病理学常用技术的原理及应用_病理学课件

石蜡切片染色法
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二甲苯去蜡（经二次）5~10min；
无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各1~2min，然后
源自文库
蒸馏水洗3min（换数次）；
苏木紫液染色约5min（视染液种类和着色情况增减）； 水洗；1%酸性乙醇（盐酸1ml、70%乙醇99ml），或1%盐 酸分化。显策微镜下控制；
• 流水浸洗至少15min，至细胞核呈蓝色，也可短时水 洗后，浸于40℃温水使核变蓝。显微镜观察，若核染
具，对大体标本的病变性状（形状、大小、重量、色
泽、质地、表面及切面形态、与周围组织和器官的关 系等）进行细致地解剖、观察、测量、取材和记录， 必要时可摄影留作资料。大体观察不仅是病理医师的 基本功和正确病理诊断的第一步，也是医学生学习病
理学的主要方法之。
肿瘤大体观察
注意肿瘤的部位，形态、大小、颜色以及与周围 组织关系，有无完整或不完整的包膜，测量肿瘤的体
石蜡包埋
• 包埋时先将融蜡倾入模型，然后以钝头热镊夹取组
织块，使病灶或指定面向下（包埋分层次的组织在
蜡中安放平正。注意防止混杂组织碎屑；
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组织埋入蜡块中以后，即将该组织的号码小条埋入
蜡块一侧；
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蜡稍凝后，即移入冷水中加速凝固；
蜡块的大小，以在组织周围包有1~2mm之蜡为宜。
蜡块做成正方形或长0方形，以便切片。
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• 染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响。可根 据镜下观察所见酌予调整，但对组织化学反应（尤其是酶）， 其时间、温度等因素务必恒定，且应做对照片。染液着色力 显著减退时应更新，染色反应不正常，应检查染液及试剂是 否失效或误用；
• 染色过程中，勿使切片干燥，以免影响细胞状态。染色完毕 后用显微镜检查染色结果，是否符合要求，并核对标本种类、 号码、数量是否无误； • 火棉胶切片除可做常规染色外，尚可做常用特殊染色及PAS、 DNA、RNA等主要组织化学染色。卡红（Carmine）使火棉胶着 色，含此染料的染色效果不佳。
关的病理检查，应与旧片做对比。观察完毕后要提出
色过深或不足，应再分化或重染；
• 伊红液染1~2min后，95%乙醇二次，无水乙醇二次，
每次约1~2min；
• 苯酚二甲苯（1:4）1分钟； • 二甲苯二次,每次1分钟； • 用中性树胶或DPX以盖片封片，贴标签。
镜观检查
• • 镜观检查前应该对切片号码，标本种类；仔细阅读病 史和眼观检查记录。 要将切片全部检查到，以免漏诊。若曾做过与此次有
积，包括长度、阔度、高度（厘米），实质性肿瘤量
直径，浅表部的肿瘤应注意其与皮肤的关系，是否凸 出皮面，与皮肤有无粘连，四周有无正常的皮肤组织。 注意肿瘤的质地（硬实、中等、软）各处的坚实 度是否一致，有无与周围组织粘连的情况。
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切面应暴露肿瘤的最大面积，以便较全面观察肿瘤内
部，巨型肿瘤应多作平行切面；
水盒内，每合原则上放一块（小块组织例外），如
放入两块以上者，应在组织脱水盒上号码后注明 A、
B、C……字样，以便区分.
制片工作常规
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【 组织处理机脱水程序和时间 】
10%福尔马林 11小时； 85%乙醇 30分钟； 95%乙醇Ⅰ 30分钟； 95%乙醇Ⅱ 30分钟； 无水乙醇Ⅰ 30分钟； 无水乙醇Ⅱ 30分钟； 无水乙醇Ⅲ 30分钟； 丙酮 20分钟； 二甲苯Ⅰ 20分钟； 二甲苯Ⅱ 20分钟； 石蜡 30分钟； 石蜡 30分钟。
石蜡切片法
• • • • 将切片刀装在持刀座上，刀刃与蜡块表面呈50夹角。调整后勿任意变动； 将蜡块固定于持蜡器上，并调整蜡块与刀至适当位臵； 移动刀座或持蜡器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座； 以右手匀速旋转机轮，到组织已全部切出，或所需的部分已切出。微小组 织应注意勿修切过多。调节厚薄器到4～6um，继续切片，除特殊要求者， 一般勿切过厚； 以小镊取完整无划痕、厚薄均匀的切片，将其放入温水中，使展平无折， 每一蜡块多切数个切面，选择较好的切片裱于载玻片上。需要多个不同水 平切面时，应多选切片。水浴温度以低于蜡熔点10~12℃上下为宜； 裱片时使切片玻片之间无气泡，切片的位臵应端正，裱成后随即在玻片上 写上号码； 将切片放在烘片板或温箱中烘干； 有特殊要求者应按要求切片。
第十七章 病理学常用技术的原理及应用
提纲
大体与组织病理学技术 组织化学与免疫组织化学技术 电子显微镜技术 原位多聚酶链式反应技术 核酸原位杂交技术 显微切割技术 流式细胞技术 比较基因组杂交技术 生物芯片技术 激光扫描共聚焦显微技术
大体与组织病理学技术
（一）大体观察 主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工
注意肿瘤切面的形状，大小和颜色，在结构上是否均
匀一致，有无出血坏死，有无包膜，有无浸润； 包埋组织块的选择：根据肿瘤的大小决定包埋组织的 块数，原则上选择肿瘤中央；
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肿瘤边缘与瘤外组织相连部份，包括瘤外组织； 肉眼所见的不同性状的各部份； 所有淋巴结作包埋。
取材
检查标本，观察其大小形态、色泽、硬度及 肉眼病理改变并进行描述。检查病变部位应按诊断 的实际要求取材，组织块厚度不超过0.3cm，大小 在22×22mm范围内，放入用铅笔写好号码的组织脱
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染色常规
• • 切片脱蜡应彻底，室温较低时更应注意，以切片在二甲苯中呈透 明状，或移入乙醇后，片上无白色斑点为佳； 特殊染色、组织化学反应，按各方法的要求进行组织固定处理， 以保证效果。对酶反应更应严格要求。凡用含升汞固定液固定的 组织，于切片脱蜡后，应经脱汞处理，方可染色。其法为：切片 经水洗2min，浸于0.5%碘酊溶液中10min，水洗；0.5%硫代硫酸钠 水溶5min，用水彻底冲洗；经蒸馏水洗后染色。在脱汞过程中， 慎防切片脱落； 各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料着色效果常因生产厂和 批号不同而异，启用任何新品，均应先试染。配成的染液、试液 应盛于有色试剂瓶内，瓶签应写明名称、含量、配制年月日，顺 序保存于避光橱中，必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量 应适当；