2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法存在问题及修定内容 ppt课件

四、试验稀释液、冲洗液 ⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经验证过
的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 ⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂
除证明其有效性外还应证明对污染的微生物无 影响修改为无毒性。
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五、方法验证试验
⒈试验菌株 大肠埃希菌替代铜绿假单胞菌
⒉供试品用量 薄膜过滤法 取每种培养基规定 接种的供试品总量。
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六、供试品的无菌检查法
⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份 培养基接种的供试品量按表2、表 3规定。
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⒉薄膜过滤法 ⑴滤膜选择 抗生素供试品滤膜应选择低吸附的 滤器及滤膜。 ⑵冲洗量 每张滤膜每次冲洗量一般为100ml， 总冲洗量不得超过1000ml 。 ①水溶液供试品 含抑菌成分所用的冲洗量、冲洗方法同方法验及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用
，若保存在2～8℃可以在24小时内使用。黑曲霉 孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内 使用，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝 固，按规定条件培养计数，同时用相应的对照培 养基替代被检培养基进行上述试验。 ②对照培养。
三、培养基
⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基 的使用范围。
⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类
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3、培养基灵敏度试验 ⑴ 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备 “用适
宜的方法吸出孢子悬液”。 ⑵在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05％
v/v）聚山梨酯80。
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2. 常见干扰物的中和剂和灭活方法 参见 表1常见干扰物的中和剂或 灭活方法。
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6、供试品检查 ⑴平皿法 采用平皿法进行菌数测定 时，按计数方法的验证试验确认的程 序进行供试液制备。
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⑵培养时间 除另有规定外，细菌培养3天，
霉菌、酵母菌培养5天，必要时， 可适当延长培养时间至7天进行菌 落计数并报告。
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起草的指导思想
着力解决发展中的问题,提高我国药 品标准总体水平，着力提升《中国药 典》在国际社会中的地位和作用，提 高综合竞争力，
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2010年版无菌检查法
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一、进一步确定了无菌检查法的定义：
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微生物限度检查
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1、培养条件 控制菌培养温度30℃～35℃。 2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ ⑴药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 ⑵一些贵重药品也应考虑检验量。
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3、检验量
⑴中药膜剂检验量100cm2 。 ⑵沙门菌检验量为20 g或20ml（其中10 g用于 阳性对照）。
磷脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。
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⑷具抑菌活性的供试品
当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简 便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的 微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应 尽量选用薄膜过滤法。
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①离心沉淀集菌法
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⑶菌数报告规则
⒈若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于 15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
⒉细菌、酵母菌和霉菌平均菌落数在选取菌落 数小于300cfu和100cfu的稀释级作为菌数报告的 依据。
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⑷薄膜过滤法
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4、供试液的制备
⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无毒性。 ⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。
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⑶新增贴剂供试液制备
供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵
表1 、表2 、表3增修订
表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量
修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每 支供试品接入每管培养基的最少样品量
第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个 容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检
500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液 用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。
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细菌、霉菌及酵母菌计数
⒈ 计数培养基的适用性检查 ⑴菌种 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉
无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医 疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的 一种方法。
二、进一步明确了无菌检查保障
1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止 再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长 。
2 、无菌检查环境检测日常检验还需进行环境 检测。
3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识， 2021并/4/3 经过无菌技术的培训。
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⑵装有药物的注射器供试品
取规定量，排出注射器中的内容 物至无菌容器中，若需要可吸入 稀释液或标签所示的溶剂溶解， 或非水溶性制剂供试品项下方法 操作。
⑶无菌气雾剂
供试液的制备将供试品置至少20℃的冷冻室约1小时。
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⒋ 直接接种法删除β－内酰胺类 或磺氨类供试品。
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验数量加倍。
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表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验 量 修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每 个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最 少检验数量加倍。