高效液相色谱仪验证方案设计

高效液相色谱仪验证文件
…年
（设备编号：…..）…………………
目录1验证方案的起草与审批
2概述
3验证目的
4再验证人员
5验证支持性文件
6相关文件检查
7仪器状态检查
8运行确认
9性能确认
10再确认
1验证方案的起草与审批
1.1验证方案的起草
1.2验证方案的审批
2概述：
⏹设备名称：高效液相色谱仪
⏹设备编码：……….
⏹规格型号：……………
⏹制造商：………………..
本高效液相色谱仪主要由四元泵、一个柱温箱、一个可变紫外检测器、一个自动进样器和一台………..工作站组成，各部分由工作站软件控制。

本仪器主要用于分析原料和成品的有关物质和含量。

为验证本仪器性能的稳定性，确认本仪器在检验工作中的准确性，特安排本次验证。

3验证目的：
3.1设备安装状态检查：检查设备各部件完整无损，电源稳定可靠，安装环境符合要求，
确认仪器经过校正合格且在有效期。

3.2运行确认：确认仪器的各种控制功能与性能符合要求；在正常运行情况下，确认高
压泵的流速，柱温箱温度控制和自动进样器等符合要求；确认电脑及工作站权限使用设置与运行，数据处理稳定可靠。

3.3性能确认：以………检测为例，证明高效液相色谱仪系统适应性，….检测的线性及
重复性等性能符合要求
4
5验证支持性文件
本方案依据下面列出规的有关条款，结合本公司需求制定。

以下规为有效的最新文本，设备所提供的性能及参数应能满足以下规的有关要求。

➢《高效液相色谱仪计量检定规程》JJG 705-2002
➢《液相色谱仪标准操作程序》
➢《高效液相色谱仪使用说明书》
➢《药品GMP指南》
➢《中国药品检验标准操作规》
6相关文件检查
6.2相关文件检查结果
相关文件检查偏差：
建议：
相关文件检查结论：
相关文件检查确认人：日期：
7仪器状态检查
7.1目的：检查仪器各部件及配套设施完好如初，安装环境符合要求，确认仪器经过校
正合格且在有效期。

7.3仪器状态检查结果
仪器状态检查偏差：
建议：
仪器状态检查结论：
状态检查确认人：日期：
8运行确认：
8.1目的：确认仪器的各种控制功能与性能符合要求；在正常运行情况下，确认高压泵
的流速，柱温箱温度等符合要求；确认电脑及化学工作台的权限设置有效、运行稳定，数据处理稳定可靠。

8.4高压泵流量稳定性测试（常用流量围为0.5～1.5mL/min）
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以水为流动相，设定不同的流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的10mL容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确收集至规定的时间，称重，计算实际流量。

计算其Ss应小于2%。

计算公式：Fm=(W2-W1)/（ρ·t）
Ss = (Fm-Fs)/Fs ×100%
其中：Fm为流量实测值(ml/min)，Fs为流量设定值(ml/min)，
W2为容量瓶加流动相的重量(g)，W1为容量瓶的重量(g)，
ρ为实验温度下流动相的密度(g/cm3)，t为收集流动相的时间(min)。

仪器/型号/编号/有效期/计量特性：1、天平/
2、温度计/
水温：℃水密度：g/cm3
8.5柱温箱温度设定值误差△Ts和控温稳定性Tc
方法：将数字温度计探头固定在柱温箱，开启柱温箱，设定温度为35℃，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

△Ts不超过±2℃，Tc不超过1℃。

计算：△Ts为平均值与设定值之差，Tc为7次读数中最大值与最小值之差。

仪器/型号/编号/有效期/计量特性：温度巡检仪/
将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇或10%甲醇溶液，流速为1.0ml/min，开机，待基线稳定后，记录基线，在20分钟的基线上，计算基线漂移和噪声。

8.7紫外检测器波长准确度和重复性
方法：将检测器通电预热稳定后，用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为
235nm ，257nm，313nm和350nm）从检测器入口注入样品池中冲洗，并将池充满。

启动色谱工作站分析模块，将检测器波长调到200nm～400nm围，进行色谱扫描，每个波长重复测量3次，记录波峰（或波谷）对应的波长，并与标准波长比较。

紫外波长标准溶液配制：称取基准重铬酸钾约12mg，置200mL量瓶中，用0.005mol/L 硫酸液溶解并稀释至200mL。

波长准确度（不超过±2nm）：最高（或最低）色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差。

波长重复性（优于2nm）：每个波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差。

8.8 运行确认结果
运行确认偏差：
建议：
运行确认结论：
运行检查确认人：日期：
9性能确认
9.1目的：以………..检测为例，证明高效液相色谱仪系统适应性，………检测的线性
及重复性等性能符合要求。

9.2系统适应性
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以。

为流动相；柱温为35℃，检
测波长为。

nm；取供试品溶液，精密量取10ul，注入液相色谱仪，与供试品溶液色谱图相比，出峰次序依次为……、……、……。

理论板数按……计算应不低于1500，各色谱峰的分离度应符合要求。

9.3……检测线性测试
取样品（）约0.25g，用流动相溶解并定容至50 ml，摇匀；为溶液A。

分别准确吸取溶液A 1ml，2ml，4ml，6ml，8ml于5个50ml的容量瓶中，加流动相至刻度,摇匀。

溶液Ⅱ相当于每ml约含……100ug，200ug，400ug，600ug，800ug。

取10μl注入液相色谱仪，记录图谱。

考查线性关系。

……的线性关系
浓度C（mg/ml） 1 2 4 6 8
峰面积T3
线性方程
相关系数
示意图：
检测结果小结：
9.4……检测重复性测试
称取样品（）约0.2g，称定6份，用水溶解并定容至50 ml，再精密吸取5ml 用流动相溶至50ml，摇匀；取10μl注入液相色谱仪，记录图谱。

计算……其他杂质以
及杂质总量的百分比。

重复性测定
序号 1 2 3 4 5 6
……%
平均值
RSD（%）
其他杂质重复性测定
序号 1 2 3 4 5 6 其他杂质%
平均值
RSD（%）
杂质总量重复性测定
序号 1 2 3 4 5 6 杂质总量%
平均值
RSD（%）
检测结果小结：
9.6性能确认结果
性能确认偏差：
建议：
性能确认结论：
性能检查确认人：日期：
10再确认
仪器再验证周期为1年，仪器维修后需要重新对关联项目进行再验证。