杜平华 2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
7
h
五、方法验证试验增修订内容 ⒈试验菌株 删除铜绿假单胞菌增加大肠
埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄 色葡萄球菌)。
⒉薄膜过滤法 供试品用量 将规定量供 试品 按薄膜过滤法过滤 修改为取每种培
养基规定接种的供试品总量。
8
h
六、供试品的无菌检查增修订内容
⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种 的供试品量按表2、表3规定删除采用直接接 种法时的规定。
4
h
三、培养基增修订内容
⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基 的使用范围(用于培养好氧菌、厌氧菌及用于 培养真菌)
⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨 基苯甲酸、聚山梨酯-80等。 理由 经验证试验选择适宜的中和剂、灭活剂 和表面活性剂
5
h
培养基适用性检查增修订内容
3、培养基灵敏度试验 ⑴删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制
2010年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查方法增修定内容
杜平华
h
1
起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、 环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着 力解决发展中的问题。
二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自 主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国 药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国 际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进 医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会 作出贡献。
12
h
表1 、表2 、表3增修订
表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量
修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每 支供试品接入每管培养基的最少样品量
第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改 为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个 容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检
31
h
⑵新增培养基适用性检查方法 ①液体培养基促生长能力检查。 ②固体培养基促生长能力检查。
③培养基抑制能力检查。
④液体培养基指示能力检查。 ⑤固体培养基指示能力检查。 试验结果与对照培养基比较
32
h
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
验数量加倍。
13
h
表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验 量 修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每 个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最 少检验数量加倍。
40
h
一、抑菌剂效力检查法指导原则
⒈指导原则的目的 ⑴是为测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评 价最终产品的抑菌效力及生产企业在制剂研发阶段抑 菌剂的确定提供指导。 ⑵为防止药品由于微生物污染而引起变质，对服用者 造成不良反应，在药品生产过程中加入一定剂量的抑 菌剂。 ⑶抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作 为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作 为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
抑源自文库能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
铜绿假单 胆盐乳糖
促生长能力
铜绿假单胞菌
胞菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
溴化十六烷基三 促生长能力
铜绿假单胞菌
甲铵琼脂
抑制能力
大肠埃希菌
绿脓菌素测定
用培养基
促生长能力+指示能力 铜绿假单胞菌
金黄色葡 亚碲酸盐肉汤 促生长能力
金黄色葡萄球菌
萄球菌
抑制能力
大肠埃希菌
卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力 金黄色葡萄球菌
10
h
⑵装有药物的注射器供试品 取规定量，删去装上无菌针头….修改为排出 注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可 吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水 溶性制剂供试品项下方法操作。
⑶无菌气雾剂供试品 供试液的制备将供试品置冰室修改为置至少 -20℃的冷冻室约1小时。
11
h
⒋ 直接接种法删除β－内酰胺类或磺 氨类供试品。
33
h
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
36
h
增加了白色念珠菌检验方法
增菌培养 沙氏葡萄糖肉汤培养基。 分离培养 划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养 基平板上。
37
h
鉴定试验
典型菌落 ⒈沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓 酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变 深、质地变硬或有皱摺。 ⒉念珠菌显色培养基 菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。
19
h
⑶新增贴剂供试液制备
供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷 脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。
20
h
⑷具抑菌活性的供试品增修订内容
删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品 具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的 方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供 试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过 滤法。
21
h
①离心沉淀集菌法
两次离心修改为一次离心； 500转/分离心，不 超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。
22
h
细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容
⒈新增 计数培养基的适用性检查 ⑴菌种
大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（
B） 26 003〕
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B） 63 501〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕
h
⑶控制菌检查法增修订内容 ①疑似致病菌的确证
微生物控制菌检查中没有规定进一步确证疑 似致病菌的方法。选择已被认可的菌种鉴定方 法。如《伯杰氏细菌鉴定手》。 ②控制菌检查方法验证 删去阴性菌对照组。
35
h
③大肠菌群检查用胆盐乳糖培养基 改为乳糖胆盐。 ④改梭菌检查用庖肉培养基为梭菌增 菌培养基。 ⑤改梭菌培养时间72～96小时为48 小时。
备 “（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过 滤菌丝的无菌毛细吸管）” 修改为“用适宜
的方法吸出孢子悬液”。 ⑵增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加 入0.05％v/v）聚山梨酯80。
6
h
四、试验稀释液、冲洗液增修订为 ⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经
验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 ⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活 性剂除证明其有效性外还应证明对污染的 微生物无影响修改为无毒性。
或甘露醇盐琼脂 抑制能力
大肠埃希菌
梭菌 梭菌增菌培养基 促生长能力
生孢梭菌
哥伦比亚琼脂 促生长能力
生孢梭菌
白色念 沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力
白色念珠菌
珠菌
沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
念珠菌显色培养基 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
34 吐温80玉米琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
17
h
3、检验量增修订内容
⑴中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 ⑵沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并 注明（其中10 g用于阳性对照）。
18
h
4、供试液的制备增修订内容 ⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 ⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。
38
h
⒋确认试验 取1%吐温80-玉米琼脂 培养基培养物进行染色，镜检及芽管 试验。 结果判断 非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌 丝、芽管判未检出白色念珠菌。
39
h
新增微生物限度检查法指导原则 一、抑菌剂效力检查法指导原则 二、药品微生物检验替代方法验证指
导原则 三、微生物限度检查法应用指导原则 四、药品微生物实验室规范指导原则
⒉阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有 效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。
9
h
⒊薄膜过滤法 ①增加了抗生素供试品滤膜选择的指导 应选 择低吸附的滤器及滤膜。 ②若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为 100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不 得超过1000ml 。 ⑴水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用 的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.
41
h
⒉使用范围及原则 ⑴使用范围 如果药物本身不具有充分 的抗菌活性，应根据制剂特性添加适宜 的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使 用过程中可能发生的微生物污染和繁殖， 对患者造成伤害。
42
h
⑵使用原则 所有抑菌剂都具有一定的毒性，添加抑 菌剂时应注意以下原则: ①抑菌剂的用量应为最低有效量。 ②具有抗菌活性的制剂应确认其抗菌效力。
24
h
2.新增常见干扰物的中和剂和灭活方法 参见 表1常见干扰物的中和剂或灭活方法
25
h
6、供试品检查增修订内容 26
h
⑴平皿法 删去采用平皿法进行菌数测定 时，连续2～3个稀释级的供试液。 修改为按计数方法的验证试验确认的程序 进行供试液制备。
27
h
⑵培养时间修改内容 除另有规定外，细菌培养48小时
29
h
⑶薄膜过滤法增修订内容 新增内容 采用其它直径的滤膜，冲洗量 应相应的进行调整（如使用膜直径增大冲 洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖 整个滤膜）。 删去每片滤膜的总过滤量不宜过大，修改 为总冲洗量不得超过1000ml。
30
h
7、控制菌检查增修订 ⑴增加控制菌检查用培养基的适用性检查； 检查项目包括促生长、抑制及指示能力检查 参照表2
黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F） 98 003〕
23
h
① 增加了菌悬液的制备及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小
时内使用，若保存在2～8℃可以在24小 时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用，每株试 验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按 规定条件培养计数，同时用相应的对照培 养基替代被检培养基进行上述试验。 ②增加了对照培养。
改为3天，霉菌、酵母菌培养72小时 改为 5天，必要时，可适当延长培养 时间至7天进行菌落计数并报告。
28
h
菌数报告规则增修订内容 ⒈若同稀释级两个平板的菌落平均数不 小于15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 ⒉细菌、酵母菌和霉菌平均菌落数在 30～300 、30～100之间的稀释级修改 为选取菌落数小于300cfu和100cfu的稀 释级作为菌数报告的依据。
14
h
微生物限度检查增修定内容 15
h
修改内容
1、培养条件 控制菌培养温度35℃～37℃修 改为30℃～35℃(细菌、控制菌培养温度相 同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高
温菌在该温度下也可以生长。
16
h
增修订内容
2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。
2
h
2010年版无菌检查法增修订内容
3
h
一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具
、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 二、进一步明确了无菌检查保障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进 行环境检测。 2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过 无菌技术的培训。
h
五、方法验证试验增修订内容 ⒈试验菌株 删除铜绿假单胞菌增加大肠
埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄 色葡萄球菌)。
⒉薄膜过滤法 供试品用量 将规定量供 试品 按薄膜过滤法过滤 修改为取每种培
养基规定接种的供试品总量。
8
h
六、供试品的无菌检查增修订内容
⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种 的供试品量按表2、表3规定删除采用直接接 种法时的规定。
4
h
三、培养基增修订内容
⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基 的使用范围(用于培养好氧菌、厌氧菌及用于 培养真菌)
⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨 基苯甲酸、聚山梨酯-80等。 理由 经验证试验选择适宜的中和剂、灭活剂 和表面活性剂
5
h
培养基适用性检查增修订内容
3、培养基灵敏度试验 ⑴删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制
2010年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查方法增修定内容
杜平华
h
1
起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、 环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着 力解决发展中的问题。
二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自 主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国 药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国 际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进 医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会 作出贡献。
12
h
表1 、表2 、表3增修订
表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量
修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每 支供试品接入每管培养基的最少样品量
第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改 为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个 容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检
31
h
⑵新增培养基适用性检查方法 ①液体培养基促生长能力检查。 ②固体培养基促生长能力检查。
③培养基抑制能力检查。
④液体培养基指示能力检查。 ⑤固体培养基指示能力检查。 试验结果与对照培养基比较
32
h
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
验数量加倍。
13
h
表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验 量 修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每 个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最 少检验数量加倍。
40
h
一、抑菌剂效力检查法指导原则
⒈指导原则的目的 ⑴是为测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评 价最终产品的抑菌效力及生产企业在制剂研发阶段抑 菌剂的确定提供指导。 ⑵为防止药品由于微生物污染而引起变质，对服用者 造成不良反应，在药品生产过程中加入一定剂量的抑 菌剂。 ⑶抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作 为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作 为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
抑源自文库能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
铜绿假单 胆盐乳糖
促生长能力
铜绿假单胞菌
胞菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
溴化十六烷基三 促生长能力
铜绿假单胞菌
甲铵琼脂
抑制能力
大肠埃希菌
绿脓菌素测定
用培养基
促生长能力+指示能力 铜绿假单胞菌
金黄色葡 亚碲酸盐肉汤 促生长能力
金黄色葡萄球菌
萄球菌
抑制能力
大肠埃希菌
卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力 金黄色葡萄球菌
10
h
⑵装有药物的注射器供试品 取规定量，删去装上无菌针头….修改为排出 注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可 吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水 溶性制剂供试品项下方法操作。
⑶无菌气雾剂供试品 供试液的制备将供试品置冰室修改为置至少 -20℃的冷冻室约1小时。
11
h
⒋ 直接接种法删除β－内酰胺类或磺 氨类供试品。
33
h
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
36
h
增加了白色念珠菌检验方法
增菌培养 沙氏葡萄糖肉汤培养基。 分离培养 划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养 基平板上。
37
h
鉴定试验
典型菌落 ⒈沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓 酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变 深、质地变硬或有皱摺。 ⒉念珠菌显色培养基 菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。
19
h
⑶新增贴剂供试液制备
供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷 脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。
20
h
⑷具抑菌活性的供试品增修订内容
删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品 具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的 方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供 试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过 滤法。
21
h
①离心沉淀集菌法
两次离心修改为一次离心； 500转/分离心，不 超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。
22
h
细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容
⒈新增 计数培养基的适用性检查 ⑴菌种
大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（
B） 26 003〕
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B） 63 501〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕
h
⑶控制菌检查法增修订内容 ①疑似致病菌的确证
微生物控制菌检查中没有规定进一步确证疑 似致病菌的方法。选择已被认可的菌种鉴定方 法。如《伯杰氏细菌鉴定手》。 ②控制菌检查方法验证 删去阴性菌对照组。
35
h
③大肠菌群检查用胆盐乳糖培养基 改为乳糖胆盐。 ④改梭菌检查用庖肉培养基为梭菌增 菌培养基。 ⑤改梭菌培养时间72～96小时为48 小时。
备 “（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过 滤菌丝的无菌毛细吸管）” 修改为“用适宜
的方法吸出孢子悬液”。 ⑵增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加 入0.05％v/v）聚山梨酯80。
6
h
四、试验稀释液、冲洗液增修订为 ⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经
验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 ⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活 性剂除证明其有效性外还应证明对污染的 微生物无影响修改为无毒性。
或甘露醇盐琼脂 抑制能力
大肠埃希菌
梭菌 梭菌增菌培养基 促生长能力
生孢梭菌
哥伦比亚琼脂 促生长能力
生孢梭菌
白色念 沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力
白色念珠菌
珠菌
沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
念珠菌显色培养基 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
34 吐温80玉米琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌
17
h
3、检验量增修订内容
⑴中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 ⑵沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并 注明（其中10 g用于阳性对照）。
18
h
4、供试液的制备增修订内容 ⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 ⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。
38
h
⒋确认试验 取1%吐温80-玉米琼脂 培养基培养物进行染色，镜检及芽管 试验。 结果判断 非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌 丝、芽管判未检出白色念珠菌。
39
h
新增微生物限度检查法指导原则 一、抑菌剂效力检查法指导原则 二、药品微生物检验替代方法验证指
导原则 三、微生物限度检查法应用指导原则 四、药品微生物实验室规范指导原则
⒉阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有 效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。
9
h
⒊薄膜过滤法 ①增加了抗生素供试品滤膜选择的指导 应选 择低吸附的滤器及滤膜。 ②若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为 100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不 得超过1000ml 。 ⑴水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用 的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.
41
h
⒉使用范围及原则 ⑴使用范围 如果药物本身不具有充分 的抗菌活性，应根据制剂特性添加适宜 的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使 用过程中可能发生的微生物污染和繁殖， 对患者造成伤害。
42
h
⑵使用原则 所有抑菌剂都具有一定的毒性，添加抑 菌剂时应注意以下原则: ①抑菌剂的用量应为最低有效量。 ②具有抗菌活性的制剂应确认其抗菌效力。
24
h
2.新增常见干扰物的中和剂和灭活方法 参见 表1常见干扰物的中和剂或灭活方法
25
h
6、供试品检查增修订内容 26
h
⑴平皿法 删去采用平皿法进行菌数测定 时，连续2～3个稀释级的供试液。 修改为按计数方法的验证试验确认的程序 进行供试液制备。
27
h
⑵培养时间修改内容 除另有规定外，细菌培养48小时
29
h
⑶薄膜过滤法增修订内容 新增内容 采用其它直径的滤膜，冲洗量 应相应的进行调整（如使用膜直径增大冲 洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖 整个滤膜）。 删去每片滤膜的总过滤量不宜过大，修改 为总冲洗量不得超过1000ml。
30
h
7、控制菌检查增修订 ⑴增加控制菌检查用培养基的适用性检查； 检查项目包括促生长、抑制及指示能力检查 参照表2
黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F） 98 003〕
23
h
① 增加了菌悬液的制备及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小
时内使用，若保存在2～8℃可以在24小 时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用，每株试 验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按 规定条件培养计数，同时用相应的对照培 养基替代被检培养基进行上述试验。 ②增加了对照培养。
改为3天，霉菌、酵母菌培养72小时 改为 5天，必要时，可适当延长培养 时间至7天进行菌落计数并报告。
28
h
菌数报告规则增修订内容 ⒈若同稀释级两个平板的菌落平均数不 小于15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 ⒉细菌、酵母菌和霉菌平均菌落数在 30～300 、30～100之间的稀释级修改 为选取菌落数小于300cfu和100cfu的稀 释级作为菌数报告的依据。
14
h
微生物限度检查增修定内容 15
h
修改内容
1、培养条件 控制菌培养温度35℃～37℃修 改为30℃～35℃(细菌、控制菌培养温度相 同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高
温菌在该温度下也可以生长。
16
h
增修订内容
2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。
2
h
2010年版无菌检查法增修订内容
3
h
一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具
、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 二、进一步明确了无菌检查保障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进 行环境检测。 2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过 无菌技术的培训。