高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的含量

高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的
含量
【摘要】目的成立测定三金胶囊中积雪草苷的高效液相色谱法（HPLC）含量分析方式。

方式以C18柱，乙腈水为流动相，采纳梯度洗脱，流速为min，检测波长205nm。

结果积雪草苷的峰与其他色谱峰分离良好，在～ml范围内线性良好，回归方程为y=2×106x+（r=1），平均回收率为%；RSD=%（n=5）。

结论该方式简便，结果准确，适用于三金胶囊质量的操纵。

【关键词】高效液相法梯度洗脱三金胶囊积雪草苷
［Abstract］ Objective To establish a method which can determine the asiaticoside in Sanjin soft gelatin Using C18 reversed phase column，mobile phase as acetonitrile water with gradient elution，the velocity of flow was ml/min，detection wavelength was at 205 Asiaticoside was separated well from other showed a good linear curve in the range of ~ mg/ml，y=2×106x+（r=1），the average recovery rate was %（RSD=%）.Conclusion The method was simple and accurate for quality control of the Sanjin soft gelatin capsule.
［Key words］ HPLC；gradient elution；Sanjin soft gelatin
capsule；assiaticoside
三金胶囊是由胶囊剂改良剂型为软胶囊而来，系由金樱根、积雪草等五味中药材组成。

本品具有清热解毒，利湿通淋，益肾之功效，用于下焦湿热，热淋，小便短赤，淋沥涩痛，急、慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿路感染属肾虚湿热下注证等。

而且软胶囊较原剂型具有生物利费用高，密封性好，含量准确，外形美观等优势［1，2］。

积雪草苷含量测定有滴定分析法、薄层扫描法和高速逆流分派法等，但这些方式操作复杂，且误差也较大，采纳高效液相色谱法更适合于本品的质控［3，4］。

由于本品的成份复杂，对测定有干扰，实验证明用HPLC 梯度法测定三金胶囊中积雪草苷简便、快速、准确、靠得住。

1仪器和试药
Lab alliance高效液相色谱仪，ShimadzuUV2100紫外可见分光光度计，Sartorius电子天平；三金胶囊（由广西药物研究所提供）；积雪草苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：892 200102）；乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2色谱条件
色谱柱：KromasilC18（×250mm）；流动相：乙腈水梯度洗脱，程序见表1；柱温：25℃；流
速：min；检测波长：205nm；进样量：20μl。

表1乙腈水梯度洗脱程序
3方式和结果
标准曲线的制备周密称取积雪草苷对照品，置于25ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准储蓄液。

别离周密量取储蓄液、、、、于10ml量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，配成浓度为、、、、ml的标准溶液。

别离吸取上述不同浓度标准溶液20μl，依2项色谱条件进样测定，见表2。

表2积雪草苷对照溶液浓度与对应的峰面积由图1可知：积雪草苷在浓度为～ml范围内时，浓度与积雪草苷峰面积呈良好的线性关系。

对照品溶液及供试品的配制
对照品溶液的制备周密称取积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得（图2）。

图2积雪草苷对照品HPLC色谱图
供试品溶液的制备周密称取本品内容物，周密加入甲醇50ml，称定重量，置于水浴上加热回流45min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，弃去初滤液，周密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣利用L氢氧化钠溶液30ml，溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，弃去水层，归并正丁醇层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（图3）。

图3三金胶囊样品HPLC色谱图
干扰实验取无积雪草的阴性样品，按项下的方式提取，测定。

结果在积雪草苷相应的保留时刻无吸收峰，说明处方中其他成份对测定无阻碍（图4）。

图4积雪草阴性样品HPLC色谱图
周密度实验在2项色谱条件下，取项下对照品溶液（ml）持续测定5次，结果见表3。

实验证明，本法的周密度良好。

表3周密度实验结果
重复性实验对同一供试品溶液（批），在2项色谱条件下平行测定
5份，5份的平均值为519264，RSD=%（n=5），见表4。

实验证明，本法的重复性良好。

表4重复性实验结果
加样回收率实验周密称取已知含量为g的三金胶囊（批）内容物约，共5份，别离精准加ml积雪草苷对照品溶液，按项下方式提取，测定，计算回收率，结果积雪草苷的平均回收率为%，RSD=%（n=5），符合定量分析的要求，见表5。

样品测定在2项下的色谱条件下，本品3批样品中的积雪草苷含量，见表6。

结果为3批样品每粒的平均含量为，依照平均含量的80%拟定该产品的最
低含量限度为粒。

表5积雪草苷回收率测定结果表6样品测定结果
4讨论
检测波长积雪草苷紫外吸收很弱，仅在近紫外区有结尾吸收，故流动相有机溶剂选择本底紫外
吸收相对较弱的乙腈。

对积雪草苷标准品溶液在190～400nm进行紫外扫描，其最大吸收峰在197nm处。

但检测波长低于200nm，溶剂本身的吸收和噪音的阻碍也会加大，综合考虑，以205nm作为检测波
长。

实验说明在2项下的色谱条件下，检测波长选在205nm，检测灵敏度能达到令人中意的结果，且结果稳固靠得住。

洗脱程序积雪草中成份很多，积雪草苷为三糖苷，极性较大。

梯度洗脱时流速太高或流动相中乙腈比例上升过快均会使分离度不佳，因此流动相中乙腈的比例应该是缓慢地上升，经多次实验，确信了min 的流速及2项下的洗脱程序，积雪草苷峰分离较好且峰形良好。

本文实验结果说明，采纳高效液相色谱方式，能方便准确的测定三金胶囊中有效成份积雪草苷的含量，适用于该制剂的质量操纵。

【参考文献】
1黄敏，张钧寿，谢跃进.软胶囊剂稳固性研究进展.中国医药工业杂志，2000，31（3）：137139.
2陈健，张兆宸.软胶囊剂的进展和应用.天津药学，1996，8（4）：3234.
3陈瑶，秦路平，郑汉臣，等.RP HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量.中成药，2000，22（3）：227.
4曾建国，宋云飞.HPLC法测定积雪草中三萜类化合物的含量.基
层中药杂志，2000，14（6）：7.。