血清尿酸TBHBA法测定-检验科生化室作业书

血清尿酸TBHBA法测定

实验原理

使用TBHBA（2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸）的酶比色测定法。尿酸酶氧化尿酸产生过氧化氢和尿囊素。在过氧化物酶存在下，过氧化氢氧化4-氨基安替比林和TBHBA（2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸），产生红色醌亚胺（Trinder反应产物）。

尿酸酶

尿酸+H2O+O2尿囊素+CO2+H2O2

过氧化物酶

TBHBA+4-氨基安替比林+2H2O2醌亚胺+3H2O

2.标本：

2.1病人准备：12小时禁食。

2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆，尿液。

3.标本存放：血清、血浆的稳定性：20～25℃保存可稳定3天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定6个月。对尿液用蒸馏水作1＋10稀释后检测，结果乘11后报告。

4.标本运输：常温条件下保存运输。

5.标本拒收标准：细菌污染的标本。

6.实验材料

6.1试剂申能尿酸测定试剂盒。货号：14130071701试剂1（6×64ml）试剂2（6×16ml）

6.1.1试剂组成

试剂1（R1）：

磷酸盐缓冲液pH7.0100mmol/L

TBHBA(2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸)1mmol/L

试剂2（R2）：

磷酸盐缓冲液pH7.0100mmol/L

4-氨基安替比林0.3mmol/L

铁氰化钾10mmol/L

过氧化物酶（POD）≥2000U/L

尿酸酶≥30U/L

6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。当546nm处的试剂空白吸光度小于0.5时，试剂可正常使用。

6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂

6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪

8.操作步骤

8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项

目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

9.检验结果的判断与分析

10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品尿酸校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果，以μmol/L报告。

12.参考值范围：（μmol/L）

血清/血浆

女性男性

成人137～363214～488

儿童0～5天113～470113～470

1～4岁101～303131～470

5～11岁178～381178～381

12～14岁190～363190～440

15～17岁190～381268～482

尿液≤4.76mmol/d（正常饮食）

≤3.57mmol/d（低嘌呤饮食）

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义：尿酸和尿酸盐是嘌呤代谢的最终产物。痛风是高尿

酸血症最常见的并发症，血清尿酸水平的升高导致在关节处生成尿酸钠晶体。此外导致血液中尿酸升高的原因还有：排泄功能下降的肾脏疾病，饥饿，滥用药物，过度饮酒或某些药物的使用。高尿酸水平也是冠心病的间接危险因子之一。低尿酸血症较少见，其与罕见的遗传代谢紊乱有关。

14.操作性能

14.1线性范围：17.8～1190μmol/L。

14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对70个样品进行UA检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.02x-26.2μmol/L；r=0.997。

14.4灵敏度：本试剂的检测限为17.8μmol/L。

14.5病人结果可报告范围：17.8～1190μmol/L。

15.超出范围结果处理：本法对尿酸的检测范围为17.8～1190μmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶

液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。

16.病危报警值的处理：当尿酸测定值>720μmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17.方法局限性

17.1本法对尿酸的检测范围为17.8～1190μmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中胆红素浓度≤171μmol/L，血红蛋白浓度≤1.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。抗坏血酸会干扰检测结果。如需克服抗坏血酸的干扰，推荐使用DiaSys公司提供的尿酸液体试剂（TOOS法）。

18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19.参考文献

ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-Books Verlagsgesellschaft;1998.p.208-14.

2.NewmanDJ,PriceCP.Renalfunctionandnitrogenmetabolites.In:BurtisC A,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.Philadelphi a:W.B.SaundersCompany;1999.p.1204-70

20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。