高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的含量

高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的

含量

【摘要】目的成立测定三金胶囊中积雪草苷的高效液相色谱法（HPLC）含量分析方式。方式以C18柱，乙腈水为流动相，采纳梯度洗脱，流速为min，检测波长205nm。结果积雪草苷的峰与其他色谱峰分离良好，在～ml范围内线性良好，回归方程为y=2×106x+（r=1），平均回收率为%；RSD=%（n=5）。结论该方式简便，结果准确，适用于三金胶囊质量的操纵。

【关键词】高效液相法梯度洗脱三金胶囊积雪草苷

［Abstract］ Objective To establish a method which can determine the asiaticoside in Sanjin soft gelatin Using C18 reversed phase column，mobile phase as acetonitrile water with gradient elution，the velocity of flow was ml/min，detection wavelength was at 205 Asiaticoside was separated well from other showed a good linear curve in the range of ~ mg/ml，y=2×106x+（r=1），the average recovery rate was %（RSD=%）.Conclusion The method was simple and accurate for quality control of the Sanjin soft gelatin capsule.

［Key words］ HPLC；gradient elution；Sanjin soft gelatin

capsule；assiaticoside

三金胶囊是由胶囊剂改良剂型为软胶囊而来，系由金樱根、积雪草等五味中药材组成。本品具有清热解毒，利湿通淋，益肾之功效，用于下焦湿热，热淋，小便短赤，淋沥涩痛，急、慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿路感染属肾虚湿热下注证等。而且软胶囊较原剂型具有生物利费用高，密封性好，含量准确，外形美观等优势［1，2］。积雪草苷含量测定有滴定分析法、薄层扫描法和高速逆流分派法等，但这些方式操作复杂，且误差也较大，采纳高效液相色谱法更适合于本品的质控［3，4］。由于本品的成份复杂，对测定有干扰，实验证明用HPLC 梯度法测定三金胶囊中积雪草苷简便、快速、准确、靠得住。

1仪器和试药

Lab alliance高效液相色谱仪，ShimadzuUV2100紫外可见分光光度计，Sartorius电子天平；三金胶囊（由广西药物研究所提供）；积雪草苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：892 200102）；乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2色谱条件

色谱柱：KromasilC18（×250mm）；流动相：乙腈水梯度洗脱，程序见表1；柱温：25℃；流

速：min；检测波长：205nm；进样量：20μl。表1乙腈水梯度洗脱程序

3方式和结果

标准曲线的制备周密称取积雪草苷对照品，置于25ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准储蓄液。别离周密量取储蓄液、、、、于10ml量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，配成浓度为、、、、ml的标准溶液。别离吸取上述不同浓度标准溶液20μl，依2项色谱条件进样测定，见表2。表2积雪草苷对照溶液浓度与对应的峰面积由图1可知：积雪草苷在浓度为～ml范围内时，浓度与积雪草苷峰面积呈良好的线性关系。

对照品溶液及供试品的配制

对照品溶液的制备周密称取积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得（图2）。

图2积雪草苷对照品HPLC色谱图

供试品溶液的制备周密称取本品内容物，周密加入甲醇50ml，称定重量，置于水浴上加热回流45min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，弃去初滤液，周密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣利用L氢氧化钠溶液30ml，溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，弃去水层，归并正丁醇层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（图3）。

图3三金胶囊样品HPLC色谱图

干扰实验取无积雪草的阴性样品，按项下的方式提取，测定。结果在积雪草苷相应的保留时刻无吸收峰，说明处方中其他成份对测定无阻碍（图4）。

图4积雪草阴性样品HPLC色谱图

周密度实验在2项色谱条件下，取项下对照品溶液（ml）持续测定5次，结果见表3。实验证明，本法的周密度良好。表3周密度实验结果

重复性实验对同一供试品溶液（批），在2项色谱条件下平行测定

5份，5份的平均值为519264，RSD=%（n=5），见表4。实验证明，本法的重复性良好。表4重复性实验结果

加样回收率实验周密称取已知含量为g的三金胶囊（批）内容物约，共5份，别离精准加ml积雪草苷对照品溶液，按项下方式提取，测定，计算回收率，结果积雪草苷的平均回收率为%，RSD=%（n=5），符合定量分析的要求，见表5。

样品测定在2项下的色谱条件下，本品3批样品中的积雪草苷含量，见表6。结果为3批样品每粒的平均含量为，依照平均含量的80%拟定该产品的最

低含量限度为粒。表5积雪草苷回收率测定结果表6样品测定结果

4讨论

检测波长积雪草苷紫外吸收很弱，仅在近紫外区有结尾吸收，故流动相有机溶剂选择本底紫外

吸收相对较弱的乙腈。对积雪草苷标准品溶液在190～400nm进行紫外扫描，其最大吸收峰在197nm处。但检测波长低于200nm，溶剂本身的吸收和噪音的阻碍也会加大，综合考虑，以205nm作为检测波