辽宁产朝鲜淫羊藿不同药用部位有效成分含量的测定
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关键词：朝鲜淫羊藿；总黄酮；淫羊藿苷；含量测定 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2009)01-0048-03
Content Determination of Active Component in Epimedium Koreanum Nakai of Different Pharmaceutical Genetic in Liaoning Province SHAN Na, LU Jin-cai, WANG Jing, et al (School of Chinese
Lab Alliance-Series Ш型高效液相色谱仪,Model 500 型紫外检测器,Alltech Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 µm)； UV-2600A 型紫外分光光度计(龙尼柯上海仪器有限公司)； Sarturius-BS124S 分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)； KQ·250TB 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
试验药材：辽宁宽甸(批号 20070715)、辽宁本溪(批号 20070710) 、 辽 宁 凤 城 ( 批 号 20070722) 、 辽 宁 新 宾 ( 批 号 20070718)和吉林通化(批号 20070720)产地所有药材均由沈 阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为朝鲜淫羊藿 (Epimedium Koreanum Nakai)。淫羊藿苷对照品(中国药品生 物制品检定所,批号 110737-200413)。乙腈(色谱纯,山东禹王 实业有限公司禹成化工厂),水为娃哈哈纯净水,其余试剂均为 分析纯。 2 HPLC 法测定淫羊藿苷的含量 2.1 色谱条件与系统适用性试验
精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每 1 mL 含 0.1 mg 的溶液,即得。 2.4 方法学考察 2.4.1 精密度试验 精密称取批号为 20070715 供试品溶液, 按上述色谱条件测定,连续进样 6 次,记录淫羊藿苷的峰面积, 计算相对标准偏差,结果 RSD＝1.55%,表明色谱系统精密度
表 1 加样回收率测定结果
样品中含量 加入量
测出量
回收率 平均回收率 RSD
(mg/g)
(mg/g)
(mg/g)
(%)
(%)
(%)
Key words：Epimedium koreanum Nakai；total flavonids；icariin；content determination
参考文献：
[1] 张 冰,刘小青.菊苣提取物对高糖复合高血脂模型兔血浆 vWF、ET 及 PGI2/TXA2 水平的影响[J].北京中医药大学学报,2000,23(6)：48－50.
色谱柱为 Alltech Apollo C18(250 mm×4.6 mm,5 µm)； 流动相为乙腈-水(28∶72)；流速 1.0 mL/min；检测波长 270 nm； 进样量 10 µL；柱温为室温。理论塔板数按淫羊藿苷峰面积计 算不低于 1 500。 2.2 供试品溶液制备
分别精密称取干燥的朝鲜淫羊藿叶、茎粉末(过 3 号筛) 约 0.2 g,精密称定,置 50 mL 量瓶中,加入稀乙醇 20 mL,密塞 称重,超声处理 1 h,冷却至室温,用稀乙醇补足减失的重量,摇 匀,滤过,取续滤液,即得。 2.3 对照品溶液制备
[5] 张 冰,刘小青.鹌鹑高尿酸血症高甘油三酯模型塑造[J].中国病理生 理杂志,2003,19(8)：1148－1150.
[6] 谭庆华.高尿酸血症患者血脂紊乱的初步观察[J].华夏医学,2005, 18(6)：905－907.
[7] 徐冬娥.高尿酸血症和血脂紊乱对代谢综合征的影响[J].东南国防医 药,2006,8(3)：194－195.
[11] 袁 鹰,王正春,王秀美.血清游离脂肪酸对高尿酸血症代谢的影响[J]. 山东医药,2006,46(3l)：53－54.
(收稿日期：2008-06-23,编辑：华强)
2009 年 1 月第 16 卷第 1 期
中国中医药信息杂志
·49·
wk.baidu.com
朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)为小檗科淫羊藿 属植物,系多年生宿根性草本,是淫羊藿的主要来源之一。朝鲜 淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用,总黄酮是其主要 成分,其中淫羊藿苷(icariin)是其主要活成分之一[1]。朝鲜淫 羊藿主要分布于吉林省东部和辽宁省东部,黑龙江和吉林交界 的地区也有少量分布。目前,关于辽宁产朝鲜淫羊藿的研究较 少,为确定辽宁产朝鲜淫羊藿的最佳产地,我们对辽宁省 4 个 主产地的朝鲜淫羊藿叶和茎中淫羊藿苷和总黄酮的含量分别 进行测定,同时还与吉林通化产的朝鲜淫羊藿的有效成分予以 比较。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法和紫外分光光度法[1] 分别测定不同产地朝鲜淫羊藿叶和茎中总黄酮和淫羊藿苷的 含量,以便为更好地利用朝鲜淫羊藿提供科学依据。 1 仪器与试药
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Chinese Journal of Information on TCM
·中药研究与开发·
Jan.2009 Vol.16 No.1
辽宁产朝鲜淫羊藿不同药用部位 有效成分含量的测定
单 娜,路金才,王 晶,孙 伟,杨 惠
(沈阳药科大学中药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘要：目的 测定辽宁不同产区朝鲜淫羊藿不同药用部位中淫羊藿苷及总黄酮的含量。方法 以淫羊藿苷为指 标,采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量,紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果 叶中淫羊藿苷的含量在 0.197%～0.347%范围内,茎中淫羊藿苷的含量在 0.043%～0.050%范围内；叶中总黄酮的含量在 6.68%～8.85%范围 内,茎中总黄酮的含量在 1.3%～2.7%范围内。淫羊藿苷在 0.3～1.8 µg(r ＝0.999 9)和 0.5～3 µg/mL(r ＝0.999 9)范围 内线性关系良好。淫羊藿苷的平均回收率为 99.43%(n ＝6,RSD＝0.29%),总黄酮为 100.38%(n ＝9,RSD＝1.60%)。 结论 辽宁不同地区的朝鲜淫羊藿有效成分含量不同,不同药用部位的总黄酮和淫羊藿苷含量差异较大,叶中的总黄 酮和淫羊藿苷远高于茎。
Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China) Abstract：Objective To determine the content of icariin and flavonids in Epimedium koreanum Nakai of
[8] 罗 涟.血尿酸与血脂、肥胖关系的探讨[J].中国自然医学杂志,2006, 8(4)：292－293.
[9] 张丽英,刘秀英.临床高尿酸血症与高脂血症的关系[J].中华医学实践 杂志,2007,6(2)：105.
[10] 孔 悦,张 冰,刘小青,等.菊苣提取物对高尿酸血症动物模型的作用 及机制研究[J].现代中西医结合杂志,2003,12(11)：1138－1139.
[4] Conen D, Wietlisbach V, Bovet P, et al. Prevalence of hyperuricemia and relation of serum uric acid with cardiovascular risk factors in a developing country[J]. BMC Public Health,2004,4：1－9.
[2] 张 冰,刘小青,胡京红.菊苣胶囊对糖尿病合并高脂血症兔血糖、血脂、 血尿酸的影响[J].中药新药与临床药理,1998,49(9)：221－223.
[3] Culleton BF, Larson MG, Kannel WB, et al. Serum uric acid and risk for cardiovascular disease and death：the Framingham Heart Study[J]. Ann Intern Med,1999,131：7－13.
基金项目：辽宁省教育厅项目(20060874) 通讯作者：路金才,Tel：024-23986500,E-mail：jincailu@ yahoo.com.cn
符合要求。 2.4.2 线性关系考察 取上述对照品溶液,精密吸取 3、6、9、 12、15、18 µL 进样,按上述色谱条件测定。以进样量为横 坐标,峰面积值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程式：Y ＝ 2×109X ＋1 375.2,r ＝0.999 9。结果表明,淫羊藿苷在 0.3～ 1.8 µg 范围内进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。 2.4.3 稳定性试验 精密称取批号为 20070715 样品,按上述 色谱条件,分别在制备样品后的 0、1、2、4、8、12 h 测定。 吸取 10 µL 注入高效液相色谱仪,记录淫羊藿苷的峰面积,计算 相对标准偏差,结果 RSD＝2.30%,表明供试品溶液在 12 h 内稳 定。 2.4.4 重复性试验 精密称取批号为 20070715 样品 6 份,每 份 0.2 g,精密称定,按“2.2”项下方法制备样品溶液,按上述 色谱条件测定。记录淫羊藿苷的峰面积,计算相对标准偏差, 结果 RSD＝0.10%,表明方法的重现性良好。 2.4.5 加样回收率试验 精密称取批号为 20070715 样品 6 份,各约 0.1 g,分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.1 mg/mL) 3 mL,按“2.2”项下方法制备样品溶液,按上述色谱条件测定。 记录淫羊藿苷的峰面积并计算其含量,平均回收率为 99.43%, RSD＝0.29%(n ＝6)。结果见表 1。
different place of production and different pharmaceutical genetic in Liaoning Province. Methods Icariin was used as the chemical reference substance to establish HPLC and ultraviolet spectrophotometry methods for content determination of icariin and total flavonoids. Results The content of icariin in leaves was from 0.197% to 0.347%, and in stem was from 0.043% to 0.050%. The content of total flavonids in leaves was from 6.68% to 8.85%, and in stem was from 1.3% to 2.7%. The calibration curves of icariin was in good linearity over the range of 0.3～1.8 µg (r ＝0.999 9) and total flavonids was 0.5～3 µg/mL (r ＝0.999 9). The average recovery of icariin was 99.43% (n ＝6, RSD＝0.29%) and total flavonids was 100.38% (n ＝9, RSD＝ 1.60%). Conclusions The content of flavonids in Epimedium koreanum Nakai of different place of production and different pharmaceutical genetic has large difference, the content in leaves is far higher than in stem.
Content Determination of Active Component in Epimedium Koreanum Nakai of Different Pharmaceutical Genetic in Liaoning Province SHAN Na, LU Jin-cai, WANG Jing, et al (School of Chinese
Lab Alliance-Series Ш型高效液相色谱仪,Model 500 型紫外检测器,Alltech Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 µm)； UV-2600A 型紫外分光光度计(龙尼柯上海仪器有限公司)； Sarturius-BS124S 分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)； KQ·250TB 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
试验药材：辽宁宽甸(批号 20070715)、辽宁本溪(批号 20070710) 、 辽 宁 凤 城 ( 批 号 20070722) 、 辽 宁 新 宾 ( 批 号 20070718)和吉林通化(批号 20070720)产地所有药材均由沈 阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为朝鲜淫羊藿 (Epimedium Koreanum Nakai)。淫羊藿苷对照品(中国药品生 物制品检定所,批号 110737-200413)。乙腈(色谱纯,山东禹王 实业有限公司禹成化工厂),水为娃哈哈纯净水,其余试剂均为 分析纯。 2 HPLC 法测定淫羊藿苷的含量 2.1 色谱条件与系统适用性试验
精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每 1 mL 含 0.1 mg 的溶液,即得。 2.4 方法学考察 2.4.1 精密度试验 精密称取批号为 20070715 供试品溶液, 按上述色谱条件测定,连续进样 6 次,记录淫羊藿苷的峰面积, 计算相对标准偏差,结果 RSD＝1.55%,表明色谱系统精密度
表 1 加样回收率测定结果
样品中含量 加入量
测出量
回收率 平均回收率 RSD
(mg/g)
(mg/g)
(mg/g)
(%)
(%)
(%)
Key words：Epimedium koreanum Nakai；total flavonids；icariin；content determination
参考文献：
[1] 张 冰,刘小青.菊苣提取物对高糖复合高血脂模型兔血浆 vWF、ET 及 PGI2/TXA2 水平的影响[J].北京中医药大学学报,2000,23(6)：48－50.
色谱柱为 Alltech Apollo C18(250 mm×4.6 mm,5 µm)； 流动相为乙腈-水(28∶72)；流速 1.0 mL/min；检测波长 270 nm； 进样量 10 µL；柱温为室温。理论塔板数按淫羊藿苷峰面积计 算不低于 1 500。 2.2 供试品溶液制备
分别精密称取干燥的朝鲜淫羊藿叶、茎粉末(过 3 号筛) 约 0.2 g,精密称定,置 50 mL 量瓶中,加入稀乙醇 20 mL,密塞 称重,超声处理 1 h,冷却至室温,用稀乙醇补足减失的重量,摇 匀,滤过,取续滤液,即得。 2.3 对照品溶液制备
[5] 张 冰,刘小青.鹌鹑高尿酸血症高甘油三酯模型塑造[J].中国病理生 理杂志,2003,19(8)：1148－1150.
[6] 谭庆华.高尿酸血症患者血脂紊乱的初步观察[J].华夏医学,2005, 18(6)：905－907.
[7] 徐冬娥.高尿酸血症和血脂紊乱对代谢综合征的影响[J].东南国防医 药,2006,8(3)：194－195.
[11] 袁 鹰,王正春,王秀美.血清游离脂肪酸对高尿酸血症代谢的影响[J]. 山东医药,2006,46(3l)：53－54.
(收稿日期：2008-06-23,编辑：华强)
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中国中医药信息杂志
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朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)为小檗科淫羊藿 属植物,系多年生宿根性草本,是淫羊藿的主要来源之一。朝鲜 淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用,总黄酮是其主要 成分,其中淫羊藿苷(icariin)是其主要活成分之一[1]。朝鲜淫 羊藿主要分布于吉林省东部和辽宁省东部,黑龙江和吉林交界 的地区也有少量分布。目前,关于辽宁产朝鲜淫羊藿的研究较 少,为确定辽宁产朝鲜淫羊藿的最佳产地,我们对辽宁省 4 个 主产地的朝鲜淫羊藿叶和茎中淫羊藿苷和总黄酮的含量分别 进行测定,同时还与吉林通化产的朝鲜淫羊藿的有效成分予以 比较。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法和紫外分光光度法[1] 分别测定不同产地朝鲜淫羊藿叶和茎中总黄酮和淫羊藿苷的 含量,以便为更好地利用朝鲜淫羊藿提供科学依据。 1 仪器与试药
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辽宁产朝鲜淫羊藿不同药用部位 有效成分含量的测定
单 娜,路金才,王 晶,孙 伟,杨 惠
(沈阳药科大学中药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘要：目的 测定辽宁不同产区朝鲜淫羊藿不同药用部位中淫羊藿苷及总黄酮的含量。方法 以淫羊藿苷为指 标,采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量,紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果 叶中淫羊藿苷的含量在 0.197%～0.347%范围内,茎中淫羊藿苷的含量在 0.043%～0.050%范围内；叶中总黄酮的含量在 6.68%～8.85%范围 内,茎中总黄酮的含量在 1.3%～2.7%范围内。淫羊藿苷在 0.3～1.8 µg(r ＝0.999 9)和 0.5～3 µg/mL(r ＝0.999 9)范围 内线性关系良好。淫羊藿苷的平均回收率为 99.43%(n ＝6,RSD＝0.29%),总黄酮为 100.38%(n ＝9,RSD＝1.60%)。 结论 辽宁不同地区的朝鲜淫羊藿有效成分含量不同,不同药用部位的总黄酮和淫羊藿苷含量差异较大,叶中的总黄 酮和淫羊藿苷远高于茎。
Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China) Abstract：Objective To determine the content of icariin and flavonids in Epimedium koreanum Nakai of
[8] 罗 涟.血尿酸与血脂、肥胖关系的探讨[J].中国自然医学杂志,2006, 8(4)：292－293.
[9] 张丽英,刘秀英.临床高尿酸血症与高脂血症的关系[J].中华医学实践 杂志,2007,6(2)：105.
[10] 孔 悦,张 冰,刘小青,等.菊苣提取物对高尿酸血症动物模型的作用 及机制研究[J].现代中西医结合杂志,2003,12(11)：1138－1139.
[4] Conen D, Wietlisbach V, Bovet P, et al. Prevalence of hyperuricemia and relation of serum uric acid with cardiovascular risk factors in a developing country[J]. BMC Public Health,2004,4：1－9.
[2] 张 冰,刘小青,胡京红.菊苣胶囊对糖尿病合并高脂血症兔血糖、血脂、 血尿酸的影响[J].中药新药与临床药理,1998,49(9)：221－223.
[3] Culleton BF, Larson MG, Kannel WB, et al. Serum uric acid and risk for cardiovascular disease and death：the Framingham Heart Study[J]. Ann Intern Med,1999,131：7－13.
基金项目：辽宁省教育厅项目(20060874) 通讯作者：路金才,Tel：024-23986500,E-mail：jincailu@ yahoo.com.cn
符合要求。 2.4.2 线性关系考察 取上述对照品溶液,精密吸取 3、6、9、 12、15、18 µL 进样,按上述色谱条件测定。以进样量为横 坐标,峰面积值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程式：Y ＝ 2×109X ＋1 375.2,r ＝0.999 9。结果表明,淫羊藿苷在 0.3～ 1.8 µg 范围内进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。 2.4.3 稳定性试验 精密称取批号为 20070715 样品,按上述 色谱条件,分别在制备样品后的 0、1、2、4、8、12 h 测定。 吸取 10 µL 注入高效液相色谱仪,记录淫羊藿苷的峰面积,计算 相对标准偏差,结果 RSD＝2.30%,表明供试品溶液在 12 h 内稳 定。 2.4.4 重复性试验 精密称取批号为 20070715 样品 6 份,每 份 0.2 g,精密称定,按“2.2”项下方法制备样品溶液,按上述 色谱条件测定。记录淫羊藿苷的峰面积,计算相对标准偏差, 结果 RSD＝0.10%,表明方法的重现性良好。 2.4.5 加样回收率试验 精密称取批号为 20070715 样品 6 份,各约 0.1 g,分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.1 mg/mL) 3 mL,按“2.2”项下方法制备样品溶液,按上述色谱条件测定。 记录淫羊藿苷的峰面积并计算其含量,平均回收率为 99.43%, RSD＝0.29%(n ＝6)。结果见表 1。
different place of production and different pharmaceutical genetic in Liaoning Province. Methods Icariin was used as the chemical reference substance to establish HPLC and ultraviolet spectrophotometry methods for content determination of icariin and total flavonoids. Results The content of icariin in leaves was from 0.197% to 0.347%, and in stem was from 0.043% to 0.050%. The content of total flavonids in leaves was from 6.68% to 8.85%, and in stem was from 1.3% to 2.7%. The calibration curves of icariin was in good linearity over the range of 0.3～1.8 µg (r ＝0.999 9) and total flavonids was 0.5～3 µg/mL (r ＝0.999 9). The average recovery of icariin was 99.43% (n ＝6, RSD＝0.29%) and total flavonids was 100.38% (n ＝9, RSD＝ 1.60%). Conclusions The content of flavonids in Epimedium koreanum Nakai of different place of production and different pharmaceutical genetic has large difference, the content in leaves is far higher than in stem.