总酚超声波法提取

总酚超声波法提取：

取蓝莓叶片研磨成细粉待用，55%乙醇作为萃取液，料液比为1:25(g/ml)，

超声时间1.5 h，超声功率400 W超声2次，温度在60℃以下。然后4500 r/min

离心10 min，取上清液，得含总多酚的提取液，置4℃冰箱待用。

Folin-Ciocateu法进行蓝莓叶多酚含量的测定：

制备400 μg/ml没食子酸标准品溶液：准确称量没食子酸标准品200 mg，加

入适量70%乙醇使其溶解，再用70%乙醇定容至100 ml，摇匀，静置。移液器

移取20 mL，然后用70%乙醇定容至100 ml，摇匀，待用。

表1

组别 1 2 3 4 5 6 7 没食子酸溶液(ml) 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.35 蒸馏水(ml) 2.00 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 1.65

福林-酚试剂(ml) 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25

20％碳酸氢钠溶液(ml) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 按表中准确吸取没食子酸标准品溶液和蒸馏水体积共2ml，每支试管中再分

别加0.25 ml福林-酚试剂后摇匀。约3分钟后加入1 ml的饱和Na2CO3溶液，振

荡摇匀，用蒸馏水7.75ml定容至10ml，混匀后静置反应2h。反应结束，在波长

725nm处下读取吸光值。

总多酚含量的计算：

取100 μl多酚提取液，加入2ml蒸馏水与20 μl的福林-酚试剂，再加入900

μl20％碳酸氢钠溶液混匀，避光放置反应2 h。在725 nm处测定吸光度。计算多

酚的含量。

多酚总抗氧化能力的测定:

用pH 6.60磷酸缓冲液，以400 μg/ml的没食子酸标准品溶液为标准绘制标

准曲线，方法如下：

表2

组别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 磷酸缓冲液(ml) 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 没食子酸溶液(ml) 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 双蒸水(ml) 4.00 3.90 3.80 3.70 3.60 3.50 3.40 3.30 3.20 3.10 10%铁氰化钾(ml) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 10%三氯乙酸(ml) 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 离心3500 rpm/min分离10 min，取上清液2.5 ml，加2.5 ml双蒸水，再加

0.5 ml 1%氯化铁混合均匀混匀后静置10 min。波长700 nm条件下测吸光度，吸

光度越大，则样品还原性越强。提取液的抗氧化能力测定，取离心后提取液1 ml，按照上述方法，依次加入试剂。以试剂空白做对照，在700 nm波长下测吸光度A值，比较抗氧化活性。

实验结果：

图1 没食子酸含量测定标准曲线

由标准曲线方程，代入数据得总多酚的浓度为40.756μg/ml，蓝莓叶中总多酚含量为101.75mg/100g，是孟宪军在蓝莓果中提取到的总多酚(339.5mg/100g)的三分之一。说明蓝莓叶中含有大量的多酚类物质，若把蓝莓叶做成保健茶可以起到抗炎，抗肿瘤，改善记忆力等保健作用。

图2 没食子酸抗氧化力测定标准曲线