辣椒红色素的提取和检测

三、实验仪器与试剂
仪器：
圆底烧瓶(250mL)，索氏提取器，直型水冷凝管，蒸馏 头，层析缸，CMC硅胶薄层板(5×15cm玻璃板)，烧杯(250 mL)，锥形瓶(100mL)，试剂瓶(100mL)，量筒(100mL)，点 滴板1个，温度计(100℃)，电热套，恒温水浴锅，722光栅 型分光光度计，药物天平，电子天平，组织捣碎机，电吹 风，剪刀(公用)，玻棒，铅笔，小尺子(自备)。
4、辣椒红色素的色价测定
准确称取0.0020g（精确到0.0002g）辣椒色素，用乙醇 溶解并定容成 25mL，以乙醇作参比，测定460nm处的吸光 度，计算 E1% 1cm 来确定辣椒红色素的色价，换算 460 计算辣 椒红色素的含量。
提取辣椒红色素的实验流程
20g辣椒粉 180mL5％NaOH
3、薄层色谱分析分离
取少量干燥的辣椒色素于点滴板上，用适量石油醚溶 解。用平口毛细管吸取辣椒色素溶液点样在两个点样原点 上，点样2～5次，点样后的斑点直径小于3mm，用石油醚 (沸点30~60℃)与丙酮10︰1(体积比)的混合液作展开剂展开。 展开后取出薄层板，立即划出前沿位置，电吹风吹干除 去展开剂，轻画出各斑点的位置、观察斑点颜色并计算Rf 值，并根据薄层色谱展开图以及它们的结构确定这三个斑点 的归属。
2、辣椒红色素的提取
置于索氏提取器的滤纸筒中装入辣椒，筒上口 放一小团脱脂棉； 250mL 洁净的圆底烧瓶中加入 120mL95 ％乙醇和几粒沸石，加热进行抽提五次以 上（提取液颜色很淡时即可停止抽提）后，将提取 装置改成常压蒸馏装置，蒸出大部分乙醇（约剩余 5～6mL乙醇）。将残液及少量馏出液洗烧瓶的洗涤 液倾入已准确称出重量的试剂瓶中，在100℃烘干后 称重，计算提取率。
辣椒红色素的提取和检测
生物与环境实验中心化学实验室 2013.05
一、实验目的
1、了解从辣椒中提取辣椒红色素的基本原理 和方法 2、进一步掌握索氏提取、薄层色谱和吸光度 测定等操作技术。
二、实验原理
红辣椒中含有多种色素，其含量可高达 3.2g/100g( 成熟的干辣椒 ) ，已知的有辣椒红色素 （ C 4 0 H 5 6 O 3 ， M=584.85g· mol - 1 ）、辣椒玉红素 （C40H56 O4， M=600.85g· mol -1 ）和 β -胡萝卜素，它 们都是类胡萝卜素，在结构上都属于二环四萜化合 物。辣椒红色素是深红色粘性液体或深胭脂红色结 晶的天然食用色素，并具有营养保健作用和抗癌能 力。辣椒红色素易溶于乙醇、丙酮、二氯甲烷、植 物油而不溶于甘油和水。
索氏提取器 去除辣素辣椒粉 120mL95％乙醇 沸石2～3粒
90℃水浴 1.5h 置双层纱布中 自来水洗涤 乙醇 提取2~3h 至提取液 颜色很浅 常压蒸馏 补加沸石 挤干 50mL95％ 乙醇浸提 回收 去除辣素 的辣椒粉
浓缩液 广囗瓶
计算：E1% 1cm 换算： 460 红色素含量
100℃ 烘干
辣椒中含有强烈辛辣味的辣素（辣椒碱），含量一般为 0.2％～0.5％。固态辣椒碱是白色或淡黄色针状晶体，不溶于 水，易溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿。 辣椒碱都是酰胺类化合物，通式为 O OCH3 R－C－NH－CH2－ －OH 其酚羟基具有弱酸性，可溶于NaOH溶液中。用有机溶剂提取 红辣椒中的辣椒红色素过程中，需先除去辣椒碱，提取得到 的辣椒色素经浓缩、干燥后，可用薄层色谱进行分析分离， 由分光光度法测定辣椒红色素的色价及含量。
试剂： 材料：
红辣椒干、95％乙醇，丙酮，石油醚(沸点30～60℃)， 15％NaOH溶液。 毛细管，沸石，纱布，脱脂棉，滤纸，擦镜纸，pH试 纸。
四、实验步骤
1、辣椒碱的除去
将干的红辣椒剪碎去籽并捣碎，称取20g，加 入180mL（按1︰9的比例）5%NaOH溶液于250mL烧 杯中，在90℃水浴上加热1.5h后，将杯内液体倾倒 于双层纱布上滤去碱液，用水洗涤至中性，挤干， 放入100mL烧瓶中，用50mL95%乙醇浸提备用。
辣椒红色素 称量提取率
称取0.0020g 辣椒 红色素
乙醇溶解 定容成25mL
少量溶解
测460nm 吸光度A
点样展开
Leabharlann Baidu
薄层色谱 分析
计算Rf值
= 1% 式中 E1cm 460—被测试样为1%, 1cm比色皿,在 最大吸收峰460nm处的吸光度,即为色价; A—实测试样的吸光度 f—稀释倍数 m—试样质量

E1% 1cm
A× f m ×1/100
六、思考题
1、干红辣椒用NaOH溶液浸泡后，为什么不采用过滤或抽滤的方法 进行固液分离？ 答：辣椒容易覆盖住滤纸，难以固液分离。 2、干红辣椒的除辣操作时，水浴温度不能超过90℃，水浴时间不宜 过长，其原因是什么？ 答：温度太高辣椒红色素会分解 3、薄层色谱中的Rf值有何意义？不同的展开系统对Rf值会产生什么 影响？ 答：Rf值为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。展开系统的两种溶剂 极性越接近，斑点越分散，越狭长。 4、薄层板上点样量过多或过少，对薄层色谱分离效果 有什么影响？ 答：样品过多容易拖尾，样品过少点样不明显，溶剂未挥发就二次 点样会使点跑得比较大。