颅脑损伤大鼠脑组织中HIF-1α的表达变化及其意义
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山东 医药 ２ １ ０ ０年第 ５ ０卷第 ２期
・基础研究 ・ 来自颅脑 损 伤 大 鼠脑 组 织 中 Ｈ Ｆ ｌＬ Ｉ—ｏ 的 表 达 变化 及 其 意义
李 建华 李 建 民¨ ， ， 吴淑 华 朱 玉红 。
（ １滨 州 医学院 附属 医院 ， 山东滨 州 ２ ６ ０ ； ５ ６ ３ ２滨 州 医学院）
１ ２ 方 法 ．
１２５ 大 鼠脑 组 织 中 ＭＶ ．． Ｄ值 测 算 以 Ｃ 标 记 Ｄ 血 管 内皮细胞 ， 染色呈 黄色 、 棕黄 色为 阳性 。于损 伤 灶 周 围 区随机 选择 １ Ｏ个 １０倍 视 野 进行 微 血 管 计 ０ 数， 求其 均数作 为 Ｍ Ｄ值 。 Ｖ １２６ 统计 学方 法 ．． 采 用 ＳＳ １． 计软件 。两 Ｐ Ｓ３０统 组 比较采用 独 立样 本 ｔ 验 ， 内 比较 采 用 配 对 样 检 组 本 检验 。Ｐ≤００ 为差异有 统计 学意 义 。 ．５
Ｐｕ６ ０图像 分析 系统 ， 定 阳性 细胞 的光 密度 值 。 ｌｓ． 测
１１ 材 料 ．
健 康 、 年 雄性 Ｗｉａ 大 鼠 ９ 成 ｓｒ ｔ Ｏ只 。体
质 量 ２０～ ５ ； ０ ２ ０ｇ 即用 型 ＨＩ一ｏ、 Ｄ 多 克 隆抗 Ｆ１【Ｃ ３兔 体及 Ｓ Ｂ Ａ Ｃ免疫 组化试 剂盒 ， Ａ Ｄ Ｂ显色试 剂盒 。
ｍｎ 中线旁 ２Ⅱｎ处 钻孔 ， 径 约 ５ｍ 保持 硬脑膜 ｌ、 Ⅱ 直 ｍ， 完整 。观察 组 采 用 改 进 的 Ｆｅｅ … 制作 脑 外 伤 ｅｎｙ法
模 型 。对 照组仅 切开 头皮 和颅骨 开 窗。
２ １ 两 组大 鼠脑组 织 含水 量 、 Ｉ 一 蛋 白表 达 及 ． Ｈ Ｆ１
摘要 ： 目的 观察颅脑外伤大鼠脑组织 中低氧诱导 因子．俚（ Ｉ－ａ 的表达变化 ， １ Ｈ Ｆｌ ） 探讨其 与脑水肿 、 微血 管密
度 （ Ｄ 的关系。方法 ＭＶ ） 结果 将９ ０只大鼠随机分为两组 ， 观察组 制作脑外伤 动物模型 ， 照组仅切 开头皮 和颅 骨开 对 窗。采用称 重法测定脑组织含水量 ， 免疫组化法检测脑组织 中的 Ｈ Ｆｌ 用 Ｃ 标记血 管内皮细胞 并计数 ＭＶ 。 Ｉ—ａ， Ｄ Ｄ 大鼠脑组织 中 Ｈ Ｆ１ Ｉ．ａ脑损伤早期表达滞后于脑水肿 ， 后期与脑水肿变化基 本一致 ， 均在创伤后 ３ｈ明显升 高， 伤后 １ｄ 高峰 ， 达 伤后 ７ｄ下降 ，４ｄ １ 恢复正常 。ＭＶ Ｄ在伤后 ３ ｉ ０ｒ ｎ即下降 ， ａ 持续 至伤后 ３ｄ开始恢 复 ，４ｄ基 １ 本恢复正常。大鼠损伤脑组织 中 Ｈ Ｆ１ Ｉ．ａ表达与脑 组织含水量 呈正相关 （ ＝０ ９ ２ Ｐ＜０ ０ ） 而 Ｈ Ｆ １ ｒ ．２ ， ．５ ， Ｉ．仅与 ＭＶ Ｄ 无关（ ＝ ．０ ， ０ ０ ） ｒ ０ ０ ４ Ｐ＞ ．５ 。结论 中图分类号 ： ６ １ １ Ｒ ５ ． Ｈ Ｆ１ ’ Ｉ．ａ在脑外伤后高表达 ， 与脑水肿相关 ， ＭＶ 与 Ｄ无关。 文章编号 ：０２２６ ２ １ ） ２０ ３ －２ １０ ６ Ｘ（０ ０ ０ －０ ２０
１２３ 大 鼠脑组 织 含 水量 测 定 ．．
将 损伤 灶 脑 组 织
用 电子天平 称取 湿重 ， 放人 恒温 干 燥箱 １０℃ 烤 ２ １ ４
ｈ 至 两 次 称 重误 差 ＜０ ２ ｍ ， ． ｇ时 的 重 量 为 其 干 重 。 脑 组织含水 量 （ ）＝（ ％ 湿重 一干重 ） 湿 重 ×１０ 。 ／ ０％
ＭＶ Ｄ值 比较
见表 １ 。
１２２ 标本 取材 及 切 片 制作 ．．
两 组 大 鼠分 别在 伤
２ ２ 大 鼠损 伤脑 组织 中 Ｈ Ｆ ｉｔ 。 Ｉ。Ｏ表达 与脑 组织 含水 量 、 Ｄ的关 系 大 鼠损 伤 脑组 织 中 Ｈ Ｆ１ｔ 达 ＭＶ Ｉ ．Ｏ 表
后 ３ ｉ 、 ｈ ３ｈ ６ｈ １ 、 ｄ ３ｄ ７ｄ １ ０ ｍ ｎ １ 、 、 、２ｈ １ 、 、 、４ｄ各处
１２ ４ 大 鼠脑组 织 中 Ｈ Ｆ１ ．． Ｉ 一Ｑ蛋 白检测
采用免 疫
脑水 肿及 微血 管密度 （ Ｄ 的关 系 。 ＭＶ ）
１ 材料 与 方法
组化 Ｓ Ｐ法 ， 试剂 盒说 明操 作 ； 按 以胞 核或 胞 质 内 出 现 黄色或 棕 黄 色 颗 粒 为 阳性 细胞 。采 用 Ｉ ａｅＰｏ ｍ ｇ ｒ
关键词 ： 颅脑损伤 ； 脑水肿 ； 氧诱导 因子 ； 低 微血管密度
文献标 志码 ： Ｂ
研 究 发 现 ， 氧 诱 导 因子一 （ Ｉ一 与外 伤 低 １ ＨＦ１ ） 性 脑损伤 有关 ， 可参 与调节 细胞 内氧代 谢 ， 血管生 是
长信 号途 径 的 关 键 上 游 转 录 因 子。２ ０ ０ ９年 ７月 １ 日 一１ Ｏ月 ３ 日， 们 观 察 了脑 外 伤 大 鼠不 同受 伤 ０ 我 时段 脑组 织 中 Ｈ Ｆ １ 的表 达 变化 ， 讨 Ｈ Ｆ Ｉ 与 Ｉ一 探 Ｉ—
・ 通讯作者
３ ２
Ｈ Ｆ１ Ｉ一 仅与 Ｍ Ｄ无相关性（ ＝ ．０ ， ００ ） Ｖ ｒ ００４ Ｐ＞ ．５ 。
死 ５只 ， 超净工 作 台 ， 置 开颅 ， 完整 取 出 鼠脑 ， 鼠脑 将
与脑 组织 含水 量呈 正相 关 （ ＝ 。２ ， ， ０ ９２ Ｐ＜００ ） 而 ．５ ，
损伤灶 切成 ３ｍ ｍ厚 的组织块， 一部分用于水含量 检测 ； 一部分采用 ４ ％多聚甲醛溶液固定 ， 常规石蜡
包埋 ， 组织切片， ４℃ 冰箱保存。
２ 结 果
１２ １ 动 物分组 与脑外 伤模 型制 作 ．．
将９ Ｏ只大 鼠
随机分 为 观 察 组 和 对 照 组 ， ４ 各 ５只 。两 组 均 用
３３ ． ％水合氯醛按 １ ｌ ０ 腹腔注射麻醉 ， ／ ０ｇ ｍ １ 俯卧位 固定 头 部 ， 毛 ， 菌 条 件 下 用 磨 钻 在 人 字 缝 前 ２ 去 无
・基础研究 ・ 来自颅脑 损 伤 大 鼠脑 组 织 中 Ｈ Ｆ ｌＬ Ｉ—ｏ 的 表 达 变化 及 其 意义
李 建华 李 建 民¨ ， ， 吴淑 华 朱 玉红 。
（ １滨 州 医学院 附属 医院 ， 山东滨 州 ２ ６ ０ ； ５ ６ ３ ２滨 州 医学院）
１ ２ 方 法 ．
１２５ 大 鼠脑 组 织 中 ＭＶ ．． Ｄ值 测 算 以 Ｃ 标 记 Ｄ 血 管 内皮细胞 ， 染色呈 黄色 、 棕黄 色为 阳性 。于损 伤 灶 周 围 区随机 选择 １ Ｏ个 １０倍 视 野 进行 微 血 管 计 ０ 数， 求其 均数作 为 Ｍ Ｄ值 。 Ｖ １２６ 统计 学方 法 ．． 采 用 ＳＳ １． 计软件 。两 Ｐ Ｓ３０统 组 比较采用 独 立样 本 ｔ 验 ， 内 比较 采 用 配 对 样 检 组 本 检验 。Ｐ≤００ 为差异有 统计 学意 义 。 ．５
Ｐｕ６ ０图像 分析 系统 ， 定 阳性 细胞 的光 密度 值 。 ｌｓ． 测
１１ 材 料 ．
健 康 、 年 雄性 Ｗｉａ 大 鼠 ９ 成 ｓｒ ｔ Ｏ只 。体
质 量 ２０～ ５ ； ０ ２ ０ｇ 即用 型 ＨＩ一ｏ、 Ｄ 多 克 隆抗 Ｆ１【Ｃ ３兔 体及 Ｓ Ｂ Ａ Ｃ免疫 组化试 剂盒 ， Ａ Ｄ Ｂ显色试 剂盒 。
ｍｎ 中线旁 ２Ⅱｎ处 钻孔 ， 径 约 ５ｍ 保持 硬脑膜 ｌ、 Ⅱ 直 ｍ， 完整 。观察 组 采 用 改 进 的 Ｆｅｅ … 制作 脑 外 伤 ｅｎｙ法
模 型 。对 照组仅 切开 头皮 和颅骨 开 窗。
２ １ 两 组大 鼠脑组 织 含水 量 、 Ｉ 一 蛋 白表 达 及 ． Ｈ Ｆ１
摘要 ： 目的 观察颅脑外伤大鼠脑组织 中低氧诱导 因子．俚（ Ｉ－ａ 的表达变化 ， １ Ｈ Ｆｌ ） 探讨其 与脑水肿 、 微血 管密
度 （ Ｄ 的关系。方法 ＭＶ ） 结果 将９ ０只大鼠随机分为两组 ， 观察组 制作脑外伤 动物模型 ， 照组仅切 开头皮 和颅 骨开 对 窗。采用称 重法测定脑组织含水量 ， 免疫组化法检测脑组织 中的 Ｈ Ｆｌ 用 Ｃ 标记血 管内皮细胞 并计数 ＭＶ 。 Ｉ—ａ， Ｄ Ｄ 大鼠脑组织 中 Ｈ Ｆ１ Ｉ．ａ脑损伤早期表达滞后于脑水肿 ， 后期与脑水肿变化基 本一致 ， 均在创伤后 ３ｈ明显升 高， 伤后 １ｄ 高峰 ， 达 伤后 ７ｄ下降 ，４ｄ １ 恢复正常 。ＭＶ Ｄ在伤后 ３ ｉ ０ｒ ｎ即下降 ， ａ 持续 至伤后 ３ｄ开始恢 复 ，４ｄ基 １ 本恢复正常。大鼠损伤脑组织 中 Ｈ Ｆ１ Ｉ．ａ表达与脑 组织含水量 呈正相关 （ ＝０ ９ ２ Ｐ＜０ ０ ） 而 Ｈ Ｆ １ ｒ ．２ ， ．５ ， Ｉ．仅与 ＭＶ Ｄ 无关（ ＝ ．０ ， ０ ０ ） ｒ ０ ０ ４ Ｐ＞ ．５ 。结论 中图分类号 ： ６ １ １ Ｒ ５ ． Ｈ Ｆ１ ’ Ｉ．ａ在脑外伤后高表达 ， 与脑水肿相关 ， ＭＶ 与 Ｄ无关。 文章编号 ：０２２６ ２ １ ） ２０ ３ －２ １０ ６ Ｘ（０ ０ ０ －０ ２０
１２３ 大 鼠脑组 织 含 水量 测 定 ．．
将 损伤 灶 脑 组 织
用 电子天平 称取 湿重 ， 放人 恒温 干 燥箱 １０℃ 烤 ２ １ ４
ｈ 至 两 次 称 重误 差 ＜０ ２ ｍ ， ． ｇ时 的 重 量 为 其 干 重 。 脑 组织含水 量 （ ）＝（ ％ 湿重 一干重 ） 湿 重 ×１０ 。 ／ ０％
ＭＶ Ｄ值 比较
见表 １ 。
１２２ 标本 取材 及 切 片 制作 ．．
两 组 大 鼠分 别在 伤
２ ２ 大 鼠损 伤脑 组织 中 Ｈ Ｆ ｉｔ 。 Ｉ。Ｏ表达 与脑 组织 含水 量 、 Ｄ的关 系 大 鼠损 伤 脑组 织 中 Ｈ Ｆ１ｔ 达 ＭＶ Ｉ ．Ｏ 表
后 ３ ｉ 、 ｈ ３ｈ ６ｈ １ 、 ｄ ３ｄ ７ｄ １ ０ ｍ ｎ １ 、 、 、２ｈ １ 、 、 、４ｄ各处
１２ ４ 大 鼠脑组 织 中 Ｈ Ｆ１ ．． Ｉ 一Ｑ蛋 白检测
采用免 疫
脑水 肿及 微血 管密度 （ Ｄ 的关 系 。 ＭＶ ）
１ 材料 与 方法
组化 Ｓ Ｐ法 ， 试剂 盒说 明操 作 ； 按 以胞 核或 胞 质 内 出 现 黄色或 棕 黄 色 颗 粒 为 阳性 细胞 。采 用 Ｉ ａｅＰｏ ｍ ｇ ｒ
关键词 ： 颅脑损伤 ； 脑水肿 ； 氧诱导 因子 ； 低 微血管密度
文献标 志码 ： Ｂ
研 究 发 现 ， 氧 诱 导 因子一 （ Ｉ一 与外 伤 低 １ ＨＦ１ ） 性 脑损伤 有关 ， 可参 与调节 细胞 内氧代 谢 ， 血管生 是
长信 号途 径 的 关 键 上 游 转 录 因 子。２ ０ ０ ９年 ７月 １ 日 一１ Ｏ月 ３ 日， 们 观 察 了脑 外 伤 大 鼠不 同受 伤 ０ 我 时段 脑组 织 中 Ｈ Ｆ １ 的表 达 变化 ， 讨 Ｈ Ｆ Ｉ 与 Ｉ一 探 Ｉ—
・ 通讯作者
３ ２
Ｈ Ｆ１ Ｉ一 仅与 Ｍ Ｄ无相关性（ ＝ ．０ ， ００ ） Ｖ ｒ ００４ Ｐ＞ ．５ 。
死 ５只 ， 超净工 作 台 ， 置 开颅 ， 完整 取 出 鼠脑 ， 鼠脑 将
与脑 组织 含水 量呈 正相 关 （ ＝ 。２ ， ， ０ ９２ Ｐ＜００ ） 而 ．５ ，
损伤灶 切成 ３ｍ ｍ厚 的组织块， 一部分用于水含量 检测 ； 一部分采用 ４ ％多聚甲醛溶液固定 ， 常规石蜡
包埋 ， 组织切片， ４℃ 冰箱保存。
２ 结 果
１２ １ 动 物分组 与脑外 伤模 型制 作 ．．
将９ Ｏ只大 鼠
随机分 为 观 察 组 和 对 照 组 ， ４ 各 ５只 。两 组 均 用
３３ ． ％水合氯醛按 １ ｌ ０ 腹腔注射麻醉 ， ／ ０ｇ ｍ １ 俯卧位 固定 头 部 ， 毛 ， 菌 条 件 下 用 磨 钻 在 人 字 缝 前 ２ 去 无