海洋生物酶解多肽活性功能研究进展

Ｄｅｓ，２００９，９：１３０９—１３２３．
Ｃ．ＶＡＬＤＥＺ
［２］Ｌ踞Ｌ恁Ｃ Ｊ Ｇ。姒ＴＡＩｉ
ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｉｃ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ Ｄａｉｒｙ
Ｊ
Ｃ，ｅｔ ｍｉＩｋ
ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ
ｉｓｓｕｅｄ ｆｒｏｍ
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｈｉｌｖｅｔｉＣＵＳ［Ｊ］．Ｊ ［３】ＡＴＳＬ＇ＳＨＩ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｅｒｉｒｅｄ ｆｒｏｍ ｗｈｅａｔ
ａｎｔｉＯＸｉｄａｎｔ
ｇｌｕｔｅｎ［Ｊ】．Ｆｏｏｄ
ｓｃｉ
Ｔｅｃｈｎｏｌ
Ｒｅｓ．２００２．８（３）；２２７—２３０． ［６］ＴＨＡ嘲＾ＳＩＲＩＲＡＩ（ｓ，ＰＵＫｃｏＴＨ＾ＭｍＩＧ Ｙ，陬ＥＥａ｛Ａ腿埘Ｓ。ｅｔ
ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｐｈｙｓｉｏｌ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｇｏｏｓｅ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ Ｃ，２０１０，１５ｌ：８４—８９． Ｙ，ＬＩ Ｔ Ｆ．ＹＵ Ｒ
［４］ＡＢＡＹ伽Ｉ
ｐｒｏｔｅｉｎ
Ａ，ＡＹＯＢＡＭＩＴＡＬＥ
Ａ，Ｊ眦Ｏ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｐｅｐｔｉｄｅｓ
ｆｒｏｍ
ｒｉｃｅ
ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００９。２２８：５５３—５６３． ［５】Ｋ岍ＩＯ Ｓ．Ｃ｝Ⅱ强Ｊ Ｒ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅＳ ｗｉｔｈ
１ｙｓｏｚｙｍｅ［Ｊ］．Ｃ唧Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ
ａ１．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
［７］ｓ口屺Ｌ
ｏｆ Ａｒｃａ ６０７－６１９．
ｔｔ
ｅｔ
ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｓｕｂｃｒｅｎａｔａ
ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｒ∞ｐｒｏｔｅａｓｅｓ
Ｕ］．Ｗａｒ Ｄｒｕｇｓ，２００８．６ｌ
ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ
［８］Ｈ轼Ｋ
Ｃ．ＬＵ Ｇ
Ｈ，Ｊ＾Ｏ
ｃ
Ｌ
Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
（下转第１９页）
基金项目：浙江省教育厅、浙江省财政厅研究生创新科研项目（ＹＫ２００８０７２）；浙江省舟山市科技计划海洋重点项目（０９２０１６）：浙 江省新苗人才计划项目（２００８Ｒ４０Ｇ２１１００２８）资助。
３（７．５） 完全依赖（ｏ－２０多Ｙ） １４（３５．０） ３（７．５） １６（４０） ８（２０．０）
７（１７．５）
１９（４７．５）
无变化 死亡 ．恶化一 ５（１２．５）０（０）０（Ｏ） １ｌ（２７．５）０（Ｏ） ｏ（０）
表３ ２组治疗前后ＢＩ计分变化比较例 重度依赖．（２５～４５分） 中度筮塑（５０—７０分） 轻度筮塑（７５—９５坌） ｏ（０） ２０（４５．０） ６（１５） ５（１２．５）ｌＯ（２５） １６（４０．０） １９（４７．５） ５（１２．５）０ １２（３０．０） ９（２２．５）８（２０．０） 独立（１００／＋） ｏ（０） ６０５）
用通腑泄热法治疗脑出血急性期４４例总有效率９５．４％。在临 床上，我们通过观察得出出血量较多的患者急性期以肝阳 上亢和痰热腑实症二型多见，随着病情渐趋稳定，神志转 清，肝风渐平，腑通热退，临床症状亦相应变化，此时以气 虚血瘀为主要矛盾，用药则以补气活血为主。所以临床上 应以“辨证论治”贯穿于治疗始终。临床上我们经过实践 采用中医结合方法治疗高血压脑出血取得了较好疗效。西 医保守治疗我们给予降低颅内压、控制血压等治疗，中医 方面我们进行了中医分期治疗，并且在发病后一周配合针 刺治疗。针刺治疗高血压脑出血目前已经有理论依据，曾 碧梅、郑谅等用针刺可显著升高ＨＤＬ，降低ＬＤＬ，升高ＳＯＤ、 ＧＳＨＰＸ活性，降低ＬＰＯ含量。提示针刺可降低血液的浓、 黏、凝、聚状态，促进氧自由基的清除，减少氧自由基对
参考文献 ［１］ｎＡＶＩＤ
Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄ Ｋ．ＫＡＴｌＥ ｏｆ Ｗ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＵＳｅｄ ｉｎ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ｆｏｏｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｓｏｕｒｃｅｆｆｅｃｔｓ
ｆｒｏｍ Ｏｋａｒａ
Ｓｃｉ．２００２，８５（１１）：２７３３－２７４２．
Ｔ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｉ ０ Ｔｅｃｈｎｏｌ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ
Ｙ，Ｙ∞Ｔ．ＴＥＴＳＵＯ
Ｐ ｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎ【Ｊ］．Ｆｏｏｄ
Ｒｅｓ，２００２．８（４）：３５７—３５９．
Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒａｎ ｄｅｒｉｖｅｄ
注：组内治疗后与治疗前比较，’ｐ＜Ｏ．Ｏｌ，治疗后治疗组与对照组比较６ｐ＜Ｏ．０１ 表２ ２组临床疗效比较例（％） 组别 治疗组（ｎ＝４０） 对照组（ｎ＝４０） 组别 治疗组 （ｎ＝４０） 对照组 （ｎ＝４０） 时间 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 基本治愈
１０（２５）
显著进步
１２（３０）
进步
１３（３２．５）
论著
Ｔｒｅａｔｉｓｅ
中国民族民间医药
ＣｈｉＪｌ蛳Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ
Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
・１７・
海洋生物酶解多肽活性功能研究进展
王静杨永芳丁国芳杨最素郁迪黄芳芳郑玉寅
浙江海洋学院食品与药学学院，浙江舟山
３１６００４
【摘要】本文对近几年来采用酶解方法从海洋生物蛋白中获取生物活性肽的相关研究进行了综述，介绍了该类生物活性肽抗氧化、 抗高血压、抗肿瘤、抗血栓形成等活性功能的研究现状，描述了各研究的蛋白来源、酶的选择及生物活性肽的分离纯化手段等，并对该研 究领域提出展望，旨在为以后的相关研究提供参考。 【关键词】海洋生物；酶解多肽；活性功能 【中图分类号】Ｒ２８５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００７—８５１７（２０１０）１０—０１７—２
洋鱼类中提取蛋白质，用复合蛋白酶和碱性蛋白酶分别对
其水解，并检测各酶解物对人类乳腺癌细胞ｌｌｃ卜７／６和ＭＤＡ一 岫一２３ １的增殖抑制作用，结果证实，Ｓ．ｓａｌａｒ、Ｇ．ｍｏｒｈｕａ、 Ｐ．ｐｌａｔｅｓｓａ和Ｍ．Ｐｏｕｔａｓｓｏｕ等４种鱼蛋白的酶解物具有很强 的抑制乳腺癌细胞增殖的作用。 ４展望和结语 综上所述，利用酶解方法从海洋生物的蛋白中获取活 性肽所选用的蛋白酶主要有植物来源的蛋白酶、动物来源 的蛋白酶以及微生物来源的蛋白酶，其分离纯化方法主要 有超滤法、离子交换层析法、分子筛交换层析法及反相高 效液相色谱技术等，对于活性功能的研究主要集中在抗氧 化和降血压方面，在抗血栓和抗肿瘤功能方面也有少量的 文献给予了报道。目前，针对生物活性肽所开发出来的药
作者简介：丁国芳（１９５８一），男，浙江舟山人．教授，硕士生导师，研究方向：海洋保健食品、海洋药物。
万方数据
论著
Ｔ，＿ｃａｔｉｓｅ
中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｍｄ
ｏｆ
Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｅｔｈｓｏｐｈａｒｍａｃｙ
・１９・
检验，计数资料用ｘ２检验，等级资料用秩和检验进行统计学 处理。 ３治疗结果 两组患者均完成了治疗疗程，均无死亡病例、无并发 症、无脱落病例；中医症状评分、神经功能缺损评分、治 疗前后ＢＩ计分变化及疗效比较如下： 治疗前后血肿吸收率比较：治疗组为（Ｏ．８１４±０．３５５）， 对照组为（ｏ．６６９±０．２９５），２组比较有显著性差异（ｐ＜ｏ．０１）。 两组中医症状和神经功能缺损程度评分变化比较见表１，两 组治疗后临床疗效比较见表２，其中治疗组显著进步率５５％， 有效率８７．５％；对照组分别为２５％、７３．５％，两组间显著进步 率比较有显著性差异（ｐ＜Ｏ．０５），两组治疗前后ＢＩ计分变 化比较见表３。
表１ ２组治疗前后中医症状、神经功能缺损程度评分比较分 组别 治疗组 对照组 中医症状评分 治疗前
２８．１４±４．２５ ２９．２５±６．２５
神经功能缺损评分 治疗２８ｄ
７．３８±２．３９— １３．２５±２．３９’
治疗前
２５．８７±６．７４ ２３．４５±８．２３
治疗２８ｄ
１１．６５土４．０６＊ｏ １５．５３±５．２７’
通过测定对活化部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）的延长作用， 来评价各酶解多肽的抗凝活性，结果显示，胰凝乳蛋白酶 解多肽组分的抗凝活性最强。对该组分经纯化后得到了１个 分子量为１２．０１ ｋＤａ的多肽ＹＡＰ。经体外实验证实，ＹＡＰ可以 与活化的凝血因子ＸＩＩ和血小板整合素结合，从而抑制血栓 的形成。Ｐｉｃｏｔ等”副从大西洋鲑鱼、大西洋真鳕、比目鱼、 非洲鳕、大西洋裸颊鲷、阿拉斯加鳕和腔鳞荆鲨等多种海
生物活性肽（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）是指 具有优化机体代谢环境、有益于机体健康的一类多肽…。 它们通过作用于机体的消化系统、心血管系统、免疫系统 和神经系统等多种机体代谢系统，最终起到提高机体免疫 力、减少慢性疾病发生的作用。近几十年来，运用酶解方 式从动植物蛋白中获取生物活性肽一直是国内外研究的热 点，尤其对陆地生物来源的蛋白研究较多，已从中分离提 取出具有免疫调节、抗氧化、抑菌、降血压、抗血栓、抗 肿瘤等心吨１多种生物活性肽。本文旨在综述近年来以酶解方 法从海洋生物蛋白中获取生物活性肽的研究情况，重点描 述蛋白来源、酶的选择、酶解多肽的提取分离手段及其活 性功能等。 １抗氧化活性肽 各国学者对于酶解多肽抗氧化功能已进行了大量的研 究。Ｓｏｎｇ等Ⅲ使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶 对毛蚶蛋白进行酶解，测定各酶解液对ＤＰＰＨ和Ｈ２０：自由基 的清除作用，证实在所选用的３种蛋白酶中，碱性蛋白酶酶 解液对２种自由基的清除能力最强，ＥＣ。。分别为６．２３ ｍｇ／ｍｌ 和１９．０９ ｍｇ／ｍｌ。Ｈｓｕ等博１从枯草芽孢杆菌中提取出一种肽 链内切酶Ｏｒｉｅｎｔａｓｅ，用该酶酶解金枪鱼蒸煮液，将酶解物 纯化后得到３个多肽组分，其分子量分别是１３０５Ｄａ、９３８Ｄａ 和５８４Ｄａ。经测定，这３个多肽均具有很好的抗氧化性能。 Ｋｉｍ等憎。用多种蛋白酶分别对新西兰无须鳕的骨蛋白进行酶 解，分别测定各酶解物对脂质过氧化的抑制作用，并采用 电子自旋共振技术测定各种酶解物对ＤＰＰＨ自由基、羟基、过 氧化氢自由基及超氧化物自由基的抑制作用，结果表明，胃 蛋白酶酶解物具有最强的抑制脂质过氧化及清除各自由基的 作用。对该酶解物分离纯化后，得到１种酶解多肽ＡＰＨＰＨ，该 肽的分子量为１８０１ Ｄａ。 ２抗高血压活性肽 Ｗａｎｇ等¨州首先使用硫酸胺沉淀法从牡蛎组织中提取 蛋白，用胃蛋白酶对该蛋白进行水解，分离纯化出具有体 ＃ｂＡＣＥ抑制活性的９肽，该肽的氨基酸序列为Ｖａｌ—Ｖａｌ—Ｔｙｒ— Ｐｒｏ—Ｔｒｐ－Ｔｈｒ—Ｇｌｎ—Ａｒｇ—Ｐｈｅ，迸一步研究发现，此肽对温度 和ＰＨ值的变化具有稳定性，而且具有抵抗肠道消化酶酶解 的特性。ｗｕ等ｕ¨从芽孢杆菌中提取蛋白酶ＳＭ９８０１１，用此酶 水解鲨鱼肉，纯化后得到４个具有高效抑制ＡＣＥ的２肽，它们 的氨基酸序列分别为：Ｃｙｓ－Ｐｈｅ、Ｇｌｕ－Ｔｙｒ、Ｍｅｔ—Ｐｈｅ、Ｐｈｅ— Ｇｌｕ，相应的分子量分别为２６７ Ｄａ、３０８ Ｄａ、２９５ Ｄａ、２９４ Ｄａ。Ｊｅｕ引等采用复合酶解法对金枪鱼的肝脏进行酶解，得 到３种蛋白酶解物组分的分子量多在１０００－３０００ Ｄａ范围内， 并且都具有抑制ＡＣＥ的活性功能。Ｚｈａｏ等”副采用反复水提方 法从Ａ．ｍｏｌｐａｄｉｏｉｄｅａ体壁中提取出蛋白，采用复合酶水解， 纯化后得到１个活性多肽，该肽抑制ＡＣＥ的ＩＣ５０为１５．９ ｐ Ｍ，经 肠道消化酶作用后活性增加。此外，将该肽作用于自发性高 血压的小鼠后，具有明显的降低小鼠血压的作用。 ３其他活性肽 Ｒａｊａｐａｋｓｅ等”刮用多种蛋白酶分别酶解黄盏鲽骨蛋白，
品及保健类食品已成功上市，并且随着对该领域研究的深
入，生物活性肽的产业化进程也将会加快。蛋白质转化活 性肽类作为获取生物活性肽的一个重要来源已有很长的历 史，对于海洋生物蛋白的研究虽然起步较晚，但进展很快。 此外，随着分子生物技术的研究进展，人们已经从分子水 平上认识了疾病的发生原因，并试图以此作为治疗疾病的靶 点，因此，研究生物活性肽活性功能的同时，与分子生物技 术相结合，在分子水平探索其活性作用机理，对于生物活性 肽的活性功能评价及实现其产业化都具有极其重要的意义。