waters液相色谱质谱联用的原理应用课件
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子离子分析（ MS/MS ） 子离子，用于结构判断(得到化合物的二级谱图即碎片离 子)和选择离子对作多种反应监测（MRM）。 子离子谱图与锥体电压断裂谱图（源内CID）可能十分相 似，所不同的是子离子质谱图已知只有一种质量通过MS1， 因此也已知所有碎片离子都是由我们所选定的母离子所 产生的，所以我们更相信由MS/MS产生的谱图的纯度。
柱 6）合适的电压：DP电压高时，样品在源内分解或碎裂；高DP
电压时回使多电荷离子比例低，多聚体也减少 7）样品结构和性质 8）杂质的影响：溶剂的纯度、水的纯净程度等。当成分复杂，
杂质太多时，竞争使被测物离子化不好，同时使LC分离不好 9）样品浓度不够，有时需要浓缩
分子量测定中的误判
溶剂中的杂质 来自于塑料添加剂的峰 样品容器不干净，常见表面活性剂的峰 进样系统污染 样品在源内碎裂，形成碎片离子
各种扫描方式的Hale Waihona Puke Baidu理解释：
Q1 Full Scan (Start – Stop)(Q1全扫描)
Q1 always used as single MS analyzer Used primarily for ident. of precursor ion
SIM - Selected Ion Monitoring(选择离子监测)
液相色谱—质谱联用的 原理及应用
中心实验室
样品的预处理常用方法
a）超滤 b）溶剂萃取／去盐 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）净化／去盐 e）色谱分离 反相色谱分离 亲和技术分离 f）甲醇或乙腈沉淀蛋白 g）酸水解，酶解 h）衍生化
化合物鉴别
全扫描方式（Q1扫描） 全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子，从而可 判断出化合物的分子量，用于鉴别是否有未知物，并确 认一些判断不清的化合物，如合成化合物的质量及结构。
若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫
描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。
若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
Used to optimize analyzer for specific ions SIM used for quantitative analyses Q1 SIM used to “optimize” precursor ion
Maximize signal in preparation for MS/MS
Product Ion Scan(子离子扫描)
-After identification, the precursor ion is sent into the collision cell and fragmented by CID -Q1 is fixed, Q3 sweeps a given mass range -Used for structural elucidation -First step to developing quantitative method
影响分子量测定的因素
1）pH的影响：正离子方式pH要低些，负离子方式pH要高些， 除对离子化有影响外，还影响LC的峰形。
2）气流和温度：当水含量高及流量大时要相应增加。 3）溶剂和缓冲液流量：流速适当高可以提高出峰的灵敏度。 4）溶剂和缓冲液的类型：通常正离子用甲醇好，负离子乙腈
好些 5）选择合适的液相色谱类型：正相、反相、选择合适的色谱
用大气压电离质谱仪可以得到分子量信息
正离子方式常出现如下离子: -Na 22 Da. higher than M+H -K 38 Da. higher than M+H -Li 6 Da. higher than M+H -NH4 17 Da. higher than M+H -ACN 40 Da. higher than M+H 2M+H,2M+Na等 负离子方式常出现如下离子: -TFA 114 Da. higher then M-H (113 and 227 background) -Acetate 60 Da. higher then M-H -Formic 46 Da. higher then M-H -Cl 36 Da. higher than M-H
537.8793
分子量测定失败的原因
a）流动相不合适 b）不挥发性盐的影响 c）成分复杂，杂质太多 d) 样品浓度不够 e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫
描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。
（3）母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合 物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在 分裂过程中会生成共同的子离子，这种扫描功 能在药物代谢研究中十分重要。
(4)中性丢失扫描
中性丢失扫描分析可用来鉴定和确认类型已知 的化合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检 测项目。也可以帮助进行未知物结构判断，例 如有中性丢失18Da的意味着-H2O，28-CO， 30-HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
LC-MS中常见的本底离子
m/z 50-150, 溶剂离子，[(H2O)nH+ ，n= 3-112] m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6,
柱 6）合适的电压：DP电压高时，样品在源内分解或碎裂；高DP
电压时回使多电荷离子比例低，多聚体也减少 7）样品结构和性质 8）杂质的影响：溶剂的纯度、水的纯净程度等。当成分复杂，
杂质太多时，竞争使被测物离子化不好，同时使LC分离不好 9）样品浓度不够，有时需要浓缩
分子量测定中的误判
溶剂中的杂质 来自于塑料添加剂的峰 样品容器不干净，常见表面活性剂的峰 进样系统污染 样品在源内碎裂，形成碎片离子
各种扫描方式的Hale Waihona Puke Baidu理解释：
Q1 Full Scan (Start – Stop)(Q1全扫描)
Q1 always used as single MS analyzer Used primarily for ident. of precursor ion
SIM - Selected Ion Monitoring(选择离子监测)
液相色谱—质谱联用的 原理及应用
中心实验室
样品的预处理常用方法
a）超滤 b）溶剂萃取／去盐 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）净化／去盐 e）色谱分离 反相色谱分离 亲和技术分离 f）甲醇或乙腈沉淀蛋白 g）酸水解，酶解 h）衍生化
化合物鉴别
全扫描方式（Q1扫描） 全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子，从而可 判断出化合物的分子量，用于鉴别是否有未知物，并确 认一些判断不清的化合物，如合成化合物的质量及结构。
若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫
描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。
若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
Used to optimize analyzer for specific ions SIM used for quantitative analyses Q1 SIM used to “optimize” precursor ion
Maximize signal in preparation for MS/MS
Product Ion Scan(子离子扫描)
-After identification, the precursor ion is sent into the collision cell and fragmented by CID -Q1 is fixed, Q3 sweeps a given mass range -Used for structural elucidation -First step to developing quantitative method
影响分子量测定的因素
1）pH的影响：正离子方式pH要低些，负离子方式pH要高些， 除对离子化有影响外，还影响LC的峰形。
2）气流和温度：当水含量高及流量大时要相应增加。 3）溶剂和缓冲液流量：流速适当高可以提高出峰的灵敏度。 4）溶剂和缓冲液的类型：通常正离子用甲醇好，负离子乙腈
好些 5）选择合适的液相色谱类型：正相、反相、选择合适的色谱
用大气压电离质谱仪可以得到分子量信息
正离子方式常出现如下离子: -Na 22 Da. higher than M+H -K 38 Da. higher than M+H -Li 6 Da. higher than M+H -NH4 17 Da. higher than M+H -ACN 40 Da. higher than M+H 2M+H,2M+Na等 负离子方式常出现如下离子: -TFA 114 Da. higher then M-H (113 and 227 background) -Acetate 60 Da. higher then M-H -Formic 46 Da. higher then M-H -Cl 36 Da. higher than M-H
537.8793
分子量测定失败的原因
a）流动相不合适 b）不挥发性盐的影响 c）成分复杂，杂质太多 d) 样品浓度不够 e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫
描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。
（3）母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合 物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在 分裂过程中会生成共同的子离子，这种扫描功 能在药物代谢研究中十分重要。
(4)中性丢失扫描
中性丢失扫描分析可用来鉴定和确认类型已知 的化合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检 测项目。也可以帮助进行未知物结构判断，例 如有中性丢失18Da的意味着-H2O，28-CO， 30-HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
LC-MS中常见的本底离子
m/z 50-150, 溶剂离子，[(H2O)nH+ ，n= 3-112] m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6,