人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测

2/ ILI，肺炎
A/H7N人7 感染H禽4, H5, H62,00H3/荷7兰,H9,H189/0结膜, 炎H、I1LI1、肺A炎;I1V名死s亡.病例
A/H5N1
禽
2003至今, 15个国家 602/ ILI, 肺炎
A/H7N2(NY/107)
来源不清
2003/北美(New York)，1/肺炎
• 2. 当地流感监测网络实验室收到标本后24 小时内， 立即对呼吸道标本开展甲、乙型流感病毒通用引物 H5、H7亚型的检测。
• 若当地流感监测网络实验室检测结果为H5、H7核酸检 测阳性时，应当于24小时内将其中2管呼吸道相关原 始标本分别送省级疾控中心流感网络实验室和国家流 感中心。
• 具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒分 离，并将分离的毒株按要求及时送国家流感中心。
HPAI H7N7、 H7N3 、
H7N4
禽中暴发的H7
2006年前暴发的均为HPAI H7 欧洲：意大利、英国、德国、比利时、荷兰、丹麦、挪威、 捷克、西班牙、瑞典
近年来人感染禽流感病毒病例
病毒亚型
病原来源
时间/国家
病例数/临床表现
A/H7N7
鸥
1980/美国
3/结膜炎
A/H7N7
鸭
1996/英国
M2 蛋白 (only on type A）)
分类和命名
• 根据分类学分类流感病毒属正粘病毒科流感病毒属。
• 根据宿主分类为人流感病毒,禽流感病（AIV）,猪流感等
• 根据流感病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MS）抗原性 的不同，将其分为A、B、C三个血清型
➢ 根据流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的 差异，又可将其分为不同的亚型。目前，A型流感病 毒有16种特异的HA和9种特异的NA。
二、标本检测结果反馈和报告
➢ 开展实验室检测的疾控中心要及时将标本信息和 检测结果信息报送国家流感中心，并在24 小时内 由网络实验室所在疾控中心逐级反馈到病例所在 医院。
➢ 当标本为SARS、禽流感（H5、H7）、新型冠状 病毒或其他新型病原体检测阳性时，检测结果应 当及时报告给同级卫生行政部门。
人感染H7N9禽流感病毒 病原学特点及标本采集、实验室检测
江西省疾病预防控制中心 疾病检测所
2013年4月12日
目录
人感染H7N9禽流感病毒病原学特点
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略
人感染H7N9禽流感病例诊断程序
人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解析
人感染H7N9禽流感病毒病原学特点
中国地区H7 AIV
A/Baer's pochard/HuNan/414/2010(H7N1) A/chicken/Hebei/1/2002(H7N2) A/duck/Guangdong/1/1996(H7N3) A/duck/Hubei/126/1985(H7N8) A/duck/Jiangxi/1742/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1760/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1786/03(H7N7) A/duck/Jiangxi/1814/03(H7N7) A/duck/Nanchang/1904/1992(H7N1) A/duck/Nanchang/1944/92(H7N1) A/duck/Zhejiang/10/2011(H7N3) A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N3) A/duck/Zhejiang/2/2011(H7N3) A/magpie-robin/China/28710/93(H7)
流感大流行和流感病毒的变异
流感病毒株
H1N1
1918
39 Years
H2N2
1957 11 Years
1968
H3N2
41 Years
流感大流行造成的死亡人数 第一次世界大流行 2000－4000万
（第一次世界大战战亡人数<1000万）
第二次世界大流行 200万
第三次世界大流行 70-100万
2009
子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如 气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。
如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进 行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织） 标本。
➢ 采集时间：应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其 是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4 周的 恢复期血清。
➢ 标本分装：为避免标本反复冻融，保证标本检测质量。 采集的呼吸道标本每份分为3 管，每管不少于1ml 血清标本每份分为2 管，每管不少于0.5ml。 并填写不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表
（二）密切接触者标本采集
➢ 采集人：疾病预防控制机构负责标本采集和实验室检测
工作。
➢ 标本类型：应当采集病例的所有密切接触者的双份血清
A/H10N7
来源于疫区的鸟
2010/悉尼(New South 7/上呼吸道感染症状、结膜炎
CDC. Avian Influenza A Virus InfecWtionasleosf )Humans. http://www.cdc.gov/flu/avian/gen-info/avian-flu-humans.htm.
HPAI
1/USA H7N7
4/USA H7N7
1/USA H7N7
89/ Netherlands
H7N7 1/ Canada
1 died
H7N3
2/ Mexico H7N3
1996 2002 2003
2004
2006 2007
1959
1977 1979-
1980
1/England H7N7
7/ Italy H7N3
甲型 H1N1
第四次世界大流行2010年2月28日 ，至少 16455人
流感病毒
EM Image: from Linda Stannard Dept of Medical Microbiology University of Cape Town
Sketch map: from Paul Digard Dept Pathology University of Cambridge
人感染H7N9禽流感病例诊断程序
一、诊断程序
➢ 各省首例人感染H7N9禽流感病例由发生地省级卫 生行政部门组织省级临床专家组结合病例的流行 病学史、临床表现、省级疾病预防控制中心检测 结果及中国疾病预防控制中心实验室复核检测结 果等，按照诊疗方案进行诊断，由省级卫生行政 部门报告国家卫生和计划生育委员会。
➢ 人A型流感病毒：H1N1、H2N2、H3N2 ➢ 人禽流感病毒： H1N1、 H5N1、 H9N2、
H7N2、 H7N7 、 H7N3 、 H7N9、 H9N2 、 H10N7 ➢ 禽流感病毒： H5N1 、 H5N2 、 H5N8、 H5N9、 H7N3 、 H7N4 、 H7N7 、 H7N9 ➢ 猪流感病毒： H1N1、H1N2 、H3N2..
件的医疗机构进行检测。
➢ 各省（区、市）首例人感染H7N9禽流感疑似病例的 原始标本应在确保生物安全的情况下，送中国疾病 预防控制中心进行复检确认。
➢ 后续发生的病例，各地应当将其原始标本和病毒分 离物，在确保生物安全的情况下，按照规定及时送 中国疾病预防控制中心。
➢ 各省（区、市）卫生行政部门应当将具备PCR实验 室检测条件的医疗机构纳入人感染H7N9禽流感检测 机构，开展标本检测工作，并作为诊断的实验室依
1/结膜炎
A/H5N1
禽
1997/香港
18/ILI，肺炎
A/H9N2
鸡
1998/中国广东
5/ ILI，肺炎
A/H9N2
禽
1999/香港
2/ILI
A/H7N2 A/H9N2 A/H5N1
禽
2002/北美（Virginia） 1/ILI，血清学诊断
禽
血清学证据： 2003/香港
1/ILI
禽
2003/香港
据。
人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解析
➢ 各省后续病例的诊断仍按上述程序进行，但实验 室诊断依据可不需要中国疾病预防控制中心实验 室的复核检测结果。
二、实验室检测程序
➢ 人感染H7N9禽流感疑似病例先由各省（区、市）的国 家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件的 医疗机构进行标本的检测。 不具备检测条件的地区，在确保生物安全的情况 下，按照规定将标本送邻近具备相应条件和资格认证 的国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条
1/ USA H7N2
1/ Canada H7N3
4/ Wales H7N2
LPAI
1/ USA H7N2
1/ Norfolk H7N3
H7感染人（>100人）
美国、英国、意大利、荷兰、加拿大
H7N9病毒
✓共25株 ✓均为LPAI ✓无感染人病例
亚洲, 7 欧洲, 5
美洲, 13
亚洲：7株 均来自野禽 5株—韩国 2株—蒙古
标本（开始实施医学观察时和间隔2-4周后）；当密切接 触者出现急性呼吸道症状时还要采集咽拭子，送当地国家 级流感网络实验室进行检测。
（二）标本转送和检测
• 1.H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照 《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流 感病毒进行管理。 病例的临床标本采集后，县级疾病预防控制 机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照生 物安全的相关规定进行包装，在24 小时内送到当 地流感监测网络实验室进行检测。
• 3. 若当地流感监测网络实验室检测结果为甲型流 感和乙型流感通用引物均阴性时，应当立即将1管 原始呼吸道标本送省级疾控中心。省级疾控中心 收到标本后，应当立即对其中1管进行SARS 、新 型冠状病毒等相关病原体的检测，另1管送国家流 感中心。
• 4. 当地流感监测网络实验室将采集的血清标本分 别送省级疾控中心和国家流感中心开展病原体的 抗体检测。
➢亚型：H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H7N8 ➢野禽居多 ➢LPAI
核酸检测
病毒分离
从3个病例中分离到3株病毒
• A/Shanghai/1/2013(H7N9) • A/Shanghai/2/2013(H7N9) • A/Anhui/1/2013(H7N9)
序列测定
PB2
PB1 PA HA NP NA MP NS
6个内部片段来源于H9N2
三株H7N9病毒为同一基因类型
源自文库列特点
耐药性分析 对烷胺类药物是耐药的，即M2蛋白25-42位氨基酸发生S31N突变。
HA连接肽分析 HA蛋白339位连接肽由单个（PKGRGLFG）碱性氨基酸组成，根据既 往研究，具有这种序列特点的病毒对禽类呈低致病性。
受体结合位点及其它重要位点分析 Shanghai/1/2013的HA蛋白 226-228位氨基酸属于禽源受体结合位点 （为QSG）。Shanghai/2/2013和Anhui/1/2013的HA蛋白 226-228位 氨基酸受体结合位点（为LSG）
The virus
M2 protein
The Flu-Site

Neuraminidase
M1 Protein Viral RNA Haemagglutinin
01/99
About the influenza illness 1
Pharmaceuticals
流感病毒表面蛋白
神经氨酸酶
血凝素
RNA
PB2蛋白627位氨基酸为K，提示致病性增强。 NS1蛋白92位氨基酸为D，与禽流感病毒一致，而与人流感病毒不
同。
人感染H7N9禽流感病毒标本采集 及实验室检测策略
一、标本采集、转送和检测
（一）病例标本采集
➢ 采集人：医疗机构应当及时采集病例的相关临床标本。 ➢ 标本类型：包括病人的上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭
病例1 病例2 病例3
HPAI H7N3 LPAI H7N9
HPAI H7N3 LPAI H7N9
HPAI H7N7 、 H7N3、
H7N1 LPAI H7Nx、H7N2、 H7N3、H7N1、H7N9
LPAI H7N9
LPAI H7N8、
H7N9 HPAI H7N3 （Korea） （Pakistan）
A/H7N3
禽
2004/加拿大
2/结膜炎、ILI; 1名LPAI；1名HPAI
A/H5N2
禽
2005/日本(Ibaraki) 13/无临床症状，血清学诊断
A/H7N2
禽
2007/英国(Wales)
1/结膜炎、ILI
A/H9N2
来源不清
2007/香港
1/ ILI
A/H10N7
鸭
2004/埃及( Ismaillia) 2/ ILI