BMP7对TGFβ 1诱导人近端肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的影响

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精品参考文献资料英文缩略词表

a-SMA(a-smooth muscle actin) a一平滑肌肌动蛋白

BMP-7(bone moiphogenctic protein-7) 骨形态发生蛋白一7

Col I(type I collagen) I型胶原

DEPC(diethyl pyrocaeoonate) 焦碳酸二乙酯

E-cadhcrin B钙粘连素

ECM(extmcellular matrix) 细胞外基质

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 酶联免疫吸附实验

EMT(epithelial-to-mesenchymal transition) 蚴胞·间充质转分化CrGF(connectivc tissue growth factor) 结缔组织生长因子

fN(h'bronectin) 纤维连接蛋白

HK-2(human renal proximal tubular epithelial cells) 人近端肾小管上皮细胞

MET(mesenehymal-to-epithclial transition) 间充质细胞．E皮细胞转化

MMP-2(malri metalloproteinase-2) 基质金属蛋白酶-2

MFB(myofibroblast) 肌成纤维细胞

MCP-l(monocyte chcmoatWactant protein-I) 单核细胞趋化蛋白．1

"IGF冯,(transforming growth factor一01) 转化生长因子B l

Tm(mbmommrstitial fibrosis) 肾小管间质纤维化

TIMP-I(tissue inlu'bitor of the matri metalloproteinase-1) 组织基质金属蛋白酶抑制物．1 TEC(r砌tubular epithelial cell) 肾小管E皮细胞

PAI-1(plasminogen activator inlu'bitor-1) 纤溶酶原激活物抑制剂一1

PBS(phosphate buffered saline) 磷酸盐缓冲液

RT-PCR(reverse Iranscription-polymerase chain system) 反转录一聚合酶链式反

应SDS(sodium dodecyl sulphate) 十二烷基磺酸钠

I兀Jo(unilateral ureteral obstruction) 单侧输尿管梗阻

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BMP-7对TG椰1诱导人近端肾小管上皮细胞

转分化及细胞外基质分泌的影响

摘要

目的：观察骨形态发生蛋8-7(洲)对转化生长因子-81(TGF-B1)诱导人近端肾小

管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转分化(D仉’)及细胞外基质(ECM)分泌的影响，探

讨其逆转肾间质纤维化的可能机

制。

方法：将HK-2细胞在体外与TGF-B1或TGF-B1+BMP-7共培养，分成对照组，不同浓度TGF-B1诱导组，TGF-B1不同时间诱导组，3ng／ml TGF-B1加不同浓度BMP-7组。相差显

微镜观察细胞形态的改变；间接免疫荧光测定a-SMA、E-cadherin的表达；RT-PCR检

测a-SMA、E-cadherin、Col I a1、FN、PAI-1 mRNA的表达；Western B lot检测a-SMA、E,odherin

蛋白的表达；ELISA方法测定细胞E清液Col I、FN的表达。

结果：(1)随着TGF-B1浓度的增加及作用时间的延长，HK-2细胞形态逐渐发生改变，由立方形铺路石样转变为梭形长条样；在3ng／ml TGF-81诱导48h后再加A．200ng／na BMP-7组中，可见到已转变为梭形长条样的细胞大部分逆转回原来的形态。(2)免疫荧光检测显示，正常HK-2细胞表达F_,cadhadn、而无a-SMA表达，经3ng／ml TGF-B1刺激4811后，细胞浆

中a-SMA表达明显增强，细胞质膜E-eadherin表达显著减弱；去除TGF-BI，再加入200ng

／ml BMP-7干预48h，能明显抑制a-．SMA的表达、恢复E-eadherin的表达。(3)TGF-81在

lOng／ml 内呈剂量依赖性匕调a-SMAmRNA的表达。在3ng／ml TGF冯I诱导下，

a-SMAmRNA表达

随作用时间的延长而增加，E．eadherin mRNA表达随作用时间的延长而逐渐减少。在3ng／

ml TGF-BI与BMP-7共同干预下，a-SMA mRNA及蛋白的表达随着BMP-7(100 ng／ml

枷O ng／m1)的浓度增加而减少，400 ng压llI BMP-7即可显著减少a-SMA mRNA及蛋

白的表达

(P

的浓度增加而逐渐增加，400 ng／ml BMP-7即可显著增加F．,-odherin mRNA及蛋白的表

达

(咖．01)。(4)在3ng／ml TGF-St诱导下，随刺激时间的延长，Col I al、FN mRNA表达

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