血清总胆固醇的测定

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氧化酶法测定血清总胆固醇，此方法特 异性好和灵敏度高，既可用于手工操作， 也可自动化分析
临床意义
• 胆固醇增高：常见于动脉粥样硬化，原发性高脂 血症，（如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺 陷症，多源性高胆固醇血症，混合性高脂蛋白血 症等），糖尿病，肾病综合症，总胆管阻塞，甲 状腺功能减退，肥大性骨关节炎，老年性白内障 和牛皮癣等。 • 总胆固醇降低：常见于低脂蛋白血症，贫血，败 血症，甲状腺功能亢进，肝疾病，严重感染，营 养不良，肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血 性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。
• 鱼类 鱼类。乌鱼又称黑鱼性寒味甘，能补脾利水同时 它又是一种高蛋白低脂肪食品。青鱼性平味甘， 能补气健脾化湿。鳆鱼又称鲍鱼，肉性平味甘咸， 蛋白质含量极高，而脂肪含量很低的清补营养品。 黄鳝甘温，古代医家认为它有添精益髓，又有通 血脉、壮筋骨的作用同时它又是一种低脂食品。 另外，如黄瓜、海带、羊栖菜、海藻、槐花等 如黄瓜、 如黄瓜 海带、羊栖菜、海藻、槐花等食 物，均有降低血中胆固醇的效果。 • 总胆固醇偏高的患者可以多吃些，但是吃任何东 西都要把握一个度。另外要保持膳食的平衡，不 吃辛辣刺激的以及加工类的食物。总胆固醇偏高 的饮食固然重要，最根本的还是进行治疗。
胆固醇氧化酶法
实验目的பைடு நூலகம்
掌握血清总胆固醇测定的方法（胆 固醇氧化酶法）与临床意义
实验原理
• 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水 解为游离胆固醇和游离脂肪酸 。 • 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作 用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。 • 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在 时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚 胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅 与标本中TC含量成正比。
健康
• 1.饮食不当。过多进食含高胆固醇的食物，比如 心、肝等动物内脏。身体内摄入过多的胆固醇， 引起总胆固醇偏高，这也是造成总胆固醇偏高的 原因之一 • 2.肝细胞受损。胆固醇的酯化发生障碍，血中胆 固醇减少，在肝硬化、重症肝炎等严重损害时， 血中总胆固醇也降低。 • 3.阻塞性黄疸。这时由于胆汁排出受阻，血中出 现脂蛋白-X和肝内胆固醇合成亢进所致，以游离 型胆固醇的增加为主，引起总胆固醇偏高。所以 阻塞性黄疸是造成总胆固醇偏高的原因之一。
• 如果其在血液中浓度过高，也可造成心脑 血管的严重损害。肝功能障碍时CE会减低。 临床检测TCH浓度，主要用于原发性和继 发性脂代谢异常症的诊断、动脉粥样硬化 疾病的危险性预测、重症肝病及营养学评 价。
HOW
• 总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法 两类。本实验采用后一方法。 • 化学比色法： 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛 产生紫红色物质，此物质在550nm波长处 有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固 醇的定量测定。
血清总胆固醇的测定
WHAT
• 血清中的胆固醇包括与脂肪酸结合的胆固 醇酯（CE）和游离胆固醇（FC），前者约 占总胆固醇的70%. • 人体内含胆固醇约140g，主要在体内合成， 也可从食物中吸收。其中25%分布在脑和 神经组织，10%~20%分布在血液中。
WHY
• 胆固醇是脂类化合物的一种，是合成肾上腺 皮质激素、性激素、胆汁酸及构成细胞膜的 重要成分。 • 正常人血清胆固醇含量围:3.0~5.20mmol/L 危险阈值:5.20~6.20mmol/L 高胆固醇血症: ≥6.20mmol/L
试剂
• 基础液：100ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 （pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替 比林16mg,苯酚132mg,TritionX-100 0.2ml • 酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固 醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合 剂1ml,加基础液30ml,混匀既得 • 胆固醇标准液（5.17mmol/L）:精准称取胆 固醇200mg,用纯无水乙醇溶解，用乙醇定 容至100ml，分装4ºC保存，临用时取出
操作
项目 测定管 标准管 空白管
血清/ul
50
——
50
—— ——
50
胆固醇标准液/ul
—— ——
1.50
蒸馏水/ul
——
1.50
酶试剂应用液/ul
1.50
• 混合后置于37ºC水浴 中保温15分钟，用空 白管调零，在500nm 波长处测吸光度。
• 公式：
A测 血清总胆固醇 = · 5.17 A标
思考 互相问答
• 总胆固醇偏高的饮食原则是多吃降低胆固醇以及保 肝护肝的食物。比如： • 豆腐 豆腐。豆腐富含蛋白质，糖分也较少，不含胆固醇， 常吃豆腐有降低胆固醇，防止血管硬化的作用。 菌菇类。香菇中含有的核糖类物质，可以有效地抑 菌菇类 制血清和肝脏中胆固醇的上升。金针菇有降血脂的 作用，草菇含大量的维生素C和蛋白质，而脂肪含 量低，又不含胆固醇，同时还具有降低血中胆固醇 的作用。 肉类。 肉类。马肉中含丰富的蛋白质，而 脂肪含量很低，尤其是胆固醇含量又很低其蛋白质 中的氨基酸达20余种，营养价值很高。鸽肉能益气、 养血、补肾，又属低脂肪高蛋白的补益食品。鸡肉 有甘温益气作用，而且又是一种高蛋白低脂肪食物。 蛙肉性凉味甘，能滋阴降火，对高脂血症患者来说， 是为理想的清补食品。
注意事项
• • • • • 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2、比色应在30min内完成； 3、试管在操作前尽量保持干燥； 4、试剂中酶的质量影响测定结果 ； 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成 分中去掉胆固醇酯酶即可。
• 此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆 红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生 素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使 结果降低。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃ 可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。