藤茶止咳、化痰作用的研究

藤茶止咳、化痰作用的研究

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藤茶俗称端午茶、藤婆茶。野生藤茶广泛分布在我省梵净山地区，其味甘甜性凉，具有清热解毒、抗菌消炎、镇咳祛痰等功效，民间常常用来治疗感冒发热等疾病的。目前为止还没有看见有和它相关的止咳、化痰药理方面的研究报道。因此笔者对藤茶进行止咳、化痰作用的动物实验研究，为藤茶的综合利用提供科学依据。

1材料

1.1实验动物

昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，选用体重18～22g的健康动物，购自中山大学实验动物中心，合格证号:粤检证字SCXK(粤)-2009-0070。

1.2样品来源与配制

1.2.1藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取4个成分组。每组均折合生药含量350mg/ml，给药剂量相当于生药3500mg/kg体重。

1.2.2藤茶水提成分不同剂量组配制藤茶水提成分高剂量组为直接给药，折合生药含量350mg/ml，给药剂量相当于生药3500mg/kg体重;中剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按1∶2稀释后给药，折合生药含量117mg/ml，给药剂量相当于生药1167mg/kg体重;低剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按1∶8稀释，稀释后给药，折合生药含量38.9mg/ml，给药剂量相当于生药389mg/kg体重。

1.2.3其它样品配制生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9%;美沙芬阳性对照，含量为15mg/片，取2片溶解于20毫升生理盐水中，制成悬液，其浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重;痰咳净阳性对照，剂量为200mg/kg体重;阴性对照均采用蒸馏水。

2方法

2.1浓氨水喷雾法研究止咳药效

取昆明种小鼠120只，随机分为8组，每组15只。设阴性(蒸馏水)对照，阳性对照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分组、氯仿提取成分组、乙酸乙酯提取成分组，水提取成分组，其中水提取成分组细分为高、中、低3个剂量组。

实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.3ml/20g体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后1h，小鼠接受喷雾，按一定时间喷入浓氨水气雾，结束，立即取出小鼠，观察有无咳嗽反应。观察1min内咳嗽次数，若1min内出现3次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声)者，算作“有咳嗽”。否则算作“无咳嗽”。以停止接触氨水刺激后1min内咳嗽次数大于或等于3次判为阳性，个别动物在实验中出现死亡或休克，判为咳嗽阳性。用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(EDT50)。计算值，若值大于130%，说明有的止咳作用。若值大于150%，说明有显着的止咳作用(陈奇，2006;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。

EDT50=log-1c/n(式中n为动物数，c为rx值的总和，r为每剂量组的动物数，x为剂量(即喷雾时间)的对数。)=给药组的EDT50/对照组的EDT50×100%

2.2对小鼠气管酚红排泌量的影响

标准酚红曲线的绘制:使用分析天平准确称取一定量的酚红，用5%碳酸氢钠溶解，配成每1ml含12.5μg，然后顺次进行倍比稀释成每毫升含酚红6.25μg、3.125μg、1.5625μg、0.7813μg、0.3906μg、0.1953μg、0.0977μg、0.0488μg，用分光光度计测OD 值。以酚红浓度为纵坐标，OD值为横坐标，根据酚红浓度和OD值计算出回归方程。根据回归方程计算出小鼠酚红的排泄量(陈奇，2006)。

取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只。

设阴性(蒸馏水)对照组、阳性(痰咳净)对照药物组、藤茶水提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组。实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.3ml/20g体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后30min，腹腔注射5%酚红生理盐水溶液

0.2ml/20g，注射后30min，脱颈椎处死小鼠，剪取气管，将各气管段放入预先盛有1.5ml的5%NaHCO3溶液试管中，后置于涡流混合器上震荡2min，使气管段中的酚红完全释放，检测前试管中加入1molNaOH溶液0.1ml，离心(3000rpm，5min)，后将试管中溶液于721型分光光度计546nm处测OD值，根据回归方程计算出酚红排泌量。

计算公式:y=0.119x-0.0059x为OD值，y为气管酚红排泌量(陈奇，2006;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。

2.3统计学处理实验

数据以“均数±标准差”表示，采用SPSS12.0统计软件进行统计学处理。

3结果

3.1藤茶对浓氨水致咳小鼠的影响

藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石

油醚提取物，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与阴性对照组比较，均有显着延长，在统计学上有显着差异。其中藤茶水提取物的耐受时间最长，其R 值达到210.38%，阳性(美沙芬)对照组的值为225.42%，可见其疗效与阳性对照组相当，都达到显效水平。

鉴于藤茶水提取物止咳作用显着，又进一步研究藤茶水提物不同剂量组的止咳效果。结果可见，藤茶高、中剂量组值分别达到210.38%和173.78%都达到显效水平，低剂量组值为137.09%达到有效水平。综上，可见藤茶具有良好的止咳作用。

3.2藤茶对小鼠气管酚红排泌量的影响

由实验结果可知，藤茶水提取物不同剂量灌胃给药对小鼠支气管分泌物量与阴性对照组比较，均有显着增加，在统计学上有显着差异。其中藤茶水提取物高、中剂量组气管酚红排泌量分别达到4.647±0.903μg/ml和5.424±1.465μg/ml，均高于阳性(痰咳净)对照组的3.672±0.894μg/ml，说明藤茶水提物高、中剂量组化痰效果优于阳性药物痰咳净。综上所述，