牛上皮细胞中有效表面标记物的筛选

收 稿 日 期 ：２０１８０７２４ 作者简介：王燕琴（１９８０－ ），女，宁夏银川人，讲师，博士，主要从事微生物学研究。
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动 物 医 学 进 展 ２０１９ 年 第 ４０ 卷 第 ７ 期 （总 第 ３１３ 期 ）
摘 要 ：动 物 上 皮 细 胞 容 易 被 多 种 病 毒 感 染 ，上 皮 细 胞 表 面 标 记 物 的 检 测 可 以 作 为 表 征 上 皮 细 胞 状 态 的 一 种 手 段 ，但 是 大 多 数 上 皮 细 胞 表 面 标 记 物 也 会 在 上 皮 来 源 的 肿 瘤 细 胞 中 表 达 。 为 了 选 择 高 效 、独 特 的 上 皮
动 物 医 学 进 展 ，２０１９，４０（７）：７７８２ ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
牛上皮细胞ห้องสมุดไป่ตู้有效表面标记物的筛选
王 燕 琴１，２，王 易 之２，智 宇３
（１．内蒙古集宁师范学院，内蒙古乌兰察布 ０１２０００；２．西北农林科技大学，陕西杨凌 ７１２０００； ３．内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古呼和浩特 ０１００５１）
层恶性肿瘤检测时采用 ＡＥ１ 和 ＡＥ３ 作 为 表 面 标 记 物；脊索瘤 细 胞 表 达 ＣＫ 和 上 皮 膜 抗 原 （ＥＭＡ）；肾 外 恶 性 横 纹 肌 瘤 细 胞 表 达 ＥＭＡ，ＡＥ３。ＣＫ 和 ＥＭＡ 可以在乳腺癌［３］、血管 肉 瘤［４］、平 滑 肌 肉 瘤［５］、
乳头状甲状腺癌［６］等多种肿瘤细胞中表达。ＣＫ７ 和 ＥＭＡ 在子宫内膜 样 腺 癌 和 透 明 细 胞 癌 中 普 遍 为 阳 性。
中 图 分 类 号 ：Ｓ８５２．３３；Ｓ８５７．４
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００７５０３８（２０１９）０７００７７０６
上皮细胞在许多病毒复制过程中可通过模式识 别受体感应病 毒 的 病 原 相 关 分 子 模 式，从 而 识 别 病 毒，并启动抗 病 毒 固 有 免 疫 应 答。 上 皮 细 胞 常 常 被 用作模式细胞，而 上 皮 细 胞 的 鉴 定 通 常 要 到 表 面 标 记物。上皮细胞中含有大量亚型的特异性标记物。 常用的 上 皮 细 胞 表 面 标 记 物 包 括 细 胞 角 蛋 白 （ｃｙ ｔｏｋｅｒａｔｉｎ，ＣＫ）、上 皮 膜 抗 原 （ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ，ＥＭＡ）、Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 和 Ｄｅｓｍｏｐｌｉｎｓ（ＤＳＰ）。 ＣＫ 是上皮细胞生 长、分 化 及 成 熟 的 特 征 性 标 志 物， 角膜再生 医 学 组 织 工 程 上 皮 细 胞 片 利 用 ＡＥ５（ｃｙ ｔｏｋｅｒａｔｉｎ３／２ｐ）和 ＺＯ１（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１／１０）抗 体 作 为 上皮标记物，涉及到角膜的实验则大多 采 用 ＡＥ５ 作 为标志物。ＺＯ１和 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ也常被用作标记物来 检测上皮细胞是否丢失［１］。ＤＳＰ 是上皮细胞 和 心 肌 细胞间质斑块中主要的蛋白质。上皮细胞标记物也 会在上皮来源的肿瘤 细 胞 中 高 效 表 达。 比 如，ＥＭＡ 是一种广泛表 达 于 上 皮 组 织 的 抗 原，也 是 正 常 脑 膜 和所有肿瘤的阳性抗原［２］。卵 巢 周 围 原 始 神 经 外 胚
标记物，采用蛋白质印迹法和间接免疫荧光技术，在牛肾上皮细胞（ＫＥ）、舌上皮细 胞（ＴＥ）、甲状 腺 上皮 细胞 （ＴＹＥ）以 及 Ａ５４９ 细 胞 和 ＳＷ４８０ 细 胞 中，检 测 了 ＡＥ３（ｂａｓｉｃｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ）、ＡＥ５（ＣＫ ３／２ｐ）、ＣＫ７、ＬＨ１ （ＣＫ１／１０）、ＥＭＡ（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ）、Ｄｅｓｍｏｐｌａｋｉｎ Ⅰ／Ⅱ（ＤＳＰ Ⅰ／Ⅱ）、Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 和 ＺＯ１（ｚｏｎａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ１）等８种上皮标记物的 表 达。结 果 显 示，与 阴 性 对 照 相 比，ＡＥ３、ＡＥ５、ＣＫ７、ＥＭＡ 及 ＤＳＰ Ⅰ／Ⅱ 在上皮细胞和上皮细胞来源的 Ａ５４９、ＳＷ４８０ 肿 瘤 细 胞 中 表 达 良 好；Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 仅 在 上 皮 细 胞 中 表 达；ＬＨ１ （ＣＫ１／１０）和 ＺＯ１在所有被检测的细胞中都没有表达。结果表明，ＡＥ３、ＡＥ５、ＣＫ７、ＥＭＡ 及 ＤＳＰ Ⅰ／Ⅱ可以 作 为 有 效 的 上 皮 细 胞 及 上 皮 来 源 的 肿 瘤 细 胞 标 记 物 ，Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 可 以 作 为 特 异 性 的 上 皮 细 胞 标 记 物 。 关 键 词 ：上 皮 细 胞 ；肿 瘤 细 胞 ；表 面 标 记 物 ；间 接 免 疫 荧 光 ；细 胞 角 蛋 白 ；细 胞 紧 密 连 接
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 １．１．１ 细胞和培养基 ＳＷ４８０ 和 Ａ５４９ 细 胞，购 自 ＡＣＣＡ 公司；牛肾脏、舌 和 甲 状 腺 组 织，采 集 自 西 安 中乐屠宰场，按 照 文 献 ［７］中 的 方 法 分 离 上 皮 细 胞； 培养基为 ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基（补充１００ｍＬ／Ｌ 的新 生牛血清，２ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ谷 氨 酰 胺，１０ｎｇ／ｍＬ 表 皮 生长因子，１００Ｕ／ｍＬ 青霉素，１００Ｕ／ｍＬ 链霉素）。 １．１．２ 试 剂 ＤＭＥＭ／Ｆ１２ 粉 末，ＳＩＧＭＡ 公 司 产 品；胎牛血 清，Ｈｙｃｌｏｎｅ公 司产 品；表 皮生 长 因 子，北 京灵宝公司产品；Ｌ谷氨酰胺，西安 拉维 亚 生物 科技 有限公司产品。
本研究比较这８种常用的上皮细胞表面标记物 在肾上 皮 细 胞 （ｋｉｄｎｅｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＫＥ）、舌 上 皮 细胞（ｔｏｎｇｕｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＴＥ）、甲 状 腺 上 皮 细 胞 （ｔｈｙｒｏｉｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＴＹＥ）以 及 腺 癌 人 类 肺 泡 基 底上皮细胞 （Ａ５４９）和 人 结 肠 癌 细 胞 （ＳＷ４８０）中 的 表达效率，旨在选择高效、特异性高 的上 皮 细胞 表面 标记物。