细胞凋亡及机制检测复习过程
细胞凋亡的检测方法
细胞凋亡的检测方法细胞凋亡是一种程序性死亡方式，它在维持机体内稳态、发育、组织修复和免疫调节等方面起着重要作用。
因此，对细胞凋亡的检测方法进行研究和探索具有重要意义。
目前，常用的细胞凋亡检测方法主要包括形态学观察、DNA断裂检测、蛋白质检测和细胞功能检测等多个方面。
下面将对这些方法进行详细介绍。
首先，形态学观察是最为直观的细胞凋亡检测方法之一。
在细胞凋亡过程中，细胞会出现形态学上的变化，如细胞体积减小、细胞浆浓缩、细胞膜破裂等。
这些变化可以通过显微镜观察细胞形态的改变来进行检测。
其次，DNA断裂检测也是常用的细胞凋亡检测方法之一。
在细胞凋亡过程中，细胞的DNA会发生断裂，形成典型的“DNA ladder”图谱。
通过凝胶电泳等技术可以检测出这种特征性的DNA断裂，从而判断细胞是否发生凋亡。
另外，蛋白质检测也是细胞凋亡检测的重要手段之一。
在细胞凋亡过程中，一些特定的蛋白质会发生变化，如Bcl-2家族蛋白、caspase蛋白等。
通过Westernblot等技术可以检测这些蛋白质的表达水平，从而判断细胞是否发生凋亡。
最后，细胞功能检测是细胞凋亡检测的另一重要方法。
在细胞凋亡过程中，细胞的功能会发生改变，如线粒体功能的丧失、细胞色素C的释放等。
通过检测这些细胞功能的改变可以判断细胞是否发生凋亡。
综上所述，细胞凋亡的检测方法主要包括形态学观察、DNA断裂检测、蛋白质检测和细胞功能检测等多个方面。
这些方法各具特点，可以相互印证，从而准确判断细胞是否发生凋亡。
在实际研究中，可以根据具体情况选择合适的方法进行检测，以更准确地了解细胞凋亡的发生和机制。
希望本文对细胞凋亡的检测方法有所帮助。
2023届高三生物一轮复习课件细胞的分化、衰老、凋亡与癌变
例如： 维
效应T细胞
使靶细胞
裂解死亡
2．细胞凋亡和细胞坏死的区别（三维设计P94）
例如： 效应T 细胞使靶细胞 裂解死亡
例如： 病毒 在靶细胞内迅 速增殖使靶细 胞裂解死亡
知识点四 细胞的癌变
细胞生长
分裂
分化 癌变
衰老 凋亡
癌细胞 P125：
与正常分化有何不同？
有的细胞受到致癌因子的作用，细胞中遗传物质发生变化， 变成不受机体控制的、连续进行分裂的恶性增殖细胞。
训练2：有人把细胞分化中表达的基因形象地分为“管家基因” 和“奢侈基因”。“管家基因”在所有细胞中表达，是维持 细胞基本生命活动所必需的；而“奢侈基因”只在特定组织
细胞中表达。下列属于“奢侈基因”表达产物的是（ B ）
A. 呼吸酶
B. 胰高血糖素
C. 膜蛋白
D. ATP水解酶
训练3：同一生物不同部位的细胞如人的肝脏细胞和肌肉 细胞，下列结构或物质是否相同？
3．干细胞
(1)概念：动物和人体内仍保留着少数具有分___裂__和__分__化__能力的细胞，这些细胞 叫做干细胞。
(2)类型
项目
胚胎干细胞
成体干细胞
来源 来自早___期__胚__胎__或原始性腺组织
来自各式各样的组织
功能 可以分化成_各__种__组织和器官 具有分化成_特__定__功___能_ 细胞的能力
细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡； 限制，但细胞核仍具有全能性
③普遍性：生物界中普遍存在
结果 形成形态、结构、生理功能不同的细胞
形成新的个体
大小 细胞分化程度有高低之分：体细胞>生殖细 细胞全能性有大小之分：受精卵>
生物二轮复习 细胞分化、衰老、凋亡、癌变课件
二、细胞的衰老和凋亡 1．衰老细胞的特征 (1)结构方面 ①细胞体积 变小 ，而细胞核体积 变大 。 ②细胞膜 通透性 改变。 ③核膜内折， 染色质 收缩，染色加深。 (2)代谢方面
①水分 减少 ，酶活性降低，新陈代谢速率减慢。 ②物质运输速率 降低 ，色素积累。 2．细胞凋亡和细胞坏死 (1)细胞凋亡是细胞在严格的 遗传机制 控制下实现 的自动结束生命的过程，也称为 细胞编程性死亡 。 (2)细胞坏死是在种种 不利因素 影响下， 由于细胞
③条件：整个装置必须遮光处理，否则植物的光合作用会干扰呼吸 速率的测定。
例题3、(2010· 南京调研)下图是测定发芽种子的呼吸类型所
用装置(假设 呼吸底物只有葡萄糖，并且不考虑外界条件的
影响)，下列有关说法错误的是 ( )
答案：C
选项
现象 甲装置 乙装置
结论
A
B C
液滴左移
液滴不动 液滴不动
液滴不动
(2007· 山东理综，27)近期统计数据显示， 癌症已成为我国城乡居民的 首要死因。 请根据提供的资料回答问题： (1)体外分别培养某种癌细胞和正常体细胞，图中 代表癌细胞生长曲线的是________。在体内，癌 a
细胞可能侵袭周围正常组织，说明癌细胞具有 扩(分)散转移 的特性。
(2)细胞癌变后，膜表面会出现一些不同于正常细胞的蛋白质， 这些 蛋白质会成为________，引起机体的免疫应答，在应答中直接使癌细 抗原
2．细胞的全能性 (1)高度分化的细胞仍然具有本物种的全套 遗传 物质 ，即具有发育成完整个体的潜能。 (2)已分化的植物细胞和 动物细胞核 的全能性 已得到了证实。 二、细胞的衰老和凋亡 (3)可作为证明细胞全能性的实例必须同时满 足以下三个条件； 1．衰老细胞的特征 ①起点：高度分化的细胞 ； (1)结构方面 ②终点： 形成完整的个体 ； ①细胞体积 ，而细胞核体积 。 ③外部条件： 离体 、营养物质等。 ②细胞膜 改变。 ③核膜内折， 收缩，染色加深。
1简述细胞凋亡的基本特征及检测方法
一简述细胞凋亡的基本特征及检测方法？答1形态学细胞之间连接消失，细胞微绒毛消失，细胞核浓缩，接着开始裂解，裂解成碎片，接着细胞膜浓缩，调亡小体细胞由于细胞膜皱缩，被巨噬细胞，淋巴细胞吞噬，溶解。
2染色质DNA的降解，DNA降解特点a发生在早期bDNA片断是有规律180—200bp，降解发生在核小体之间，DNA电泳时会出现梯形条带。
3凋亡细胞里蛋白质RNA和蛋白质的增加，说明在凋亡时有基因被激活。
4钙离子浓度的变化细胞内钙离子浓度早期会持续增多。
5内源性核酸内切酶主要是DNA酶，DNA酶降解DNA，当DNA激活时，就会需要钙离子和镁离子。
检测方法1形态学光学显微镜、染色法、荧光法、电子云。
2生物化学检测法琼脂糖凝胶电泳。
3免疫法免疫吸附法。
4流式细胞仪5分子生物法原位末端转移酶技术。
二何谓细胞凋亡？有和生理意义？为了维持内环境的稳序，由基因控制的细胞自动的有序的死亡，称细胞凋亡。
意义1消除发育过程中多余的细胞。
2消除已完全丧失功能的细胞。
3消除发育不正常的细胞。
4清除生理活动中无用的细胞，对正常T细胞、B细胞形成有很大关系。
5清除病理活动中有潜在危险的细胞P53基因。
6清除病毒、癌症。
研究细胞凋亡的机理有利于研究生命活动的规律，对疾病的发生、发展、治疗具有重要意义。
三什么是细胞周期？什么是干细胞？分类？答是指细胞从上一次分裂结束开始生长到下一次分裂结束的整个过程，所经历的时间叫细胞周期时间。
干细胞是指具有潜在分化能力既可复制又可分化的细胞。
分为胚胎干细胞、成体干细胞。
四心肌酶谱包括那几种酶？那种酶最敏感？为什么？答心肌酶谱包括肌酸激酶、和同工酶、AST、 -羟丁基脱氢酶。
最敏感的是肌酸激酶和同工酶，因为他在急梗早期出释放最早。
在心梗以后两小时，肌红蛋白释放到细胞外，6-9小时达到高峰。
五检测血清中CK 、LDH、ALT、AST、ALP的临床意义。
答CK用于心梗的诊断1 损伤4---8小时后，血液中肌酸肌酶增高，量高于正常2倍。
高考生物第一轮高频考点复习课件：第14讲 细胞的分化、衰老、凋亡和癌变(共60张PPT)
【例1】下列关于细胞分化的说法，正确的是( D ) ①分化是稳定的，而且一般是不可逆的，一旦细 胞沿一定方向分化，便不会再脱分化到原先的状态 ②细胞分化后，细胞中mRNA不同，tRNA相同 ③分 化的结果是赋予不同种类的细胞特异的结构和功能 ④一般不会出现细胞核遗传物质的改变 ⑤细胞分化 的实质是基因选择性表达 A．②③④⑤ B．①②④⑤ C．①②③⑤ D．①②③④⑤
四、细胞癌变 1．癌细胞的主要特征 (1)适宜条件下，无限增殖(将癌细胞和正常细胞 比较)
细胞来源 正常人肝细胞 海拉的宫颈癌细胞 细胞周期 22 h ＜22 h 分裂次数 50～60 ∞≈25483.6 时间 45.8 d～55 d 1951年至今
(2)癌细胞的形态结构发生了变化 例如，体外培养中的正常的成纤维细胞呈扁平梭 形，转化成癌细胞后变成球形。癌细胞的细胞核都较 正常细胞的大，有时形态也变得不规则，核仁也变大 了。
3．实验操作步骤的设计程序
二、演练 近期统计数据显示，癌症已成为我国城乡居民的首要死 因。请根据提供的资料回答问题：
(1)体外分别培养某癌细胞和正常体细胞，上图中代表 癌细胞生长曲线的是 a 。在体内，癌细胞可能侵袭周 围正常组织，说明癌细胞具有扩散转移 的特性。 (2)细胞癌变后，膜表面会出现一些不同于正常细胞的 蛋白质，这些蛋白质会成为抗原，引起机体的免疫应 答，在应答中直接使癌细胞裂解的免疫细胞是 效应T 细胞 。
(4)癌症的预防及治疗 ①预防：日常生活中远离致癌因子；增强体质。 ②治疗：手术切除是目前常用的治疗方法，这就 需要尽可能在早期发现癌组织，用外科手术完全清除。 然而，这种方法对癌细胞已有多处转移的患者显然很 难实施。遇到这种情形，必须采用“化学疗法”和 “放射线疗法”辅助治疗。首先使用抗癌药物和放射 线照射缩小转移的癌组织，再对原发癌组织进行切除。
细胞凋亡过程
细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭，不同的外界因素启动凋亡的方式不同，所引起的信号转导也不相同，客观上说对细胞凋亡过程中信号传递系统的认识还是不全面的，比较清楚的通路主要有：1）细胞凋亡的膜受体通路：各种外界因素是细胞凋亡的启动剂，它们可以通过不同的信号传递系统传递凋亡信号，引起细胞凋亡，我们以Fas -FasL为例：Fas是一种跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，它与FasL结合可以启动凋亡信号的转导引起细胞凋亡。
它的活化包括一系列步骤：首先配体诱导受体三聚体化，然后在细胞膜上形成凋亡诱导复合物，这个复合物中包括带有死亡结构域的Fas相关蛋白FADD。
Fas又称CD95，是由325个氨基酸组成的受体分子，Fas一旦和配体FasL结合，可通过Fas分子启动致死性信号转导，最终引起细胞一系列特征性变化，使细胞死亡。
Fas作为一种普遍表达的受体分子，可出现于多种细胞表面，但FasL的表达却有其特点，通常只出现于活化的T细胞和NK细胞，因而已被活化的杀伤性免疫细胞，往往能够最有效地以凋亡途径置靶细胞于死地。
Fas分子胞内段带有特殊的死亡结构域（DD,death domain）。
三聚化的Fas和FasL结合后，使三个Fas分子的死亡结构域相聚成簇，吸引了胞浆中另一种带有相同死亡结构域的蛋白FADD。
FADD是死亡信号转录中的一个连接蛋白，它由两部分组成：C端（DD结构域）和N 端（DED）部分。
DD结构域负责和Fas分子胞内段上的DD结构域结合，该蛋白再以DED连接另一个带有DED的后续成分，由此引起N段DED随即与无活性的半胱氨酸蛋白酶8（caspase8）酶原发生同嗜性交联，聚合多个caspase8的分子，caspase8分子遂由单链酶原转成有活性的双链蛋白，进而引起随后的级联反应，即Caspases，后者作为酶原而被激活，引起下面的级联反应。
细胞凋亡检测方法
细胞凋亡检测方法绿谷生物网/experiment/celltech/apoptosis/2009/6612.htmlUpdate:2006-07-04From: Hot:264北京大学人类疾病基因研究中心陈英玉细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。
细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。
一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
1 光学显微镜和倒置显微镜（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
（2）染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。
凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。
常用的DNA特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。
三种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。
DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。
储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。
结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1)。
3 透射电子显微镜观察结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。
细胞凋亡的不同途径及其调控机制
细胞凋亡的不同途径及其调控机制细胞凋亡是细胞自我死亡程序，细胞凋亡能够有效地清除有害的、异常的或已损坏的细胞，从而维持组织的稳定性和健康状态。
细胞凋亡发生的方式有多种，包括内源性和外源性途径，这些途径通过不同的信号传导通路来调控细胞凋亡。
一、外源性凋亡途径外源性凋亡途径发生在细胞接受到来自外部环境的死亡信号时。
这些信号能够通过细胞膜上的受体或细胞膜内的信号传导分子进入细胞内，从而导致细胞凋亡。
常见的外源性死亡途径有：1. Fas信号通路Fas信号通路是一种基于细胞膜上的TNF受体家族成员Fas（CD95）接受到配体FasL信号而引发的凋亡途径。
激活Fas信号通路会导致协同蛋白CASPASE-8的活化和敲除凋亡效应器蛋白CAS-PASE-3，从而引发细胞凋亡。
2. TNF-α信号通路TNF-α信号通路源于肿瘤坏死因子TNF-α活化其膜上受体TNFR1并引发的信号通路。
该通路包含了多余CASPASE的活化和产生，这些CASPASE会进一步激活货运途径中的合成酶，最终导致细胞死亡。
二、内源性凋亡途径内源性凋亡途径是由于细胞内环境受到损伤，误差或异常信号而引发的过程。
该途径是常规的，也可对多种细胞产生多种软性、质量异常和最终灭亡细胞，常见的多种内源性凋亡途径有:1.线粒体凋亡途径线粒体凋亡途径是内源性凋亡中最重要的信号通路。
该途径由细胞内环境的改变引发，陈列物质会引起线粒体膜电位降低，导致细胞内部电子传递链受到影响以及线粒体透过膜传出线粒体细胞凋亡信号分子。
线粒体内端口激活CASP3和进一步细胞凋亡的过程。
此通路中，BCL-2家族和协同蛋白CAS-PASE的调节沉默是关键的环节。
2.内质网蛋白酪氨酸磷酸化DPERK信号通路内质网蛋白酪氨酸磷酸化DPERK信号通路是一条由PERK一个激酶底物（例如EIF2α）的起始段激活的安排道路，这可实现对内质网（ER）受到应力的调节。
这个通路会激活CHOP信号分子和CASP12，调节细胞死亡。
流式测细胞凋亡原理
流式测细胞凋亡原理
细胞凋亡是一种形态学特征独特的程序性细胞死亡方式，它在多种生理和病理状态下发挥重要作用。
流式细胞术可以用来分析和测量细胞凋亡，其中包括细胞表面标记物的检测和细胞染色。
流式细胞术是一种流式细胞仪结合荧光标记物的技术。
在细胞凋亡的研究中，最常用的荧光染料是亚碧菜素（annexin V）和PI（propidium iodide）。
亚碧菜素可以结合凋亡细胞表面的磷脂（phosphatidylserine），而PI则可以进入破损的细胞膜并结合DNA。
流式细胞术中，细胞样本首先经过适当的处理，如细胞固定和染色，以保持细胞形态并增强荧光信号。
然后，样本通过流式细胞仪中的流动通道，单个细胞经过激光束的照射而产生荧光信号。
流式细胞仪会同时检测和记录细胞的形态学特征和荧光信号。
在细胞凋亡的测量中，亚碧菜素和PI的荧光信号用于区分不同类型的细胞。
在正常细胞中，磷脂位于细胞膜的内侧，不会结合亚碧菜素。
而在凋亡细胞中，磷脂外露到细胞膜的外侧，可以与亚碧菜素结合。
通过检测亚碧菜素的荧光信号，可以确定凋亡细胞的比例。
同时，PI的荧光信号用于鉴定破损的细胞，因为PI只能进入破损的细胞并结合DNA。
通过流式细胞术，可以获得细胞凋亡的定量信息，例如凋亡细
胞的比例和凋亡细胞的亚型。
这对于研究细胞凋亡的机制以及相关疾病的发生和发展具有重要意义。
细胞凋亡的分子机制
细胞凋亡的分子机制细胞凋亡是正常细胞死亡的一个重要过程，对于维持机体的稳态及发育起着至关重要的作用。
研究表明，细胞凋亡的分子机制涉及多种因素的调控，包括信号通路、蛋白质调控和基因表达等。
本文将系统地讨论细胞凋亡的分子机制。
一、细胞凋亡的信号通路1.细胞凋亡的外部启动因子细胞凋亡的外部启动因子包括细胞因子、趋化因子、免疫因子等，它们通过与受体结合，激活细胞内的信号转导通路，引发细胞凋亡。
其中，TNF家族受体和Fas受体等是细胞凋亡信号通路中的重要组成部分。
2.细胞凋亡的内部启动因子细胞凋亡的内部启动因子主要包括线粒体，它们在细胞内受到一系列的刺激后，释放过氧化氢、细胞色素 c 等信号分子，激活半胱天冬氨酸蛋白酶（caspase）家族酶，最终引发细胞凋亡。
值得注意的是，Bcl-2家族蛋白在这一过程中起到了关键的调控作用，它们能够调节线粒体膜通透性，控制细胞凋亡的进程。
二、细胞凋亡的蛋白质调控1.半胱天冬氨酸蛋白酶（caspase）家族caspase家族是细胞凋亡执行者的核心，包括启动caspase、执行caspase和效应caspase等各种类型。
它们通过顺序激活，逐步执行细胞凋亡过程。
例如，caspase-8和caspase-3分别是启动caspase和执行caspase，它们对于细胞凋亡的调控起到了至关重要的作用。
2.细胞凋亡抑制蛋白（IAPs）IAPs是一类抑制caspase活性的蛋白，能够通过与caspase结合，抑制其活性，从而阻断细胞凋亡的进程。
然而，在一些情况下，IAPs也被某些信号分子调节，使其失去对caspase的抑制作用，细胞凋亡过程得以进行。
三、细胞凋亡的基因表达调控1.p53基因p53是一个重要的肿瘤抑制基因，在细胞受到DNA损伤等刺激后，能够被激活，并调控多个靶基因的表达，从而抑制细胞生长和促进细胞凋亡。
p53的调控能力和稳定性对于细胞凋亡的正常进行至关重要。
2.miRNA调控miRNA是一类小分子RNA，在基因表达调控中起到了重要的作用。
细胞凋亡调控实验报告
细胞凋亡调控实验报告一、实验目的细胞凋亡是一种由基因控制的细胞主动死亡过程，对于生物体的发育、稳态维持和疾病发生等具有重要意义。
本实验旨在探究不同因素对细胞凋亡的调控作用，深入理解细胞凋亡的分子机制。
二、实验原理细胞凋亡的发生涉及一系列复杂的信号转导通路和分子事件。
其中，线粒体途径、死亡受体途径以及内源性凋亡通路等是常见的调控途径。
通过使用特定的试剂和检测方法，可以观察细胞形态变化、检测凋亡相关蛋白的表达以及评估线粒体膜电位等指标，从而分析细胞凋亡的情况。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞系：选用人肝癌细胞系 HepG2 进行实验。
2、主要试剂：Annexin VFITC/PI 凋亡检测试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒、蛋白酶抑制剂、细胞裂解液、抗体（如 Bcl-2、Bax、Caspase-3 等）、化学诱导剂（如顺铂）。
3、实验仪器：流式细胞仪、荧光显微镜、酶标仪、离心机、培养箱等。
（二）实验方法1、细胞培养将 HepG2 细胞接种于培养瓶中，加入含 10%胎牛血清的 DMEM 培养基，置于 37°C、5% CO2 培养箱中培养。
待细胞融合度达到 80%左右时，进行传代培养。
2、细胞凋亡诱导实验组分别加入不同浓度的顺铂处理细胞，设置不同的处理时间（如 24 小时、48 小时）。
对照组加入等体积的 DMSO 作为溶剂对照。
3、细胞凋亡检测采用 Annexin VFITC/PI 双染法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率。
收集处理后的细胞，用 PBS 洗涤两次，加入 Annexin VFITC 和 PI 染色液，避光孵育 15 分钟，然后进行流式细胞仪检测。
4、线粒体膜电位检测使用线粒体膜电位检测试剂盒，处理细胞后，加入 JC-1 染色液，孵育 20 分钟。
荧光显微镜下观察细胞的荧光强度，红色荧光表示正常线粒体膜电位，绿色荧光表示降低的线粒体膜电位。
5、蛋白提取与 Western blot 检测收集细胞，加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂，冰上裂解 30 分钟。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
人教版教学课件细胞的分化、衰老、凋亡和癌变的专题复习
㈠、细胞全能性
• ⒈概念：指生物体细胞都具有使后代细胞发育成 完整个体的潜能。 有完整细胞结构的细胞具有全能性不等于就能体 现全能性，体现全能性必须要发育成完整个体。 • ⒉除哺乳类成熟的红细胞、植物导管、筛管细胞等 外，具有完整细胞结构的细胞都具有全能性。 • ⒊细胞全能性的体现必须满足离体、无菌、所需各 种营养物质、植物激素、适宜温度、PH等环境条件。 • ⒋难易程度：受精卵>生殖细胞>体细胞， 且植物细胞比动物细胞容易， 保持分裂能力分化程度低的细胞比高度分化的 细胞容易。高度分化的动物细胞全能性受到限制， 但是它的细胞核仍然保持全能性，能在一定条件下 (如将其移植到卵细胞中)表现出来
• • • • • • • •
人的衰老的红细胞具有下列哪些特征： A A．水分减少，细胞萎缩 B．某些酶的活性降低，细胞内色素逐渐积累 C．细胞核体积增大 D．细胞膜的通透性功能改变，物质运输功能加强 人的肝脏细胞内可由DNA控制合成的物质是：AC A．mRNA B．胰岛素 C．呼吸酶 D．性激素
癌变
终末分 化细胞
凋亡
衰老 脱落 坏死
受 分裂、分化 精 卵
细胞的全能性 根、茎、 脱分化 未分 分裂 愈伤 再分化 叶、花、 植物体 化细 组织 胞 果、子 植物组织培养
•
植物组织培养的过程可以归纳为：
ABC
对此叙述正确的是： A.A表示的过程为脱分化，其结果是形成了一群能旺盛 分裂的薄壁细胞 B.植物组织培养所依据的细胞学原理是细胞的全能性 C.③→④过程表示植物的个体发育是指植物的营养生 长和生殖生长阶段 D.将②包裹上人造种皮可获得人工种子
操作上： ⑴将抑制癌细胞增生的基因转入到癌细胞内，阻断癌细胞繁 殖，或半一段可抑制癌基因转录的DNA序列导入癌细胞，使癌 基因不能表达，癌细胞也就不能增殖 ⑵将提高人体免疫力的基因导入免疫系统，以提高人体防御 功能，让人体免疫系统杀死癌细胞。
细胞凋亡机制
细胞凋亡机制细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，也被称为程序性细胞死亡。
它在个体发育、生理恒定以及细胞内外环境受到损害时起着至关重要的作用。
细胞凋亡的机制非常复杂，涉及各种分子信号通路和调控因子的参与。
本文将详细介绍细胞凋亡的基本机制，包括内源性和外源性途径的调节以及相关的分子信号通路。
一、内源性途径细胞凋亡的内源性途径通过内部细胞因子的调控来触发凋亡过程。
细胞凋亡的内源性途径主要包括线粒体途径、内质网应激途径和细胞核损伤途径。
1. 线粒体途径线粒体是细胞内的重要器官，负责细胞能量代谢和调控细胞死亡。
当细胞受到损伤或受到外界刺激时，线粒体膜的通透性会改变，导致线粒体内的细胞色素C释放到胞浆中。
细胞色素C进一步与凋亡蛋白结合形成凋亡体，激活半胱天冬氨酸蛋白酶家族（caspase家族），最终引发细胞凋亡。
2. 内质网应激途径内质网是细胞内用于蛋白质折叠和修复的重要位点。
当细胞负荷过重、蛋白质异常积聚或外界环境恶化时，内质网会遭受应激。
细胞启动一系列应激反应，如调节蛋白质合成和降解以及促进细胞自噬等。
如果应激持续加重，内质网将释放细胞应激信号，激活caspase-12等凋亡相关蛋白，从而导致细胞凋亡。
3. 细胞核损伤途径DNA损伤是细胞凋亡的另一个重要因素，而细胞核则是DNA的重要储存库。
当细胞DNA受到损伤时，损伤部位的DNA碎片会引发一系列反应，包括细胞核内部的DNA损伤信号通路的激活。
这些信号通过核转录因子（如p53）的活化，进而调控多种凋亡相关基因的表达。
二、外源性途径除了内源性途径，外源性途径也可以引发细胞凋亡。
外源性途径是指外部因素对细胞的直接刺激，从而导致凋亡。
外源性途径主要包括细胞因子途径和死亡受体途径。
1. 细胞因子途径细胞因子是一类细胞内外环境因素，可以直接或间接地调控细胞的生长、分化和死亡。
一些细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）等，可以激活caspase家族，从而导致细胞凋亡。
凋亡检测原理
凋亡检测原理
凋亡检测原理是一种用于检测细胞是否处于凋亡状态的方法。
凋亡是一种常见的细胞死亡途径，它在生物体的正常发育、组织修复和免疫反应过程中起着重要作用。
凋亡检测原理基于分析细胞内外的凋亡标志物或对凋亡过程的特征性改变进行观察和分析。
这些标志物可以是蛋白质、核酸或其他化学物质。
最常用的凋亡检测方法之一是细胞染色。
一种常见的细胞染色方法是用荧光标记的染料。
在正常细胞中，这些染料主要在细胞质中分散，但在凋亡细胞中，这些染料会进入细胞核，形成明亮的染色体。
另一种常用的凋亡检测方法是流式细胞术。
流式细胞术利用细胞在电流场中的特性，在流式细胞仪中进行细胞分类和分析。
对于凋亡细胞的检测，可以通过检测细胞的大小、形状、表面性状、细胞膜可渗透性等指标，以及通过特定的标记物检测凋亡细胞。
还有一种凋亡检测方法是利用凋亡相关蛋白质的表达水平进行分析。
凋亡相关蛋白质包括Bcl-2家族蛋白、caspase家族蛋白等。
通过检测这些蛋白质的表达水平可以了解凋亡的程度和过程。
总的来说，凋亡检测原理是通过观察和分析细胞内外的凋亡标志物或凋亡过程的特征性改变来判断细胞是否处于凋亡状态。
这些方法可以帮助科研人员研究细胞凋亡的机制，以及在疾病诊断和治疗中的应用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
(二)细胞凋亡信号的转导
凋亡信号转导系统特点
① 多样性：不同种类的细胞系统不同 ② 偶联性：与增殖分化的信号系统交叉偶联 ③ 同一性：多因素，共用同一系统触发 ④ 多途性：同一诱导因素启动多条信号转导
途径
有
8.基因调控 无
有
2002年10月7日英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍 维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在细胞程序性死亡方面的 研究获诺贝尔生理与医学奖。
Sydney Brenner H. Robert Horvitz John E. Sulston
细胞凋亡与疾病发生机制的
新认识
死 1.该“ ”的细胞（如肿瘤细胞、自身反应性免疫细胞） 未死，是造成肿瘤、自身免疫性疾病的主要发病机制
之一。——细胞凋亡不足
2.不该“死”的细胞（如神经元、心肌细胞）死 了，这与老年性痴呆、心肌缺血/再灌注损伤等
发病有关。——细胞凋亡过度
胸腺细胞
正常
凋亡
胸腺细胞
正常
凋亡
细胞凋亡的过程
1.凋亡信号转导 2.凋亡基因激活 3.细胞凋亡的执行 4.凋亡细胞的清除
凋亡过程及分期
凋
cAMP
亡
Ca2+
死
4. 形态变化 细胞结构全面溶解、破坏、 胞膜及细胞器相对完整细胞皱缩，核
细胞肿胀
固缩,膜可发泡成芽,形成凋亡小体
5.DNA电泳 弥散性降解，电泳呈均一 DNA片状
6. 炎症反应 溶酶体破裂，局部炎症反 应
7.凋亡小体 无
DNA片段化（180-120bp）,电泳呈 “梯”状条带 溶酶体相对完整，局部无炎症反应
3. Caspase 9 激活，需要通过CARD（caspase-
recruitment domain)、Apaf-1、细胞色素c、ATP 等多个因子的参与
Caspases在凋亡中的主要作用 1.灭活细胞凋亡的抑制物（如Bcl-2）；
2.水解细胞的蛋白质结构，导致细胞解体， 形成凋亡小体（apoposis boby）；
细胞凋亡及机制检测
典型的凋亡小体（apoposis
boby）：由透亮空泡和不透 光的浓密的核碎片两部分 组成。
细胞凋亡与坏死的比较
坏死
凋亡
1.性质
病理性,非特异性
生理性或病理性，特异性
2. 诱导因素 强烈病理性刺激,随机发生 生理性或较弱病理性刺激，非随机发 生
3. 生化特点 被动过程,无新蛋白合成,不 耗能的主动过程，有新蛋白合成 耗能
Fas/APO-1等。
1. c-myc
c-myc诱导细胞增殖，也能诱导细 胞凋亡。当生长因子存在，bcl-2基 因表达时，促进细胞增殖，反之细 胞凋亡。
2.bcl-2
第一个被确认有抑制凋亡作用的基因，存在于线 粒体外膜、核膜及部分内质网中。
bcl-2相当于线虫的ced9。 Bcl-2家族可分为两类，一类是抗凋亡的，如：
NGF受体家族。对细胞凋亡有促进作用
基因产物为45KD的跨膜蛋白。 Fas蛋白与Fas配体组成Fas系统，二者的
结合导致靶细胞走向凋亡。
4.ICE蛋白酶家族
与线虫ced-3同源，又称为Caspase。 ICE是一种半胱氨酸蛋白酶，在人类，ICE家族
至少有11个成员，每一成员均含有与底物结合及 催化的保守序列，识别位点在Asp之后，故又称 Caspases。
㈡细胞凋亡信号的转导
诱导信号 ROS
神经酰胺 多途径 SAPK/JNK
RR
NF-kB,JNK/AP-1途径
P53 基因 激活bax or 下调bcl-2
mtDNA
cell
㈢细胞凋亡相关基因
抑制凋亡基因：bcl-2 促进凋亡基因： fas，P53 双向调控基因： c-myc，bclx
研究较多的有c-myc、 bcl-2、 p53、Ice、
3.在凋亡级联反应中水解相关活性蛋白，使 该蛋白获得或丧失某种生物学功能
细胞凋亡的调控
（一）细胞凋亡相关因素
1.诱导性因素 2.抑制性因素
(二)细胞凋亡信号的转导
1.细胞凋亡的诱导因素
.生理活性因子：TNF家族(Fas-L,TNF)、 TGF、神经递质(谷氨酸、多巴胺)、生 长 因子撤退、GC等
诱
受 体
神 经
亡 信
导
酰
号
因
胺
素
凋
亡
相
Dnase 巨噬细胞
关 基 因 激
激活
Capases 激活
吞噬细胞 凋亡细胞
活
诱导期
执行期
消亡期
细胞凋亡的生化改变
1.DNA的片段化“梯”状条带 2.内源性核酸内切酶激活及其作用 3.凋亡蛋白酶（caspases）的激活
及其作用
1.DNA的片段化“梯”状条带为细胞 凋亡主要特征
.损伤相关因子：热休克、病毒感染、自由 基、癌基因、抑癌基因、放射线等
.化疗药物 .毒的抑制因素
.凋亡相关基因的抑制作用：p53、bcl-2、 bcl-XL等。
.生理性抑制剂：生长因子、细胞外基质、锌、 雄激素、雌激素等
.病毒基因：腺病毒E1B、杆状病毒p35、棒 状病毒IAP、牛痘病毒CrmA、EBV BHRF1等
Bcl-2 ； 一 类 是 促 进 凋 亡 的 ， 如 ： Bax 、 Bad 、 Bid，以二聚体形体发挥作用。
Bcl-2抗凋亡机制
①直接的抗氧化 ②抑制线粒体释放促凋亡的蛋白质 ③抑制促凋亡的Bax，Bak细胞毒作用 ④抑制Caspases激活 ⑤维持细胞钙稳态
3.fas
fas又称作APO-1或CD95，属TNF受体和
①几乎所有凋亡细胞均有核小体间的裂 解，导致DNA 的断裂；
②DNA降解过程的特异性：不伴有组蛋 白和其它核蛋白的降解；
③染色质在核小体间的裂解是凋亡细胞 和形态改变的基础；
④DNA fragmentation是凋亡的 “golden marker”。
2.内源性核酸内切酶激活及其 作用
由一系列胞内信号转导环节激活， 执行染色质DNA切割
启动子Caspases： Caspases8、9和10 效应子Caspases： Caspases3、6、7
5.Apaf-1 与线虫的ced-4同源； 在线粒体参与的凋亡途径中发挥作用； 能激活Caspase3 ，这一过程需要细胞色
素c和Caspase9的参与。
6.p53
野生型P53基因具有诱导细胞凋亡的功能 ——“分子警察”；