6-BA对剪股颖愈伤组织生长的影响实验设计

6-BA对MMSG剪股颖愈伤组织生长的影响
实验设计
一、实验目的
因为6-BA高温灭菌前加入和6-BA抽滤灭菌，高温灭菌后加入对匍匐剪股颖愈伤组织的诱导有影响。

为了探究6-BA最适宜的使用方法，故设计了这个试验。

二、试验变量
6-BA储藏条件：4摄氏度冰箱；-20摄氏度冰箱
6-BA灭菌方法：抽滤灭菌；高压蒸汽灭菌
三、培养基种类（每种培养基配100毫升）
MMSG基础培养基+4摄氏度储藏6-BA抽滤灭菌Ⅰ号培养基
MMSG基础培养基+4摄氏度储藏6-BA高压蒸汽灭菌Ⅱ号培养基
MMSG基础培养基+ -20摄氏度储藏6-BA抽滤灭菌Ⅲ号培养基
MMSG基础培养基不加6-BA Ⅴ号培养基
四、试验内容
外植体消毒：（接种前3天进行）
剪股颖成熟胚次氯酸钠消毒震荡1小时，无菌水清洗，4摄氏度暗环境3天，每天
更换无菌水。

接种前，次氯酸钠清洗20分钟，无菌水洗净
6-BA及dicamba母液的配置:
1mg/ml 6-BA：少量稀盐酸溶解6-BA，蒸馏水定容。

4摄氏度，-20摄氏度冰箱储存
1mg/ml Dicamba：少量蒸馏水溶解dicamba，蒸馏水定容。

4摄氏度冰箱，黑暗环境储存
MMSG基础培养基配方：
Callus-induction medium(MMSG)诱导愈伤组织
五、实验流程
1．超净工作台消毒，拿出-20冰箱6-BA化冻。

2．配置1mg//ml6-BA，4摄氏度冰箱保存。

25ml
3．MMSG培养基配制
5. 接种剪股颖，每个培养皿接40粒
6. 24摄氏度，黑暗环境培养
7.每两天观察外植体生长情况，并记录
五、试验用具
灭菌器具:
蓝枪头
抽滤灭菌针管5ml、培养皿及绿色过滤器、10ml离心管培养皿及滤纸、尖头镊子、牙签
高温袋
试验用具
一次性培养皿3包
100ml三角瓶5个
实验仪器
PH计
磁力搅拌器
振荡仪。