生血散保护骨髓造血功能的作用机理研究_胡致平

2. 1. 1 动物分组与处理 动物饲养于浙江中 医学院实验动物中心动物 房 ,随机分成 4组 ,每组 8只。生血散以 5% 羧甲基纤维 素热溶配制成浓度为 63mg /m l和 126mg /ml 的原液 备用; 碳酸锂以生理盐水溶解配制成浓度为 18. 9m g /m l,分别灌胃给药。各组药物剂量如下: ( 1) 生 理盐水组: 0. 2m l /d× 15d; ( 2)碳酸锂组: 180mg / ( kg. d )× 15d; ( 3) 生血 散Ⅰ 组: 600mg / ( kg. d )× 15d; ( 4)生血散Ⅱ : 1200m g / ( kg. d)× 15d。 以上各组于给药后第 15d,将全部小鼠颈椎脱臼 处死 ,做 C Fu-GM 形成率测定 ,同时取小鼠股骨近 心端约 3m m 之骨组织 ,做病理切片 ,测定造血组织 容量 ( V ol% )。 2. 2 生血 散对注 射 CTX 后 小鼠骨 髓 CFUGM 形成率及骨髓造血组织容量的影响 2. 2. 1 分组与处理 动物饲养方法与地点同上 ,每组 20只。CT X以 生理盐水溶解配制成相应的浓度 ,腹腔注射给药。其 余 药 物配制及 给药方法 同上。各 组分组如 下: ( 1) CTX+ 生理盐水组 ; ( 2) CTX+ 碳酸锂组 ; ( 3) CTX + 生 血散Ⅰ 组 ; ( 4) CTX+ 生血散 Ⅱ 组。各 组均用 CTX ( 100mg /kg )一次性腹腔注射。从注射当日开始 灌胃给药: ( 1) N. S0. 2ml /d× 14d; ( 2) Li CO3 180mg / ( kg. d)× 14d; ( 3)生血散 600mg /( kg. d)× 14d; ( 4) 生血散 1200mg /( kg. d)× 14d。 以上各组分别于注射 C TX后第 4d和第 14d,每 组取 8只小鼠颈椎脱臼处死 , 分别做骨髓 C FU-GM 形成率和骨髓造血组织容量测定。 2. 3 小鼠骨髓 CFU -G M 形成率测定 [1 ] 颈椎脱臼处死小鼠 75% 酒精浸泡 5mi n消毒 ,无 菌分离股首 ,用 7号针头吸取 M ccoy 's5A培养液冲 出全部骨髓 ,过 5号针头 ,洗涤计数后制成 1× 109 / L 的原细胞悬液。然后将细胞悬液加入 d为 1. 077的淋 巴细胞分离液中 , 1500转 /mi n, 离心 15mi n。用单倍 Mccoy 's 5A培养液洗涤分离出的单个核细胞 , 1500 转 /mi n, 离 心 15min, 两 次。弃 去 上 清 液 , 加 入 双 IM DM 使得细胞终浓度为 2× 108 / L,将制备好的细 胞悬液加入含 30% 马血清、 10% 胎肌浸液的培养体 系中 , 最后加入 3% 琼脂 浇板 , 1ml /皿 , 置 37℃ , 5% CO2饱和湿度培养箱中 7d后计数集落 ,以≥ 40个细 胞为一个集落。 2. 4 小鼠骨髓造血组织容量 ( V ol% )测定 [2 ]
2. 5 统计学处理 均数比较用组间 t 检验和配对 t 检验。 3 结果 3. 1 生血散对 正常小鼠骨髓 CFU-GM 形成 率的影响 连续给药 14d后 ,各组小鼠骨髓 CF U-GM 形成 率差异显著。与生理盐水相比较 ,生血散高剂量组和 碳酸锂组对小鼠 C FU-GM 的促进作用十分明显 , 差异极显著 ( P < 0. 01) ,但两组之间无明显无区别 ( P> 0. 05)。生血散低剂量组差异也十分显著 ( P < 0. 01) (见表 1)。
生血散系我院国家级名中医裘笑梅先生的验 方 ,多年来在临床上用于治疗各种血小板减少症和 一些因长期接触放射线而引起的白细胞减少症患 者 ,均取得较好疗效。为初步探讨生血散保护骨髓造 血功能的作用机理 ,我们观察了生血散对正常小鼠 及注射环磷酰胺后小鼠骨髓 CFU-GM 形成率和骨 髓造血组织容量的影响 ,现将结果报道如下。
生血散Ⅰ
8 5. 16± 0. 27*
23. 87± 0. 57*
生血散Ⅱ
8 5. 43± 0. 39* △ 31. 30± 0. 74* △
注: 与生理盐 水组比 较: * P < 0. 001; 与碳 酸锂组 比较: △ P> 0. 05
表 3 生血散对正常小鼠造血组 织容量的影响 ( Vol% )
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2000. V ol. 6. No. 12
表 2 生血散对小鼠注射 CTX后 CFU-GM生成的影响 (x± s )
组 别
n
CFU -GM /2× 105细胞
4d
14d
生理盐水
8 3. 88± 0. 42
15. 33± 0. 44
碳 酸锂
8 5. 21± 0. 31*
30. 73± 0. 65*
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( 1. Foshan Hospital of Traditional Chinese Medi cine, Foshan 528000; 2. Teaching and Research Sect ion , College of Pharmacology , Beij ing Medical University , Bei jing 100083)
材料与方法 1 材料 1. 1 仪器 CEL L-DYN1600血细胞自动分析仪 (美国 ABBO T T 公司 )。 1. 2 试剂与药品 生血散 (浙江省中医院中药房提供 ) , 环磷酰胺
(上海 华联 制药有 限公 司 , 批号: 980102) , 碳酸 锂 ( cp.上海化学试剂公司 ,批号: 918023) , M ccoy 's5A 培养基 (美国 Gibco 公司 ,批号: 21500-067) , IM DM 培养基 (美国 Gibco 公司 ,批号: 12200-036) ,淋巴细 胞分离液 (上海第二试剂厂 ,批号: 971030) ,马血清 (北京军事医学科学院放射医学研究所 , 批号: 980901) ,胎肌浸液 (浙江省中医院血液病研究所提 供 , 批 号: 980704 ) , 琼 脂 ( Sig ma 公 司 , 批 号: A7921) ,羧甲基纤维素 (广东南秀化工有限公司 ,批 号: 39800)。
1. 3 动物 N IH小白鼠 ,雄性 ,体 重 21g± 0. 5g ,由浙 江中 医学院实验动物中心提供。 2 方法
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2. 1 对 正常小鼠骨髓 CFU-GM 形成率及骨 髓造血组织容量的影响
Key words: Buya ng Hua nw u Deco cti on; Ex peri mental throm bus; Plat elet activ ating facto r( P AF) , Rat
实验研究
生血散保护骨髓造血功能的作用机理研究
胡致平 1,钱 华 2 ,庞来君 1 ,沈一平1 ,罗秀素 1 ,虞荣喜 1
如表 3所示 ,连续给药 14d 后 ,各组小鼠的骨髓 造血组织容量发生明显变化。生血散高低剂量组均 显 著高于生理盐 水组 ( P < 0. 001) ,与 碳酸锂组 比 较 ,生血散高剂量组作用相近 ( P> 0. 05)。
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3. 2 生血散 对注射 CT X 后小鼠 骨髓 CF UGM 形成率的影响
在注射 CT X后第 4d,小鼠骨髓 CFU-GM 的形 成率显著下降 , 但生血散高 低剂量组显示 对 C TX 所致小鼠 CFU-GM 的生长抑制有一定的保护和缓 解作用 ,与 生理盐水相 比较 ,差异 极显著 ( P < 0. 001)。在注射 C TX后第 14d,小鼠 CFU-GM 的生 成明显上升 ,生血散高低剂量组较生理盐水组有明 显差异 ( P < 0. 001) ,生血散高剂量组和碳酸锂组作 用相似 ( P> 0. 05) (见表 2)。 3. 3 生血散对正常小鼠造血组织容量的影响
将骨髓活检组织于 400倍放大下 ,在小梁旁区的 不同部位 ,随机选择 16个视野 ,观察与记录每个视野 内 100个点所击中的目标 ,如果交接点击 中造血组 织 ,即记为 1点 ,共观察 1600个点。按下列公式计算造 血组织的容量百分率:
造 血 组 织 容 量 百 分 率 ( Vo l% ) = 造血组1织60击0 中数× 100%
( 1.浙江省中医院 ,浙江 杭州 310006; 2. 浙江省林科院植物药研究中心 ,浙江 杭州 310023)
摘 要: 目的: 初步探索生血散保护骨髓造血功能的作用机制。方法: 采用大剂量 CT X一次性腹腔注射 法建立小鼠骨髓抑制模型 ,观察生血散对正常及模型小鼠骨髓 C FU-GM 形成率和骨髓造血组织容量的影 响。结果: 生血散对正常小鼠 CFU-GM 形成率和骨髓造血组织容量均有上调作用 ,同时对 CT X所致小鼠 CFU-GM 生成抑制有明显保护和缓解作用 ,并能显著提高模型鼠骨髓造血组织容量。结论: 生血散的作用机 理在于对骨髓造血干细胞的保护和刺激作用。 关键词: 生血散 ; CF U-GM 形成率 ; 造血组织容量 中图分类号: R285. 5 文献标识码: B 文章编号: 1006-3250( 2000) 12-0020-03
表 1 生血散对正常小 鼠 CFU-GM生成的影响 (x± s )
组 别
n
CF U-GM /2× 105细胞
生理盐水
8
17. 27± 1. 21
碳酸 锂
பைடு நூலகம்
8
24. 33± 3. 42*
生血散Ⅰ
8
20. 28± 2. 57* *
生血散Ⅱ
8
25. 83± 1. 64* △
注: 与 生理盐水组 比较: * P < 0. 001,* * P < 0. 001;与碳 酸锂组比较: △ P> 0. 05
Abstract: Objectiv e: To o bserv e the ef fects of Buyang Huanwu Injecti on o n the plat elet activa ting facto r ( PAF ) o f rat s wi th ex peri mental v eno us throm bus. M ethods: Rat model s wi th v eno us ex perimental throm bus w ere made and the cont ent of P AF was measured by bioassay. Result s: The dry wei ght of v enous throm bus and the th rombus-w eigh t i ndex w ere ma rkedly reduced ( P < 0. 05) . The cont ent of ra ts ' PAF in v enous blo od prio r and subsequent to throm bo si s and the percentag e o f v enous throm bo sis w ere no t a ff ected. Conclusio n: All the result s abov e sugg est t ha t Buy ang Hua nw u Injecti on has pa rticula rly i nhibi ted to the g row th of venous throm bus, but has no eff ect o n of t hrombosis and co nt ent o f PAF.