血细胞分析仪原理

通常把标本流的流速控制在10m/s以内，就 能保持标本流处于稳流状态。
外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与 鞘液稳定的同轴流动状态。
同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变 小，通常只有10～20μm，避免细胞多个 重叠进入检测区。
激光散射法系统基本组成
1、光源 气体（氦－氖）激光或固体（半导 体）激光（单色光）；钨光源（多色光）。
测
射频电导法
原
理
激光散射法
光学
分光光度法
一、电阻抗法
血细胞计数原理即库尔特原理（Coulter principle):根据血细胞非传导的性质，以 电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数 小孔时引起的电阻变化进行检测为基础， 进行血细胞计数和体积测定。
小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组 成部分。检测期间，当电流接通后，位于 小孔两侧的电极产生稳定的电流。如果供 给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压是不 变的。
第三章 血液分析仪检查
目的要求
1、掌握：血液分析仪各项参数的缩写、参考 值、直方图概念。
2、熟悉：血液分析仪电临床应用、检测参数、 方法学平价、血细胞直方图正常形态特点及常 见异常形态、临床应用。
3、了解：血液分析仪的进展。
重点 : 1、血液分析仪测定的原理、方法 2、血液分析仪各参数临床意义
用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞 的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核 和细胞质、颗粒成分等特征信息。
四、分光光度法
Lambert-Beer定律：A=lg(I0 / I) A:吸光度，或称光密度；I0：单色入射光强度；
I ：透过光强度
分光光度法仪器的组成：单色光源、检测池和 比色容器、光检测器。
当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增 加，于瞬间引起电压变化——通过脉冲。
细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数 量越多，脉冲数量也越多。
脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数 结果：
1. 放大 由于血细胞通过微孔时产生的脉冲 信号微弱，必须通过放大器将讯号放大。
2. 阈值调节 在一定范围内调节参考电平的 大小，使计数结果尽可能符合实际。
难点: 血液分析仪检验的质控
§1 血液分析仪的发展史
自动血液分析仪（automated hematology analyzer, AHA)，早年称血细胞计数仪（blood cell counter)，是目前国内外临床检验最常用的 筛检仪器之一。
1、传统采用手工方法 2、20世纪50年代，美国的Coulter设计了第一台
三分群血液分析仪基本组成
① 信号发生器 各种微粒通过检测小孔产生电 阻抗脉冲信号的检测源。
②放大器 将血细胞微弱脉冲信号放大以触发 电路系统。
③阈值调节器 调节能区分不同群细胞合适的 信号电平。
④甄别器 去除非参考电平的各种假信号以 提高计数的准确性。
⑤整形器 将不一致的脉冲波形信号调整为 标准的波形后触发计数电路系统。
分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测 Hb 的原理：被稀释的血液加入溶血剂后， 红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂 结合形成Hb衍生物，在特定波长（530～ 550nm）下比色，吸光度的变化与液体中 Hb含量成比例。
流式细胞仪的技术特点
流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术， 比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞 分选方面都有自己的技术特点。着重讲述液 流系统——鞘流原理。
雷诺系数 Re
Re＝d ρν/η d: 管子的直径 ρ：液体的密度 ν：液体的流速 η：液体的粘滞系数
Re<2300， 液流处于稳流状态 Re>2300， 液流处于湍流状态
半导体激光的流式细胞术
侧向荧光 （RNA/DNA含量）
侧向散射
（细胞内部结构，如 核的大小）
激光 （波长633nm）
前向散射光 （细胞大小）
低角度散射光（前向散射光）：反映细胞的 数量和表面体积大小。
高角度散射光（侧向散射光）：反映细胞的 内部颗粒、细胞核等复杂性。
激光散射法在区别体积相同而类型不同 的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准 确。故激光散射法已成为现代五分类血 液分析仪的主要检测原理之一。
3. 甄别 利用甄别器根据阈值调节器提供的 参考电平，将低于参考电平的假讯号（细 胞碎片，杂质微粒）去掉。
4. 整形 通过整形器作用，将脉冲讯号波形 修整成一致标准的平顶波，才能触发电路
5 计数 血细胞的脉冲信号，经过放大、甄 别、整形后，送入计数系统，得出计数结 果。
电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒） 的大小，是三分群血液分析仪的主要应用 原理，并与光学检测原理组合应用于五分 类血液分析仪中。
血细胞分析仪近年来的发展变化
1. 血常规检验多参数化 2. 多功能合成扩展 3. 检测速度的提高 4. 方法的改进和进展 5. 应用的方便性
血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作
血液分析仪功能： ①全血细胞计数功 能。 ②白细胞分类功能。 ③扩展功能。
§2 检测原理
Fra Baidu bibliotek
电阻抗法
电学
检
2、鞘流 维持颗粒于液流中央，顺序、单个、 恒速向前流动，即流体动力学聚焦。
3、细胞悬液 被检测细胞（颗粒）的悬 液，由气压导入流动池。
4、光检测器 接受来自各种角度的散射 光或吸收光信号，并转换成相应特征的 电信号
三、射频电导法
射频（radio frequency, RF) 指射频电流， 是每秒变化大于10 000次的高频交流电磁波。 高频电流能通过细胞壁。
电子血细胞计数仪。还产生了血红蛋白仪。
3、20世纪70年代 检测血小板的仪器Baker-810 4、20世纪80年代，可打印WBC、RBC、PLT
体积分布直方图。 5、20世纪90年代，白细胞分类的开发（二分
类、三分类）；将网织红细胞检测技术用于 血细胞分析仪；生产了血液学全自动系统。 6、现在，白细胞五分类，仪器组合化
⑥计数系统 将整形后的血细胞脉冲信号显 示为不同类群的细胞数。
二、激光散射法
激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry, FCM) 检测原理。
流式细胞术检测原理：细胞通过激光束被照射 时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射 光。对经信号检测器接收的散射光信息进行 综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。