实验肿瘤学基本概念
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
病病原体的动物。。 三 级 ： 无 特 定 病 原 体 的 动 物 （ specific pathogen
free,SPF）, 动物体内不存在特定病原微生物和寄生虫的 实验动物。 四级：无菌动物，不存在微生物和寄生虫的实验动物。 一级动物只能用于教学和某些研究的预实验，卫生部以 上课题和研究生课题必须使用二级以上动物
细胞株(cell strain):通过选择或克隆，从亲代细胞系选出 的带有特定标志的细胞群。
瘤株：在动物体内可传代的肿瘤细胞系。
ATCC American Type Culture Collection 美国模式培养物收 集中心, 美国菌种保存中心
培养细胞的生长方式
贴附生长型细胞：细胞附着于支持物表面生长。 上皮细胞型：来源于外胚层和内胚层的细胞， 细胞为扁平多角形，细胞之间紧密相靠成片。 成纤维细胞型：来源于中胚层的细胞，细胞呈 梭形，排列成漩状、放射状、栅栏状。
培养条件
基 本 营 养 成 分 RPMI1640 DMEM (Dulbeccos modified Eagle medium) 谷 氨酰胺
生长因子 小牛血清 胎牛血清 灭活补体 56℃ 30min 环境 37℃ pH 7.2-7.4 渗透压 无污染无毒 细菌、支原体
体外培养的优点
优点：1.活细胞， 2.对象均匀，易控制实验条件，易于观察和纪
证制度得通知 （医学实验动物合格证书，医学实验 动物环境设施合格证书，医学实验动物全价营养饲料
合格证书，医学实验源自文库物饲料生产条件合格证书）
• 1988年 广东省实验动物管理办法
基本概念
实验动物（laboratory animal）:指人工培育的、 对其携带微生物实行控制、来源清楚、遗传背 景清晰、可用于科学实验得动物。
• 杂交群: 两个近交系动物间有计划进行交配获得的第 一代动物。
• 封闭群：由同一血缘品系进行自由交配，在固定场所 保存繁殖5年以上得动物群，如Wistar 大鼠、SD大鼠。
• 突变系：正常染色体基因突变导致遗传缺陷的动物， 如裸鼠
按微生物控制分类
一级：普通动物，不携带人畜共患疾病病原体的动物。 二级：清洁动物，不携带人畜共患疾病病原体和动物传染
录实验结果 3.易研究单个细胞的结构和功能，易于进行分
子生物学水平研究， 4.实验周期短，成本低，细胞系可长期保存。
体外培养的缺点
1.在体外细胞生物学行为与在体内不完全一样，
肿瘤细胞
G1 G0 终末分化
M
S
介质细胞
G2
2.转化（transformation）: 在体外培养过 程中细胞的遗传性状发生变化。分为一般 转化和恶性转化。 一般转化：指细胞获得不死性。 恶性转化：指出现在软琼脂培养基中浸 润生长；在动物体内成瘤；血清依赖性降 低；生长密度依赖性降低。
染色体分析 数量和核型、核带，标记染色体 细胞生长曲线和细胞周期 集落形成率 动物接种 成瘤，
组织形态学与原发肿瘤相似 污染 无病毒、支原体污染、细胞间交叉污染
Hela cell: 1951年 Henrietta Lack 宫颈癌
实验动物基础知识
法规
• 1988年 中华人民共和国实验动物管理条例 • 1989年 医学实验动物管理实施细则 • 1994年 关于在全国医疗卫生系统实行实验动物合格
悬浮生长型：造血系统的细胞
培养细胞的生长特点
贴附生长：支持物可为玻璃、塑料、胶原、其他 细胞等。 停泊或贴壁依赖性细胞（anchoragedependent cell)
接触抑制(contact inhibition)：正常细胞相互接触 后，细胞将向另一个方向移动，从而使细胞不 会重叠生长。
密度抑制(density inhibition)：正常细胞汇合成片 后细胞分裂停止，在静止状态下细胞存活一段 时间 汇合 confluent
实验用动物（animal for research）:能用于科 学实验的动物，包括实验动物、野生动物、经 济动物和观赏动物。
标准化实验动物：有明确的遗传背景、繁殖方 法、饲养环境、饲料成分均达到标准的实验动 物。在科学研究中必须使用标准化实验动物。
实验动物的分类(遗传背景)
• 近交系（纯系）：连续20代以上兄妹交配或亲子交配 而获得的遗传上达到一致的动物群。如BLAB/c小鼠。
2.传代：待细胞长满培养瓶，胰酶消化，按1：2-3传代 3.去除杂细胞 4.冻存细胞 10%DMFO+90%胎牛血清，
4℃ 30min, →-20℃ 2hrs, → -70℃ 过夜, →液氮，长期 保存。 登记，定期复苏细胞。 复苏：37℃ 水浴，加培养基洗一次，培养 5.鉴定
鉴
定
细胞形态观察 癌细胞多角型，重叠生长， 核浆比例失调，多核巨细胞
3. 体外实验结果不能外推到体内实验
细胞培养的应用
• 研究细胞与环境的相互作用 • 细胞间的相互作用 • 细胞内胞质活动 • 细胞质与细胞核之间的流动
建立细胞系的基本要求
• 细胞在体外培养半年以上，生长稳定， 保持细胞特征并能传代。
建系方法
1.原代培养：无菌操作， 取肿瘤组织，切成小片，小于0.5 毫米，进行培养， 或用胰酶、胶原酶消化成单细胞悬液， 血清灭活酶，培养
实验肿瘤学基本概念
肿瘤发生发展的一般过程
正常细胞 癌细胞 原位癌 浸润癌 转移癌
休眠
预防
诊断
治疗
肿瘤细胞的生物学特点
• 自我满足的生长信号 • 对生长抑制信号不敏感 • 逃避凋亡 • 无限增殖的潜能 • 血管生成 • 浸润和转移
实验肿瘤模型的要求
忠实地重现人类肿瘤的生物学特性
实验肿瘤学的研究方法
• 直接研究 • 建立细胞系 • 建立动物模型
细胞系的基本概念
组织培养和细胞培养：模拟体内环境在体外培养机体 组织和细胞，使之生存和生长。
原代培养（primary culture）:从体内取出组织和细胞的 第一次培养。
传代（passage）：细胞长满培养瓶后，细胞分成2-3瓶继 续培养。
细胞系（cell line）:原代培养细胞首次传代成功后的细胞， 称 细 胞 系 。 Finite cell line, continuous cell line, established cell line
free,SPF）, 动物体内不存在特定病原微生物和寄生虫的 实验动物。 四级：无菌动物，不存在微生物和寄生虫的实验动物。 一级动物只能用于教学和某些研究的预实验，卫生部以 上课题和研究生课题必须使用二级以上动物
细胞株(cell strain):通过选择或克隆，从亲代细胞系选出 的带有特定标志的细胞群。
瘤株：在动物体内可传代的肿瘤细胞系。
ATCC American Type Culture Collection 美国模式培养物收 集中心, 美国菌种保存中心
培养细胞的生长方式
贴附生长型细胞：细胞附着于支持物表面生长。 上皮细胞型：来源于外胚层和内胚层的细胞， 细胞为扁平多角形，细胞之间紧密相靠成片。 成纤维细胞型：来源于中胚层的细胞，细胞呈 梭形，排列成漩状、放射状、栅栏状。
培养条件
基 本 营 养 成 分 RPMI1640 DMEM (Dulbeccos modified Eagle medium) 谷 氨酰胺
生长因子 小牛血清 胎牛血清 灭活补体 56℃ 30min 环境 37℃ pH 7.2-7.4 渗透压 无污染无毒 细菌、支原体
体外培养的优点
优点：1.活细胞， 2.对象均匀，易控制实验条件，易于观察和纪
证制度得通知 （医学实验动物合格证书，医学实验 动物环境设施合格证书，医学实验动物全价营养饲料
合格证书，医学实验源自文库物饲料生产条件合格证书）
• 1988年 广东省实验动物管理办法
基本概念
实验动物（laboratory animal）:指人工培育的、 对其携带微生物实行控制、来源清楚、遗传背 景清晰、可用于科学实验得动物。
• 杂交群: 两个近交系动物间有计划进行交配获得的第 一代动物。
• 封闭群：由同一血缘品系进行自由交配，在固定场所 保存繁殖5年以上得动物群，如Wistar 大鼠、SD大鼠。
• 突变系：正常染色体基因突变导致遗传缺陷的动物， 如裸鼠
按微生物控制分类
一级：普通动物，不携带人畜共患疾病病原体的动物。 二级：清洁动物，不携带人畜共患疾病病原体和动物传染
录实验结果 3.易研究单个细胞的结构和功能，易于进行分
子生物学水平研究， 4.实验周期短，成本低，细胞系可长期保存。
体外培养的缺点
1.在体外细胞生物学行为与在体内不完全一样，
肿瘤细胞
G1 G0 终末分化
M
S
介质细胞
G2
2.转化（transformation）: 在体外培养过 程中细胞的遗传性状发生变化。分为一般 转化和恶性转化。 一般转化：指细胞获得不死性。 恶性转化：指出现在软琼脂培养基中浸 润生长；在动物体内成瘤；血清依赖性降 低；生长密度依赖性降低。
染色体分析 数量和核型、核带，标记染色体 细胞生长曲线和细胞周期 集落形成率 动物接种 成瘤，
组织形态学与原发肿瘤相似 污染 无病毒、支原体污染、细胞间交叉污染
Hela cell: 1951年 Henrietta Lack 宫颈癌
实验动物基础知识
法规
• 1988年 中华人民共和国实验动物管理条例 • 1989年 医学实验动物管理实施细则 • 1994年 关于在全国医疗卫生系统实行实验动物合格
悬浮生长型：造血系统的细胞
培养细胞的生长特点
贴附生长：支持物可为玻璃、塑料、胶原、其他 细胞等。 停泊或贴壁依赖性细胞（anchoragedependent cell)
接触抑制(contact inhibition)：正常细胞相互接触 后，细胞将向另一个方向移动，从而使细胞不 会重叠生长。
密度抑制(density inhibition)：正常细胞汇合成片 后细胞分裂停止，在静止状态下细胞存活一段 时间 汇合 confluent
实验用动物（animal for research）:能用于科 学实验的动物，包括实验动物、野生动物、经 济动物和观赏动物。
标准化实验动物：有明确的遗传背景、繁殖方 法、饲养环境、饲料成分均达到标准的实验动 物。在科学研究中必须使用标准化实验动物。
实验动物的分类(遗传背景)
• 近交系（纯系）：连续20代以上兄妹交配或亲子交配 而获得的遗传上达到一致的动物群。如BLAB/c小鼠。
2.传代：待细胞长满培养瓶，胰酶消化，按1：2-3传代 3.去除杂细胞 4.冻存细胞 10%DMFO+90%胎牛血清，
4℃ 30min, →-20℃ 2hrs, → -70℃ 过夜, →液氮，长期 保存。 登记，定期复苏细胞。 复苏：37℃ 水浴，加培养基洗一次，培养 5.鉴定
鉴
定
细胞形态观察 癌细胞多角型，重叠生长， 核浆比例失调，多核巨细胞
3. 体外实验结果不能外推到体内实验
细胞培养的应用
• 研究细胞与环境的相互作用 • 细胞间的相互作用 • 细胞内胞质活动 • 细胞质与细胞核之间的流动
建立细胞系的基本要求
• 细胞在体外培养半年以上，生长稳定， 保持细胞特征并能传代。
建系方法
1.原代培养：无菌操作， 取肿瘤组织，切成小片，小于0.5 毫米，进行培养， 或用胰酶、胶原酶消化成单细胞悬液， 血清灭活酶，培养
实验肿瘤学基本概念
肿瘤发生发展的一般过程
正常细胞 癌细胞 原位癌 浸润癌 转移癌
休眠
预防
诊断
治疗
肿瘤细胞的生物学特点
• 自我满足的生长信号 • 对生长抑制信号不敏感 • 逃避凋亡 • 无限增殖的潜能 • 血管生成 • 浸润和转移
实验肿瘤模型的要求
忠实地重现人类肿瘤的生物学特性
实验肿瘤学的研究方法
• 直接研究 • 建立细胞系 • 建立动物模型
细胞系的基本概念
组织培养和细胞培养：模拟体内环境在体外培养机体 组织和细胞，使之生存和生长。
原代培养（primary culture）:从体内取出组织和细胞的 第一次培养。
传代（passage）：细胞长满培养瓶后，细胞分成2-3瓶继 续培养。
细胞系（cell line）:原代培养细胞首次传代成功后的细胞， 称 细 胞 系 。 Finite cell line, continuous cell line, established cell line