0072
题目
Title
高效液相色谱仪校验方案
方案号
Document #
PQP-QC072-02
设备编号
Equipment #
QC-0072
安装地点
Location
高效液相色谱室
生产厂家
Manufacturer
日本岛津（Shimadzu）公司
方案审批：
Approved By
姓名Name
职位
Position
签名
Signature
日期
Date
陈凯QC分析人员
于勇QC主管
莫远略质量部长
江苏阿尔法药业有限公司
Jiangsu Alpha Pharmaceutical Co., Ltd.
仪器编号：QC-0072
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目录
1. 目的
2. 确认人员及职责
3. 确认前确认
4. 确认依据及判定标准
5. 确认内容
6. 再确认要求
7. 确认结果汇总
8. 结果评价
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1. 目的
明确稳定性试验箱的校验项目、校验条件、校验方法、接受标准、校验周期等，便于检验人员按规程进行稳定性试验箱的校验操作。

保证实验室使用的称量点称量的准确性。

2．确认人员及职责
QC分析人员：负责起草确认方案和报告、组织协调开展确认；
QC主管：审核确认报告和报告；
质量部长：批准确认报告和报告。

3. 确认前确认
3.1人员确认
姓名职务职责签名日期
陈凯QC分析人员起草确认方案和报告，执行确认、组织
培训
赵家宽QC分析人员协助执行确认
于勇QC主管监督确认的进行
序号培训内容是否培训
1 《LC-2040C型高效液相色谱仪标准操作规程》（QC-3079）是□否□
2 《LC-2040C型高效液相色谱仪维护保养标准操作规程》
（QC-3080）
是□否□
3 《液相色谱仪的校验操作规程》（QC-4002）是□否□
4 《高效液相色谱仪校验方案》（PQP-QC072）是□否□
5 《检验室安全管理规程》（QC-1018）是□否□
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3.3 校验设备确认
序号设备及要求是否符合
1 秒表：分度值不大于0.1 s 是□否□
2 分析天平：最大称量200g,最小分度值0.1mg是□否□
3 容量瓶：10.0ml A级不少于10支是□否□
4 温度计：分度值不大于0.1℃是□否□
5 以上设备应在校验有效期内是□否□3.4 标准物质和试剂确认
序号标准物质、试剂及要求是否符合
1 甲醇：HPLC级是□否□
2 纯水：HPLC级是□否□
3 丙酮：分析级是□否□
4 萘：是□否□
检测人：日期：年月日
复核人：日期：年月日
4. 确认依据及判断标准
4.1 确认依据
4.1.1《LC-2040C型高效液相色谱仪安装使用说明》
4.1.2《液相色谱仪校验规程》JJG 705-2014
4.1.3《中国药典》2010年版二部附录
4.1.4《药品GMP指南》2010年版
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4.2 评判标准
4.2.1性能确认(PQ)
5. 确认内容 5.1性能确认(PQ) 5.1.1 输液系统确认 5.1.1.1泵耐压：
仪器连接完好后，以100%甲醇为流动相，流速0.2ml/min.启动仪器，待压力平稳后，观察10分钟，应无漏液现象。

卸下色谱柱，堵住泵出口（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保存5分钟，应无漏液现象。

5.1.1.2泵流量设定值误差S S 、稳定性误差S R ：
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算S S 、S R
系 统
校验项目
标 准
输液系统
1、泵耐压
2、泵流量设定值误差S S
3、泵流量稳定性S R
4、梯度误差G i 符合规定 ±2% 2% ±3% 柱温箱系统 1、温度设定最大误差 2、温度稳定性
±2℃ ≦1℃/h
检测器系统
1、基线噪音
2、基线漂移
3、最小检测限
5×10-4AU 5×10-3AU/30min 5×10-6g/ml
(萘/甲醇溶液) 整机性能
1、定性重复性
2、定量重复性
3、线性测定 ≤1.0% ≤3.0% 相关系数R≥0.999
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Fm=(W 2-W 1)/(ρ•t)
S s =(—
F m -F s )/F s ×100% 式（1）
S R =(F max -F min )/ —
F m ×100% 式（2）
式中：Fm —— 实测流速；
W 2 —— 容量瓶+流动相的质量，g ； W 1 —— 容量瓶的质量，g ；
ρ—— 试验温度下流动相的密度，g/mL ； t —— 收集流动相的时间，min ； —
Fm —— 同一组测量的算术平均值，mL/min ； FS —— 流量设定值，mL/min ；
Fmax — 同一组测量中流量最大值，mL/min ； Fmin — 同一组测量中流量最小值，mL/min 。

5.1.1.3 梯度误差G i ：
色谱条件：
色谱柱：限流阻尼管 流速：2.0ml/min 检测波长：265nm 流动相A ：纯化水 流动相B ：0.1%丙酮水溶液
以流动相A 平衡系统，按表2梯度程序测试2次，记录色谱图。

画出B 溶剂经5段阶梯从0%到100%B 梯度变化曲线（如图1），求出由B 溶剂变化所产生的每一段阶梯对应的响应信号的变化值L i ；按下列公式（1）计算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均流量（ml/min ） 次数
W1 W2 W2-W1
S S S R 0.5
1
2 3 1.0
1
2 3 2.0 1
2 3
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计算每一段阶梯的误差G i，取G i的最大值作为仪器梯度误差报告。

表2 梯度程序
时间(分) 流动相A% 流动相B%
1.00 100.0 0.0
1.01 80.0 20.0
4.00 80.0 20.0
4.01 60.0 40.0
7.00 60.0 40.0
7.01 40.0 60.0
10.00 40.0 60.0
10.01 20.0 80.0
13.00 20.0 80.0
13.01 0.0 100.0
16.00 0.0 100.0
21.00 100.0 0.0
26.00 100.0 0.0
图1 梯度组成准确度示意图
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i L =
2
)
()()1(22)1(11---+-i i i i L L L L 公式（1）
i L =
n
L
n
i i
∑=1
公式（2）
G i=%100⨯-i
i i L L L 公式（3）
式中：
i L ————第i 段阶梯响应信号值的平均值； L 1i ————第i 段阶梯第1组响应信号值；
L 1（i-1）—— 第（i-1）段阶梯第1组响应信号值； L 2i ————第i 段阶梯第2组响应信号值；
L 2（i-1）—— 第（i-1）段阶梯第2组响应信号值； i L ———— 5段阶梯响应信号值的总平均值； G i ————第i 段阶梯的梯度误差
表3
5.1.2 柱温箱系统确
认
依次设定柱温箱温度为25℃，35℃，45℃值进行校验，这些温度应覆盖实验室使用的柱温范围,当使用柱温超出该范围时，需要增加该温度点校验。

设定待校验温度，待测温仪显示的温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟记录一次，每个温度点记录7次。

求出平均值，设定值与平均值之差为设定值误差△T ，7次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc 。

i L 1i L 1（i-1） L 2i L 2（i-1） i L
G i 1
2 3 4 5
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表4
5.1.3 检测器系统确认 5.1.3.1基线漂移和基线噪声：
色谱条件：
色谱柱：C18柱 流速：1.0ml/min 检测波长：254nm 流动相：甲醇
在分析界面中点击基线检查，设置参数后，点击运行，工作站会自动记录30分钟，运行完毕后，机器自动计算出结果，给出是否通过的结论。

将运行界面复制到Word 文档中，打印出来即可。

设定温度
次数 测定温度
平均温度
ΔT
Tc
25℃
1
2 3
4 5 6 7 35℃
1
2 3
4 5 6 7 45℃
1
2 3
4 5 6 7
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为最强灵敏度。

待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。

以图谱
显示的刻度值，计算基线噪音和基线漂移值。

基线漂移：________________ < 5×10-4AU 基线噪声：________________ < 5×10-3AU/30min
5.1.3.2最小检测限：
按上述色谱条件，平衡系统。

取20µl 的1×10-7g/ml 萘/甲醇溶液进样，记录色谱图。

按下列公式计算最小检测限：
C L =H
cV N d 202
注：N d 与H 的单位应一致；分母中的20为进样体积，单位为µl 。

式中：
C L —— 最小检测浓度,g/ml ； N d —— 基线噪音高度；
c —— 标准溶液浓度,g/ml ； V —— 进样体积，µl ； H —— 标准溶液的峰高。

最小检测限（C L ）=H cV
N d 202=_______________________________
5.1.4整机性能确认
5.1.4.1定性与定量重复性：
色谱条件：
色谱柱：C18柱 流速：1.0ml/min 检测波长：254nm 流动相：甲醇
取1×10-4g/ml 萘/甲醇标准溶液连续进样6次，记录色谱图，以萘峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD ，即为整机性能的定性与定量重复性。

表5
进样次数 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD RT （min ）
峰面积
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录色谱图。

重复测定3次。

以进样体积V i为横坐标，以3次萘峰平均面积A i为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。

表6
进样体积(μl) 5 10 15 20 30
平均峰面积
线性方程，相关系数R
5.1.4.3线性：
配置萘/甲醇标准溶液，使浓度分别为0.2×10-4g/ml、0.4×10-4g/ml、0.6×10-4g/ml、
0.8×10-4g/ml、1.0×10-4g/ml、1.2×10-4g/ml以20μl的体积进样，重复测定3次，记录
色谱图。

以进样体积V i为横坐标，以3次萘峰平均面积A i为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。

表7
样品浓度×10-4g/ml 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 平均峰面积
线性方程，相关系数R
6.再确认要求
6.1再验证周期
6.1.1 设备大修后需再校验。

6.1.2 由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。

6.1.3 高效液相色谱仪的验证周期为12个月，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。

6.2 再验证内容
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

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7. 确认结果汇总
7.1性能确认(PQ)
系统校验项目标准测试结果
输液系统泵耐压
泵流量设定值误差S S
泵流量稳定性S R
梯度误差G i 符合规定±2%
2% ±3%
柱温箱系统温度设定最大误差
温度稳定性
±2℃≦1℃/h
检测器系统基线噪音
基线漂移
最小检测限
5×10-4AU
5×10-3AU/30min 5×10-6g/ml (萘/甲醇溶液)
整机性能定性重复性
定量重复性
线性测定
≤1.0%
≤3.0%
相关系数R≥0.999
8. 结果评价
起草人/日期：
QC审核人/日期：
QA审核人/日期：。