单细胞凝胶电泳实验流程和条件优化

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套适合海洋鱼类的单细胞凝胶电泳实验提供了借鉴。
关键词：镉；大弹涂鱼；外周血细胞；单细胞凝胶电泳；优化
中图分类号：￥１；Ｇ２．１９７４４３
文献标志码：Ｂ
文章编号：１７４５（０００６２— ５０２１）３—０３００４— ３
ｎｒｓｒｓｉｄｃｄｂａｍｉｍｈｏｄ．ＲｓｌｈｗｄｉＷｉｅｅｉｎｅ＇ｂｆｒａｄｉｈ— ｔｐｈｐｇｌｔｏｓｄｕｉｏｔｎｕｅｙｃｄｕｃｌｒｅｅｕｔｓｏｅｔｌｂ￣ｒｗｔＲｇｒｕｅ，ｓｎｗｃｉｉｓｌｓｈｉｓｙｓｏｅｍｅｈｄ，ｏｉｅｍ
陈寅儿，徐镇
３５１）１２１（宁波大学生命科学与生物工程学院，浙江宁波
摘要：应用实验室综合条件，对镉致大弹涂鱼外周血细胞ＤＡ损伤的单细胞凝胶电泳技术电泳实验条件进行优化。结果表Ｎ明，选用Ｒｎｅ＇液缓冲液、“ ｉｇｒｓ三明治 ” 式铺胶法、肌氨酸钠裂解液、４ｉ０ｍｎ解旋时间，实验效果较好。实验结果对建立一
１引言
单细胞凝胶电泳（ｉｇｅｅＥｅｔｐｏｅＳｎｌＣｌＧｌｌｅｏｈｒ— ｅｌｒ
沿海，采集后置于实验室水族箱内，清洁海水暂养
一
周后进行染毒实验。
２２主要试剂与仪器．
ｓ，ＳＧ）ｉＣＥ，又称彗星实验（ｏｅＡｓ）ｓＣｍｔｓｙ或彗星分ａ析，起源于１７９８年Ｒｄ—ｂｒｙｅｇ等报道的无电泳单细胞凝胶分析技术…。该技术能够灵敏地检测单个细胞水平的ＤＡ链断裂，具有所需细胞量少、应用面Ｎ广、敏感性强等优点ｊ国内外不少学者将其应。用于环境理化因素的遗传毒性、ＤＡ的损伤与修复Ｎ机理以及生物监测等领域。镉是一种广泛存在的有
第８卷第３期２１００年６月
实验科学与技术
ＥｐｒｍｅｔＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｇｘｅｉｎｃｅｃｎｅｈｏｏｙ
Ｖｏ．．１８Ｎｏ３
Ｊｎ２０ｕ．０１
单细胞凝胶电泳实验流程和条件优化
ＡｂｔａｔＴｉｐｐｒｏｔｚｔｄｔｅｓｎｌｅｌｇｌｅｅｔｐｏｅｉｂｅｅｔｇＤＮＡｄｍａｅｉｅｃｔｓｏｏｅｐｔａｍｕｅｔｓｒｃ：ｈｓａｐｉａｅｈｉｇｅｃｌｅｌｃｒｈｒｓｙｄｔｃｉｅｍｉｏｓｎａｇｎｈｍｏｙｅｆｂｌｏｈｈｌｓｐｅｉ－
毒金属污染物，损伤动物体内免疫细胞ＤＡ及改变Ｎ免疫功能，从而成为免疫毒理学领域研究的热点之
一
正常熔点琼脂糖（Ｍ、低熔点琼脂糖ＮＡ）（Ｍ）十二烷基肌氨酸钠（ｉａ司）ｄ１ＬＡ、Ｓｍ公ｇ；ＣＣ、Ｔｉ、三氯甲烷、二甲基亚砜（ＭＯ）、曲拉通ｒｓＤＳ
（ｒｉＴｉｏＸ一１０、台盼蓝、酚红、丫啶橙（海生ｔｎ０）上
工公司）ＹＩ型电泳仪（。ＤＹ— Ｉ北京六一仪器厂）、ＮＫＮ荧光显微镜。ＩＯ
２３实验方法．２３１缓冲液的选择．．
实验采用３种缓冲液进行条件优化，分别是
ＥｔｂｉｍｅｔａｄＯｐｉｚｔｎｏｉｇｅＣｌＧｅＥｅｔ０ｈｒｓｓａｌｈｎｎｔａｉｆＳｎｌｅｌｌｌｃｒｐ０ｅｉｓｍｉｏｓ
ＣＨＥＮＹｉ — ｒＸＵＺｅｎｅ，ｈｎ
（ｉｃｎｅａｄＴｃｎｌｙＦｕ，Ｎｎｂｎｖｒｔ，Ｎｎｂ３５１，ＣｉａＬｆＳｉｃｎｅｈｏｏＭｃｔｅｅｇｙｉｇｏＵｉｓｙｉｇｏ２ｈｎ）ｅｉ１１
ｓｒｏｉｅｌｓｔａｃｓｎｙａｅ，４ｎｔｓｈｌａｅｔ０ｍｉｕｅｅｉｓｉｃｍｅ，ｗｈｃｓｂｎｆｉｌｔｅｐａｓｉｂｅＳＥｔｒｎｓ．ｉｈｗａｅｅｃａｓｔｕｕｔｌＣＧｏｍａｅｆｈｉｏａｉｉＫｅｒｓ：ｃｄｕｈｏｄｙｗｏｄａｍｍｃｌｒｅ；ｂｌｏｈｈｌｓｐｃｉｉｓｒ；ｐｒｐｅａｌｏｅｌ；ＳＧＥ；ｏｔｚｔｎｉｉｏｅｐｔａｍｕｅｔｎｒｔｓｅｉｈｒｌｂｏｄｃｉｏｉｓＣｐｉａｉｍｉｏ Nhomakorabea。
目前，ＳＧＣＥ技术虽然应用广泛，但因影响实验
因素较多，实验效果不稳定。本研究结合镉致大弹涂鱼外周血细胞ＤＡ损伤的毒理实验，从多个环节Ｎ进行分析，优化毒理试验条件，同时也为其他海洋鱼类的ＳＧＣＥ分析方法提供参考。
Ｈｎｓ冲液、ＰＳａｋ缓Ｂ缓冲液（Ｈ．）Ｒｎｅｓｐ７４和ｉｒ液。ｇ＇取缓冲液９９，加入１血液，混匀，２９Ｌ５℃静置１ｈ２ｈ，显微镜下观察血细胞的存活率。及后２３２染毒及细胞检活．．